p27Kipl在肝細胞癌中表達及臨床意義的研究

【摘要】：目的：分析HCC中p27Kipl基因的表達及其臨床意義。方法：收集HCC組織及相應癌旁組織標本各42例，應用免疫組織化學(SP)法，檢測p27Kipl蛋白的表達情況。 結果：21.4％(9/42)的肝癌組織表達p27Kipl蛋白，而癌旁組織的陽性表達率為76.1％(32/42）。兩者比較差異有顯著性意義 (P<0.05)。結論：p27Kipl在肝癌組織中選擇性表達，與腫瘤復發、轉移、血管浸潤等惡性生物學行為有關，與HCC的發展過程中起重要作用。

關鍵詞 ：肝細胞肝癌；p27Kipl蛋白；免疫組織化學原發性

【中圖分類號】R4【文獻標識碼】B【文章編號】1671-8801（2014）06-0107-01

細胞周期的調控是一個極其復雜的過程， 涉及到多因子多層次上的作用， 其中有兩個主要調控點: 一個處于G1 /S 轉折點， 另一個處于G2 /M 轉折點，而p27Kipl主要調控G1 /S 轉折點。因此，p27Kipl異常表達，細胞失去了正常增殖周期中凋亡“開關”的限制，造成細胞異常增殖，致癌癥的發生。

1資料與方法

1．1標本來源

收集河南省人民醫院2008年12月至2013年12月手術患者經病理學檢查證實為肝細胞癌標本42例，包括肝癌組織以及癌旁組織。癌旁組織取材時為距癌結節邊緣2cm以外肝組織，避開壞死區。患者術前均未接受任何化療及其他治療。男32例，女10例，年齡32～80歲，平均64.7歲。25例有肝內轉移，26例有完整包膜，16例包膜不完整或無包膜； 小肝癌(≤5cm )17例， 大肝癌(>5cm)25例。

1.2主要試劑

兔抗人p27Kip多克隆抗體武漢博士德生物試劑有限公司。

1.3實驗方法

分別用免疫組織化學鏈霉卵白素一生物素一辣根過氧化物酶復合物(streptavidin peroxidase conjugated method，SP)法檢測p27Kip蛋白表達，以試劑盒中已知陽性切片為陽性對照，以PBS液(PH=7.4)代替一抗為陰性對照。抗p27Kip抗體稀釋度為 1：20，操作步驟按試劑盒說明書要求步驟進行。

1.4 P27kip1蛋白的陽性表達的判定

p27Kipl的陽性表達主要細胞核，以腫瘤細胞核出現棕黃色顆粒為陽性細胞，在200倍400倍光鏡下至少觀察5個視野，計數100個細胞中腫瘤陽性細胞＞5％定義為陽性表達，≤5％為陰性表達。

1.5 統計方法

計量數據用均數±標準差（X(—)±S）表示，采用SPSS軟件11.0行單因素方差分析、X檢驗，檢驗水準а=0.05

2結果

2.1 P27kip1蛋白在肝癌及癌旁組織中的表達

在21.4﹪(9/42)的肝癌組織內可見p27Kipl呈陽性表達，陽性表達顆粒主要位于細胞核，在同一組織標本中p27Kipl表達呈均一性且隨腫瘤惡性程度的增加，肝癌組織中p27Kipl蛋白的表達明顯下降，而癌旁組織的表達明顯高于肝癌組織。

2.2 P27kip1蛋白的表達與肝癌患者臨床病理學指標之間的關系

P27kip1的表達與患者性別、年齡無顯著相關性，而與腫瘤大小及有無肝內轉移密切相關。

3討論

p27kip1是細胞周期負性調控因子，主要抑制Cy-cline-CDK2和CyclinD-CDK4等G1期激酶復合物阻滯細胞于G1期防止細胞過度增殖并與細胞凋亡有著密切的聯系，是細胞周期負性調控因子的典型代表，是公認的抑癌基因[1]。WangS 等[2]研究發現 p27kipl通過磷酸化 Statl 抑制 Ras 系統信號轉導而抑制CDK，進而抑制細胞從Gl 期到S 期的轉變。Ito等[4]在研究HCC中G1-S期調控因子的表達時發現HCC中p27Kipl平均LI明顯高于癌旁組織及正常肝組織，以早期HCC中LI最高，而在進展期肝癌中p27Kipl 明顯下降，認為p27Kipl可能在HCC發生早期起負調控作用。彭志海等[5]研究發現，肝癌組織中p27Kipl蛋白表達低者，端粒酶陽性率明顯增高，腫瘤的惡性程度也較高，與不良預后有關。王科等[6]檢測33例原發性肝癌和5例正常肝組織標本，結果發現P27蛋白表達的減少和原發性肝癌的進展、惡性程度、腫瘤的大小有顯著相關性。我們的結果顯示，p27Kipl在肝癌組織中的陽性表達率為21.4%(9/42)，而在癌旁組織中的陽性表達率為76.1%(32/42)，兩者比較差異有統計學意義（P＜0.05）。故可以說明，p27Kipl蛋白表達的降低，對肝癌細胞的負調控作用減弱，使得腫瘤細胞得以生長。

參考文獻：

[1] Solbach C， Roller M， Fellbaum C et al. PTTG mRNA expression in primary breast cancer: a prognostic marker for lymph node invasion and tumor recurrence[J]. Breast， 2004， 13(1): 80-81.

[2] Wang S， Raven JF， Durbin JE， et a1. Statl phosphorylation determines Ras oncogenicity by regulating p27kip1[J]. PlosOne， 2008， 3(10):3476.

[3] 彭志海，劉道永，唐華美，等.肝細胞癌端粒酶活性與細胞周期抑制蛋白p27Kipl的相關性研究.中華實驗外科雜志，2001，18（4）：321-322.

[4] 王科，王學浩，張峰，等. p27Kipl蛋白在肝細胞肝癌組織中的表達及意義.肝膽外科雜志，2002，2(10):71-73.

通訊作者：薛煥洲