紅曲保健食品中洛伐他汀的含量測定研究

趙海珍 曹坤

【摘要】目的 建立紅曲保健食品中洛伐他汀的含量測定方法。方法 采用Hypersil C18（4.6×250mm，5μm），以甲醇-水-磷酸（75：25：0.2）為流動相，流速1.0mL/min，檢測波長238nm，進樣10μL。結果 線性：洛伐他汀在0.205～1.845μg濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系；回收率：平均回收率為99.89%，RSD為1.05%。結論 本法簡便、快速、準確，可作為紅曲保健食品中洛伐他汀的質控方法。

【關鍵詞】HPLC；恩替卡韋分散片；含量測定

紅曲是以秈米為原料，采用現代生物工程技術分離出優質的紅曲霉菌（monascuspurpureus）經液體深層發酵精制而成的一種純天然、安全性高、有益于人體健康的食品添加劑。紅曲內含有多種他汀類成分（最主在的存在形式為酸式和內酯式），輔助降血脂功效顯著，因此而被廣泛的應用于保健食品領域，目前，國內生產企業大多采用《保健食品功效成分及衛生檢驗規范》中的方法測定洛伐他汀含量，原理是將不同存在形式的洛伐他汀經預處理轉化為內酯式，采用內酯式對照品定量，從而控制保健食品質量。然而，經我中心研究表明：該方法萃取程序受樣品狀態影響嚴重，并不能完全保證紅曲中的洛伐他汀成分完全被檢出而經常會造成檢驗結果偏低，影響實驗人員正確的結果判定，本文采用堿化預處理方法，將不同存在形式的洛伐他汀轉化為酸式結構，再經HPLC法測定含量，樣品處理方法簡便，結果準確可靠。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 Waters515型高效液相色譜儀，Waters2487紫外檢測器。

1.1.2 試劑 甲醇為色譜純，水為超純水，磷酸為色譜純，氫氧化鈉為分析純，洛伐他汀對照品（購自中國藥品生物制品檢定所），紅曲保健食品制劑均為本廠自制。

2 試驗方法與結果

2.1 色譜條件

Hypersil C18（4.6×250mm，5μm），以甲醇-水-磷酸（75：25：0.2）為流動相，流速1.0mL/min，檢測波長238nm，進樣10μL。理論塔板數按洛伐他汀峰計算應不低于3000，洛伐他汀峰與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。

2.2 溶液的配制

2.2.1 標準儲備液的制備 準確稱取洛伐他汀標準品50mg，加入流動相并定容至100mL。此溶液每mL含0.5mg洛伐他汀。

2.2.2 標準使用液的制備 精密量取上述標準儲備液1mL用0.2mol/L氫氧化鈉溶液定容至5mL，50℃條件下超聲1.5小時，放置至室溫后靜置1小時。此溶液每mL含100μg洛伐他汀。

2.2.2 供試品溶液制備 取樣品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于洛伐他汀50mg）于100 mL量瓶中，加入60mL75%乙醇搖勻，室溫下超聲50min，加入75%乙醇定容至刻度，冷卻至室溫后以3000r/min的旋轉速度離心10min，取上清液，用0.45μm微孔濾膜過濾，精密吸取續濾液1mL置5mL量瓶中，用0.2mol/L氫氧化鈉溶液定容，50℃條件下超聲1.5小時，放置至室溫后靜置1小時。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗

按處方配制不含紅曲的空白片，依法測定，結果在洛伐他汀出峰處無吸收，故空白輔料不干擾含量測定。

2.3.2 線性關系

精密稱取洛伐他汀對照品0.1025g，依法配制標準儲備液、標準使用液，濃度為205μg/mL。精密量取1.0、3.0、5.0、7.0、9.0mL，分別置10mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻；精密量取10μL分別注入高效液相色譜儀，以峰面積為縱坐標，對照品濃度為模坐標進行線性回歸，繪制標準曲線，結果表明，在0.205～1.845μg范圍內呈線性關系，得回歸方程：A=4.902×105C+5.882×104 r=0.9999。

2.3.3 精密度試驗

取線性關系試驗項下（濃度為102.5μg/mL）的對照品溶液，精密量取10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，連續進樣6次RSD%為0.29%，方法精密度良好。

2.3.4 穩定性試驗

取含量測定線性關系試驗項下（濃度為102.5μg/mL）的供試品溶液，分別于0、1、2、3小時精密量取10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結果RSD值小于2%，表明含量測定溶液在3小時內測定穩定。

2.3.5 回收率試驗

取相當于20片的主藥量與輔料量，精密稱定，混合均勻，研細，精密稱取細粉適量（約相當于洛伐他汀40mg、50mg、60mg）各三份，分別置100 mL量瓶中，加入60mL75%乙醇搖勻，室溫下超聲50min，加入75%乙醇定容至刻度，冷卻至室溫后以3000r/min的旋轉速度離心10min，取上清液，用0.45μm微孔濾膜過濾，精密吸取續濾液1mL置5mL量瓶中，用0.2mol/L氫氧化鈉溶液定容，50℃條件下超聲1.5小時，放置至室溫后靜置1小時。取線性關系試驗項下（濃度為102.5μg/mL）的供試品溶液，作為對照品溶液。精密量取上述溶液各10μL分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結果：平均回收率為99.88%，RSD為1.05%。本方法準確度良好。

3 討論

紅曲中洛伐他汀存在形式多樣，其主要為酸式和內酯式結構，據文獻報道：洛伐他汀含量測定方法有3種：第一種是分別測一內酯和開環形式，但有機溶劑提取后除了內酯與開環形式外，尚含有有機溶劑和洛伐他汀的酯化形式，檢測結果不準確；第二種是酯化處理將酯式形式轉化為內酯形式，測定其總量，而實際上很難轉化完全；第三種是堿化處理將內酯式轉化為酸式形式，測定其總量，因內酯式僅在純甲醇中較為穩定，在水-醇溶劑中酸式形式更穩定。本文采用第三種方法對紅曲保健食品進行含量測定，回收率接近100，方法科學、準確、可靠。并且，我中心通過對含量測定堿化條件的充分篩選，使樣品預處理過程簡便快捷。

參考文獻

[1]張小茜，周富榮，石濟民.高效液相色譜法測血脂康膠囊及紅曲中洛伐他汀的含量.中國中藥雜志，1997，22（4）：222～224.

[2]羅仁才，孫開奇，謝申猛，韓英.趙妍平紅曲中洛伐他汀總量的測定方法.衛生研究，2003，32（2）：157～158.