乳癖舒片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

胡軍林顧承剛吳 寧

（1 湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，湖北 武漢 430064；2 武漢藥谷科技開發(fā)有限公司，湖北 武漢 430070）

乳癖舒片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

胡軍林1顧承剛2吳 寧2

（1 湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，湖北 武漢 430064；2 武漢藥谷科技開發(fā)有限公司，湖北 武漢 430070）

目的建立乳癖舒片的質(zhì)量控制方法。方法用薄層色譜法對(duì)乳癖舒片中的丹參、延胡索、土貝母、赤芍進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法，以芍藥苷為對(duì)照品，測定乳癖舒片中赤芍的含量。色譜柱：Eurospher-100 4.6×150 mm 5 μm；流動(dòng)相：乙腈-水（12∶88）；檢測波長：230 nm。結(jié)果在薄層色譜中均能檢出丹參、延胡索、土貝母、赤芍；含量測定中芍藥苷線性范圍0.178～1.78 μg（r=0.9999），回收率為100.68%，RSD=0.73%（n=6）。結(jié)論本方法操作簡便，靈敏度高，專屬性和重線性好，可有效地控制乳癖舒片的質(zhì)量。

乳癖舒片；芍藥苷；反相高效液相色譜法；丹參；延胡索；土貝母；赤芍

乳癖舒片由瓜蔞皮、蒲公英、丹參、赤芍、土貝母、柴胡、延胡索等七味中藥組成，由乳癖舒膠囊改變制劑成型工藝而成，具有舒肝解郁，活血解毒，軟堅(jiān)散結(jié)之功效，用于肝氣郁結(jié)，毒瘀互阻所致的乳腺增生，乳腺炎。原膠囊劑收載于中華人民共和國國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)地標(biāo)升國標(biāo)外科分冊，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：WS-10152-（ZD-0152）-2002[1]。在將原劑型改變劑型的研究過程中，對(duì)新制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，以控制本品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（北京創(chuàng)新通恒科技有限公司），型號(hào)P3000，檢測器3000UV；CQ250超聲波儀（上海超聲波儀器廠），硅膠G（青島海洋化工廠），羧甲基纖維素鈉（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。乳癖舒片由武漢藥谷科技開發(fā)有限公司提供（批號(hào)20090701、20090702、20090703、20090801、20090802、20090803）；芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)110736-200421供含量測定用）、丹參酮ⅡA對(duì)照品（批號(hào)110766-200402供含量測定用）、延胡索乙素對(duì)照品（批號(hào)110726-200307供含量測定用）、土貝母苷甲對(duì)照品（批號(hào)1536-200001供含量測定用）均由中國食品藥品檢定研究院提供，乙腈為色譜純，水為重蒸水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參的薄層色譜鑒別[1]

取本品20片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用乙醚振蕩萃取3次，每次20 mL，預(yù)留水層，乙醚液合并，水浴揮干，殘?jiān)脽o水乙醇2 mL溶解，作為供試品溶液。另取不含丹參的自制樣品20片，同供試品溶液的制法制成陰性對(duì)照溶液。取丹參酮ⅡA對(duì)照品，用無水乙醇配制成0.5 mg/mL的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（9.5∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干。自然光下觀察，結(jié)果供試品溶液在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液無斑點(diǎn)顯現(xiàn)，說明陰性樣品無干擾。見圖1。

2.2 延胡索的薄層色譜鑒別[1]

取2.1項(xiàng)下預(yù)留水層，濾過，濾液用氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用乙醚萃取3次，每次20 mL，預(yù)留氨試液層備用，合并乙醚液，水浴上揮干，殘?jiān)眉状? mL溶解，作為供試品溶液。另取不含延胡索的自制樣品20片，同供試品溶液的制法制成陰性對(duì)照溶液。取延胡索乙素對(duì)照品，用甲醇配制成0.5 mg/mL的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－丙酮（9∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，以稀碘化鉍鉀試液顯色。結(jié)果供試品溶液在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液無斑點(diǎn)顯現(xiàn)，說明陰性樣品無干擾。見圖2。

2.3 土貝母的薄層色譜鑒別[1]

取2.2項(xiàng)下的氨試液層，加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15 mL，合并正丁醇液，加正丁醇飽和的水震蕩分離3次，每次20 mL，水層棄去，取正丁醇液于水浴上蒸干，殘?jiān)眉状? mL溶解，作為供試品溶液。另取不含土貝母的自制樣品20片，同供試品溶液的制法制成陰性對(duì)照溶液。取土貝母苷甲對(duì)照品，用甲醇配制成2 mg/mL的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸-水（12∶3∶8∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，以醋酐-硫酸-乙醇（1∶1∶10）混合溶液顯色，在110 ℃烘烤至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品溶液色譜與對(duì)照品溶液色譜在相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品對(duì)結(jié)果無干擾。見圖3。

2.4 赤芍的薄層色譜鑒別[1]

取不含赤芍的自制樣品20片，照2.3項(xiàng)下的供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。另取芍藥苷對(duì)照品，用甲醇配制成1 mg/mL的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取2.3項(xiàng)下的供試品溶液和上述對(duì)照品及陰性樣品溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，用三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴灑5%的香草醛硫酸溶液，加熱烘烤至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品溶液色譜與對(duì)照品溶液色譜在相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品對(duì)結(jié)果無干擾。見圖4。

2.5 芍藥苷的含量測定

2.5.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：Eurospher-100 4.6×150 mm 5 μm；流動(dòng)相：乙腈-水（12∶88）；檢測波長：230 nm；柱溫：30 ℃；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；檢測靈敏度：1.0000AUFS；理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。色譜圖見圖5。

2.5.2 對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液制備

精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，以甲醇制成80 μg/mL的對(duì)照品溶液。取本品20片，精密稱定，除去包衣，研細(xì)，取約0.3 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加稀乙醇20 mL，超聲處理30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，得供試品溶液。另取不含赤芍的自制樣品20片，同法制備陰性對(duì)照溶液。

2.5.3 方法學(xué)考察

圖1 丹參TLC

圖2 延胡索TLC

圖3 土貝母TLC

圖4 赤芍TLC

圖5 樣品、 對(duì)照品、陰性樣品色譜圖

表1 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

線性相關(guān)性考察：取芍藥苷對(duì)照品，精密稱取17.81 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并至刻度，分別精密吸取1、3、5、7、9、10 μL，注入色譜儀，測定。得回歸方程為y=420439.7x+3117.5（縱坐標(biāo)為峰面積，橫坐標(biāo)為芍藥苷的量），相關(guān)系數(shù)為0.9999。結(jié)果表明芍藥苷進(jìn)樣量在0.1781～1.781 μg范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液10 μL，按系統(tǒng)適用性要求，重復(fù)測定6次，峰面積測定結(jié)果RSD=0.49%，儀器精密度符合實(shí)驗(yàn)要求。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別在0、2、4、6、8、10 h對(duì)同—份供試品溶液10 μL進(jìn)樣測定，測得峰面積結(jié)果的RSD為0.83%（n=6），結(jié)果顯示供試品溶液在10 h的測定時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號(hào)為20090701）6份，按系統(tǒng)適用性要求操作，同時(shí)測定樣品含量，測得芍藥苷平均值為6.24 mg/g，RSD（%）=1.14%，顯示方法的重現(xiàn)性符合測定要求。

準(zhǔn)確度試驗(yàn)：取已測得含量的樣品（批號(hào)為20090701，含量為6.24 mg/g）6份，分別精密加入濃度為0.952 mg/mL的芍藥苷對(duì)照品溶液1 mL，照供試品溶液制備方法配制成加樣供試品溶液，測定每份芍藥苷含量，計(jì)算，測得回收率為100.7%，表明方法的準(zhǔn)確度良好。結(jié)果見表1。

2.5.4 樣品含量的測定

取6批樣品，除去薄膜衣，研細(xì)，取約0.3 g，精密稱定，按前述方法制成供試品溶液和對(duì)照品溶液，精密吸取兩種溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討 論

①本文建立了乳癖舒片通用的質(zhì)量控制方法，通過對(duì)丹參、延胡索、赤芍、土貝母薄層色譜和赤芍含量測定進(jìn)行質(zhì)量控制，可在一定程度上控制乳癖舒片的質(zhì)量。②目前，中藥材染色現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，本文在控制中藥材染色方面有待進(jìn)一步研究。③本文在丹參的薄層鑒別中，用甲醇為提取溶劑較乙醚提取效率高，提取后的水層可為其余鑒別項(xiàng)利用，減少取樣量，縮短產(chǎn)品檢驗(yàn)時(shí)間。

[1] 國家藥典委員會(huì).中國藥典(一部)[M]. 2010版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2005:13-109.

R927.2

B

1671-8194（2014）17-0082-02