參苓白術散對乙酸誘導大鼠胃潰瘍的保護作用

陳宇寧 曹輝瓊 張 毅

（惠州市第三人民醫院消化內科，廣東 惠州 516002）

參苓白術散對乙酸誘導大鼠胃潰瘍的保護作用

陳宇寧 曹輝瓊 張 毅

（惠州市第三人民醫院消化內科，廣東 惠州 516002）

目的探討參苓白術散對乙酸誘導大鼠胃潰瘍的保護作用。方法雄性SD大鼠40只。隨機分別為空白對照組、模型組、參苓白術散組、奧美拉唑組。100%冰醋酸誘導胃潰瘍，參苓白術散連續灌胃10 d。病理切片觀察參苓白術散對乙酸誘導大鼠胃潰瘍的病理改變。以潰瘍面積來評估胃黏膜損傷程度，Elisa檢測胃潰瘍組織勻漿液TNF-α的含量。結果參苓白術湯組減少潰瘍面積，修復胃組織病理損傷。Elisa結果顯示，參苓白術湯減少胃潰瘍組織勻漿液TNF-α的含量，與模型組比較有明顯的統計學差異（P＜0.05），與陽性對照奧美拉唑結果相當（P＞0.05）。結論參苓白術散能修復潰瘍損傷，減少TNF-α含量，對乙酸誘導胃潰瘍大鼠有一定的保護作用。

參苓白術；胃潰瘍；奧美拉唑；TNF-α

1 材料與方法

1.1 材料：雄性SD大鼠40只，體質量200～220 g，隨機分成4組，分別為空白對照組（n=10）、潰瘍模型組（n=10）、參苓白術散組（n=10）和奧美拉唑組（n=10），由廣東省實驗動物中心提供。

1.2 主要試驗藥物：參苓白術散由本院中藥房提供，水煎濃縮，200目濾膜過濾除渣。奧美拉唑腸溶膠囊（奧克）：規格20 mg（1粒），常州四藥制藥有限公司生產，批號200911224；總蛋白提取及定量試劑盒購于碧云天試劑有限公司，TNF-α的Elisa試劑盒購于武漢博士德生物技術有限公司。蘇木素、伊紅、PBS均購于中杉金橋生物試劑有限公司。多聚甲醛、石蠟、二甲苯、酒精購于廣州東征試劑有限公司。

1.3 主要儀器：德國萊卡石蠟切片機；日本尼康Eoipse Ti-s熒光倒置顯微鏡及分析軟件；美國Thermo全波段酶標儀。

1.4 實驗方法

1.4.1 參照經典冰醋酸造模方法[2]。隨機將40只SD大鼠隨機分成4組，禁食不禁水24 h后，2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，開腹暴露胃，在胃前壁竇體交界同一部位（避開血管），用浸有100%冰醋酸、直徑為5 mm的圓形濾紙接觸1 min。然后還納胃體逐層縫合切口。

1.4.2 分組與喂藥：雄性SD大鼠40只，稱重，標記，隨機分為4組，造模1 d后開始灌胃參苓白術散3.5g/（kg·d），奧美拉唑組：3.5 mg/（kg·d）（按成年人等效劑量與大鼠換算的給藥劑量），空白對照及模型組給予等體積0.9%的生理鹽水，每天1次，連續10 d。處死前1 d禁食不禁水。麻醉大鼠后，剖腹，結扎賁門，摘取全胃，沿胃大彎剪一小口，傾出胃內容物于離心管中。將收集的胃液于低溫離心機1500 r/min離心10 min，留取上清胃液，-80 ℃凍存。把胃潰瘍組織剪下來分成兩份，一份放置10%的甲醛溶液固定。另一份放置-80 ℃凍存。

1.5 觀察內容及方法

1.5.1 計算創面愈合面積：采用格子法測定胃潰瘍面積，即用透明方格紙描繪出潰瘍損傷面積，剪下描繪的格子，以格子計算潰瘍面積。

1.5.2 組織學檢查：切取潰瘍灶或潰瘍瘢痕組織，用10%甲醛液固定，按照常規脫水，石蠟包埋，切片4 μm厚度，進行蘇木精-伊紅染色，每只大鼠組織制作2張切片，隨機抽取1張在高倍顯微鏡下隨機選取5個視野觀察炎性細胞浸潤、黏膜層厚度、纖維排列。應用Nikon Eoipse Ti-s倒置顯微鏡分析圖像。

1.5.3 Elisa檢測TNF-α含量：稱取胃潰瘍組織50 mg，生理鹽水勻漿，制作10%的勻漿液，分裝成3份，凍存于-80 ℃；BCA法蛋白定量，具體按說明書操作；TNF-α檢測，滴加稀釋樣品50 μL，37 ℃孵育1.5 h，PBS洗板，3次，每次5 min，滴加HRP二抗孵育30 min，洗板，加顯色液A，B孵育15 min，加終止液，酶標儀A450檢測并分析結果。

2 結 果

2.1 空白對照組術后飲食、飲水活動均無異常，模型組術后出現食欲下降、活動減少、四肢無力、倦臥嗜睡、被毛蓬松。參苓白術散組對飲食、飲水、活動度均有改善。

2.2 參苓白術散對乙酸誘導胃潰瘍大鼠潰瘍面積的影響。空白對照組未見潰瘍，模型組可見潰瘍形成，并且面積增大，潰瘍有肉芽組織形成。與模型組比較，給藥各組大鼠潰瘍較為表淺，面積較小，與模型組比較均有統計學差異（P＜0.05），見表1。

表1 參苓白術散對胃潰瘍面積的影響（

表1 參苓白術散對胃潰瘍面積的影響（

與模型比較 *P＜0.05

組別 n 潰瘍面積（mm2）空白對照組 10 0模型組 10 8±2.1參苓白術散組 10 4.6±1.3*奧美拉唑組 10 4.2±1.5*

2.3 參苓白術散對實驗性胃潰瘍大鼠潰瘍組織病理學的影響。正常對照組胃組織結構正常，模型組可見潰瘍形成，并見大量炎性細胞浸潤，潰瘍床有肉芽組織形成，纖維排列紊亂；與模型組比較，給藥各組大鼠潰瘍較為表淺，黏膜層較厚，炎性細胞浸潤少，纖維排列較整齊，與奧美拉唑組相當（圖1）。

圖1 為HE染色的病理結果（200X）（A：空白對照組；B：模型組；C：參苓白術散組；D：奧美拉唑組）

2.4 如圖2顯示，參苓白術散顯著減低TNF-α的含量，奧美拉唑組與參苓白術散無統計學差異（P＞0.05）

3 討 論

消化性潰瘍（peptic ulcer，PU）是指消化道內受胃酸、胃液和胃蛋白酶浸浴范圍的黏膜層、黏膜下層甚至肌層和漿膜層在多種因素影響下發生的局限性組織缺損性疾病[3，4]。現在研究認為其發生機制主要是由于“防御因子” 受損或（和）“攻擊因子”作用增強所致。其中炎性因子屬于損害胃黏膜的重要“攻擊因子。TNF-α又名惡液質素，由單核、巨噬細胞產生，是可成組廣泛損傷的促炎性因子TNF-α是引起潰瘍形成的烈性介質，在胃黏膜損傷過程中發揮作用。TNF-α是重要的致炎因子，可促進其他細胞因子包括IL-1、IL-2、IL-8等的繼發性釋放，并引起中性粒細胞活化，急性期蛋白生成，影響黏膜血氧供給，加劇損傷，最終形成潰瘍[5，6]。結果顯示參苓白術散減少TNF-α的表達，與胃潰瘍常用藥奧美拉唑的作用相當，而且可以減少服用奧美拉唑帶來的副作用，是臨床中西醫結合治療胃潰瘍的良方。

中醫認為，消化性潰瘍多因飲食不節，七情內傷，導致脾胃受損，肝脾不和，氣滯血瘀。故選用健脾益氣、和胃除滿、清熱解毒的中藥組方，參苓白術散由人參、白術、茯苓、灸甘草、山藥、扁豆、蓮子、薏苡仁、砂仁、陳皮、桔梗組成，具有健脾益氣、滲濕止瀉之功能。方中人參、茯苓、白術、灸甘草、扁豆、薏苡仁，甘溫益脾陽，蓮子、山藥之甘平滋脾陰，是以扶陽多于護陰，用以補脾元升清氣。并以陳皮、砂仁、桔梗調理脾胃。重在補而輔以調，配伍合度，補通得當，有調中養胃之益[7]。臨床應用治療消化性潰瘍病療效顯著。結果顯示參苓白術散能夠增強乙酸誘導胃潰瘍大鼠的飲食及活動狀態，減少炎性細胞的滲出，減低TNF-α的表達。

綜上所述，參苓白術散能改善乙酸誘導的大鼠胃潰瘍病理修復，減少潰瘍面積，增加動物的飲食，增強動物的活動度，減少TNF-α表達，減少胃黏膜損傷的“攻擊因子”，保護胃黏膜損傷，最終達到治療胃潰瘍的作用。

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[6] Mei Q.Associations of the IL-1 and TNF gene polymorphisms in the susceptibility to duodenal μLcer disease in Chinese Han population[J]. Int J Immunogenet,2010,37(1):9-12.

[7] 沈仲賢.資生丸在治療疑難病中的運用[J].河南中醫,1999,19(3): 56-57.

R573.1

B

1671-8194（2014）16-0092-02參苓白術散出自《太平惠民和劑局方》，是宋代著名復方，由人參、白術、茯苓、灸甘草、山藥、扁豆、蓮子、薏苡仁、砂仁、陳皮、桔梗組成，具有健脾益氣、和胃除滿、滲濕止瀉的功用，主治脾胃虛弱、納呆腹脹、便溏脈虛等癥[1]。臨床應用治療消化性潰瘍病療效顯著。但對它的作用機制尚不清楚。現在通過對病理的修復，抗炎的療效觀察參苓白術散對大鼠胃潰瘍的作用，旨在為臨床應用參苓白術散治療胃潰瘍疾病提供實驗依據，現報道如下。