阿加曲班注射液的測定方法研究

陳志勇 李 偉 周海輝 崔 友 夏小秋 王恒彩

（浙江天瑞藥業有限公司，浙江 瑞安 325200）

阿加曲班注射液的測定方法研究

陳志勇 李 偉 周海輝 崔 友 夏小秋 王恒彩

（浙江天瑞藥業有限公司，浙江 瑞安 325200）

目的用高效液相色譜法測定阿加曲班注射液的含量。方法采用氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水-10%四丁基氫氧化銨-磷酸（700∶300∶13∶0.68），用氨溶液（1→20）調節pH值至6.5為流動相，流速為0.8 mL/min，檢測波長257 nm，柱溫為40 ℃。結果阿加曲班在10.1～151.6 μg/mL范圍內，濃度與峰面積呈良好的線性關系，r=0.9998，平均回收率為99.65%，RSD=0.42%。結論該方法簡便、快速、準確，可用于阿加曲班注射液的含量測定。

阿加曲班；高效液相色譜法；含量測定

阿加曲班是由日本三菱化學研究所研制合成的抗血栓藥，于1990年2月最先上市，首先被應用于臨床治療周圍動脈閉塞性疾病，然后開始將其用于治療急性腦血栓形成，以及心肌梗死溶栓的輔助治療，并用于在抗凝血酶（AT）缺乏患者進行血透時的抗凝處理。它是一種活性強、高度選擇性的直接凝血酶抑制劑，具有起效迅速、療效顯著、副作用小、安全性高的優點。筆者采用高效液相法測定阿加曲班的含量，結果表明該方法專屬性強、簡便、快速、準確，可用于阿加曲班注射液的含量測定[1-3]。

1 材 料

1.1 儀器

日本島津高效液相色譜儀（島津LC-20AD），電子電平（Sartorius BP211D）。

1.2 藥品與試劑

阿加曲班對照品（天津煒捷制藥有限公司，批號：W3017-01.R.0）。阿加曲班注射液（浙江天瑞藥業有限公司，批號:313071601313071602，313071603，規格：20 mL∶10 mg）。甲醇：色譜純；四丁基氫氧化銨：分析純；氨溶液：分析純；磷酸：分析純；水：自制注射用水。

2 方 法

2.1 色譜條件

色譜柱為氰基鍵合硅膠柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水-10%四丁基氫氧化銨-磷酸（700∶300∶13 ∶0.68），用氨溶液（1→20）調節pH值至6.5；檢測器為UV檢測器（檢測波長為257 nm）；進樣量為20 μL；流速為0.8 mL/min；柱溫為40 ℃。

2.2 測定方法

精密量取本品溶液2 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿加曲班對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1 mL中約含阿加曲班0.1 mg的溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算[4-5]。

3 方法學考察

3.1 專屬性

按處方取空白輔料適量（約相當于阿加曲班10mg），置25mL量瓶中，加流動相溶解定容，取2mL置10mL量瓶中，加流動相定容，作為空白輔料溶液。照擬定的測定法配制對照品溶液和樣品溶液并分別取3種溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，HPLC圖譜見圖1。結果表明理論塔板數按阿加曲班計算為8250，空白輔料不干擾供試品溶液的測定，能夠較好的滿足本品的檢測要求[6]。

3.2 線性關系試驗

圖1 各樣品HPLC色譜圖

取對照品加流動相溶解并稀釋制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為貯備液。分別精密量取貯備液1 mL分別至50 mL、25 mL量瓶，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制備濃度為10%和20%溶液，另分別精密量取貯備液1.0、1.6、2.0、2.4、3.0 mL分別至10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別作為50%、80%、100%、120%、150%濃度溶液。精密量取上述溶液各20 μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，得回歸方程為：A=22357C-9808.7，r =0.9998。可見在10.1～151.6 μg/mL范圍內，峰面積與濃度的線性關系良好。

3.3 溶液穩定性

取313071601批樣品，照含量測定方法配制樣品，在第0，1，2，4，6，8 h后測定峰面積，測得阿加曲班峰面積的相對標準偏差為0.27%，結果表明本品含量測定溶液在8 h內穩定，適合常規分析[7]。

3.4 方法精密度試驗

3.4.1 重復性：取313071601批樣品，照含量測定方法平行配制六份樣品，測定樣品中阿加曲班含量，結果平均含量為99.53%，RSD值為0.96%，說明本法重復性良好。

3.4.2 中間精密度：取313071601、313071602、313071603批樣品，分別于不同時間，不同儀器，由不同的操作者試驗，照前述含量測定方法依法測定樣品含量，結果測得3批樣品含量的相對標準偏差分別為0.75%，0.82%和0.79%，表明本品含量測定方法的重現性較好，準確可靠。

3.5 回收率

為了考察所選含量測定方法的準確度，進行回收率測定。本品回收率試驗設計按含量測定濃度的80%、100%、120%進行試驗。供試品溶液配制：取阿加曲班10.0、12.5和15.0 mg各三份，并按處方稱取空白輔料（約相當于阿加曲班12.5 mg）9份，精密稱定，分別置25 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，各取續濾液2 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。對照溶液的配制：取阿加曲班約10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密量取供試品溶液和對照品溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算回收率。

實驗結果表明：采用高、中、低3個濃度各測定3次，平均回收率為99.65%，RSD值為0.42%，表明回收率較好，方法的準確度高。

3.6 耐用性

考察色譜條件進行微小變化，測定結果不受影響的程度，為方法可用于常規檢查提供依據。本品耐用性考察主要針對本品色譜條件中流速、柱溫、比例、pH和色譜柱進行試驗。參考《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄ⅪⅩ A藥品質量標準分析方法驗證指導原則，對本測定方法進行以下耐用性試驗。流速采用0.75、0.85和0.8mL/min，測得含量的RSD為0.87%；柱溫采用35、40和45 ℃，測得含量的RSD為0.81%；流動相中對甲醇與水的比例調整為65∶35、70∶30和75∶25，測得含量的RSD為0.26%；pH采用6.0、6.5和7.0，測得含量的RSD為0.36%；色譜柱采用Kromasil CN、Diamonsil? CN和月旭XB CN，測得含量的RSD為0.24%。說明阿加曲班含量檢測方法的耐用性很好[8-9]。

3.7 樣品含量測定

取本品連續試制的3批樣品（313071601，313071602，313071603），采用高效液相色譜法測定阿加曲班的含量，測定結果分別為99.71%，99.74%，99.75%。

4 討 論

本實驗對高效液相色譜法測定阿加曲班注射液含量方法學進行了研究，結果表明：阿加曲班在10.1～151.6 μg/mL范圍內，濃度與峰面積呈良好的線性關系，回歸方程為A=22357C-9808.7，r=0.9998，平均回收率為99.65%，RSD=0.42%，耐用性好。結論：該方法專屬性強、簡便、快速、準確，可用于阿加曲班注射液的含量測定。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典二部[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010.

[2] 天津藥物研究院藥業有限責任公司阿加曲班注射液說明書(達貝)[S].

[3] 戴曉嵐.阿加曲班聯合依達拉奉治療房顫合并腦栓塞的臨床療效評價[J].中國藥房,2011,22(22):2075.

[4] 進口藥品注射標準[S].JX20000058.

[5] 國家食品藥品監督管理總局.YBH11142005阿加曲班[S].2005-05-10.

[6] 國家食品藥品監督管理總局.YBH11142005阿加曲班注射液[S].2005-05-10.

[7] 國家食品藥品監督管理總局.JX20090312阿加曲班注射液[S].2009-03-12.

[8] 郭旭光,鄭子棟.RP-HPLC法測定阿加曲班注射液的含量[J].中國藥房,2013,24(33):3141.

[9] 劉東,蔣新利.HPLC測定阿加曲班注射液的含量[J].食品與藥品,2013,15(5):337.

R927.2

B

1671-8194（2014）16-0091-02