“通蓮湯”聯合微波熱療與單純微波熱療對食管癌患者血清p53和癌組織survivin表達影響的對比研究

陳樹山 賈永森 田福玲 閆昕 曹慧娟 秦麗娟 王召龍 何龍

（1.唐山市中醫醫院，河北唐山 063000；2.河北聯合大學中醫學院，河北唐山 063000；3.河北聯合大學基礎醫學院，河北唐山 063000）

“通蓮湯”聯合微波熱療與單純微波熱療對食管癌患者血清p53和癌組織survivin表達影響的對比研究

陳樹山1賈永森2田福玲2閆昕2曹慧娟2秦麗娟3王召龍1何龍1

（1.唐山市中醫醫院，河北唐山 063000；2.河北聯合大學中醫學院，河北唐山 063000；3.河北聯合大學基礎醫學院，河北唐山 063000）

目的：比較通蓮湯聯合微波熱療與單純微波熱療對食管癌患者血清腫瘤抑制蛋白p53（簡稱p53）和活體癌組織生存素（survivin）影響的差異。方法：取38例局部中晚期食管癌患者血清，隨機分為對照組（17例）和觀察組（21例）。2組均行微波熱療，觀察組加服中藥通蓮湯。應用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測患者治療前后血清p53；應用免疫組化兩步法檢測患者活體癌組織survivin蛋白。結果：對照組p53陽性患者7例，觀察組4例，組間比較差異顯著；觀察組活體癌組織survivin蛋白陽性表達率顯著低于對照組。結論：通蓮湯聯合微波熱療能顯著抑制食管癌患者血清p53和活體癌組織survivin蛋白表達，效果優于單純微波熱療。

食管癌 微波熱療 通蓮湯 p53 survivin

我國屬于食管癌高發國家，發病人數、患病率、死亡率均位居世界首位[1]。筆者應用微波熱療聯合自擬“通蓮湯”治療老年中晚期食管癌，取得良好的療效[2]。研究表明，腫瘤組織抑制蛋白p53（簡稱p53）和生存素（survivin）的過度表達可抑制食管癌細胞凋亡，促進癌細胞生長[3]，是預測該病進展的重要指標。本研究進一步觀察了通蓮湯配合微波熱療與單純微波熱療對食管癌患者血清p53和活體癌組織survivin表達影響的差異。

1 臨床資料

選取筆者所在醫院2010年8月～2012年8月確診為食管癌的患者38例。納入標準：符合食管癌臨床診斷標準或病理診斷依據；臨床病歷資料完整；放、化療失敗復發轉移者或年齡大、體質弱不能耐受放、化療；無熱療禁忌證。38例患者隨機分為對照組（17例）和觀察組（21例）。觀察組：男14例，女7例；TNM分期Ⅰ期和Ⅱ期6例，Ⅲ期Ⅳ15例；分化程度高3例，中4例，低14例。對照組：男10例，女7例；TNM分期Ⅰ期和Ⅱ期5例，Ⅲ期Ⅳ12例；分化程度高3例，中3例，低11例。2組基線資料比較，無顯著性差異（P＞0.05）。

2 治療方法

2.1 對照組采用微波熱療[2]。每次熱療時間90min，每次間隔＞72h，4次為1個療程。

2.2 觀察組微波熱療同對照組。加服活血化瘀、涼血解毒中藥通蓮湯。藥物組成：白花蛇舌草15g，桃仁15g，紅花8g，升麻15g，檳榔8g，半枝蓮15g。水煎服，每日1劑，分2次服。自熱療開始至結束后1個月。

3 療效觀察

3.1 觀察指標比較2組治療后血清p53抗體和癌組織survivin蛋白表達。

3.1.1 標本采集血清標本：38例食管癌患者抽取空腹靜脈血5mL，以3000r/min離心5min，分離血清后置-20℃保存。活體癌組織標本：采用拉網細胞學法，使用外置網套的橡膠氣囊通過食管，病變組織被網套刮下涂片。

3.1.2 試劑及設備MTC-3D微波熱療機（南京啟亞醫療設備有限公司），酶標儀（NOVAPATH-450，Bio-Tek公司），抗突變型p53酶聯免疫吸附測定法（ELISA）試劑盒（美國CST公司），survivin兔抗人多克隆抗體（美國CST公司）。

3.1.3 檢測方法應用ELISA檢測血清p53抗體。使用抗p53試劑盒，操作按說明書進行，用酶標儀（波長為450nm）測定吸光值。根據標準曲線和公式計算血清p53抗體的半定量值（kU/L），參考值：血清p53抗體＜0.85kU/L為陰性，0.85～1.15kU/L為可疑陽性，＞1.15kU/L為陽性。

采用En Vision兩步法進行免疫組化染色，分析患者癌組織survivin蛋白表達。步驟按說明書進行，所有切片均在同一光強度，同一放大倍數下進行圖像分析，染色陽性物質呈棕黃色顆粒狀。隨機計數10個視野，記錄每個視野的陽性表達率（陽性細胞數/全視野細胞數），取其均數作為每例樣本陽性表達率的評定依據。所占比率為0～5%為陰性（-），5%～25%為弱陽性（+），25%～50%為中度陽性（++），50%以上為強陽性（+++）。

3.2 統計學方法使用SPSS18.0軟件進行統計學分析，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

3.3 治療結果

3.3.1 治療前后2組患者血清p53抗體的檢測

治療前2組患者血清p53陽性率比較無顯著性差異（P＞0.05）。治療后觀察組較之對照組p53陽性病例數顯著減少，與對照組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 觀察組與對照組患者治療前后血清p53抗體表達比較（v=1）

3.3.2 治療后2組患者活體癌組織survivin蛋白表達見表2。

表2 觀察組與對照組活體癌組織survivin蛋白陽性細胞表達率（v=1）

4 討論

食管癌屬中醫學“噎膈”范疇，系由于飲食不節，情志失調，正氣內虛所致，由此產生氣滯痰凝、熱毒蘊結、血瘀不化。通蓮湯活血祛瘀，清熱解毒，破氣導滯，升清降濁，胃氣乃通，獲得國家發明專利[4]。腫瘤微波熱療是近三十年來迅速發展的一門交叉學科，是加熱滅活癌細胞的有效治療新方法，可以直接殺傷腫瘤細胞，誘導腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤血管生成，提高機體免疫功能[5]。筆者將兩者結合用于臨床食管癌患者，觀察了該治療方案對患者血清p53和活體癌組織survivin的影響。

研究發現大多數惡性腫瘤患者的血清中均檢測到p53抗體。王暉等[6]研究表明，食管癌患者血清抗p53抗體的陽性率明顯高于正常人，所以認為檢測血清中的p53抗體可以作為食管癌輔助診斷的指標。survivin基因是近年來發現的一種新的抗凋亡因子，是凋亡蛋白抑制因子的家族成員，可對抗G2/ M期誘導的凋亡，在癌組織中過表達可克服凋亡檢測點，由于survivin基因對凋亡的抑制，細胞得以異常增殖及惡性轉化，造成腫瘤發生發展。有研究顯示，食管癌組織中的survivin和p53具有相似表達趨勢[7]，該研究為survivin和p53作為聯合靶點治療食管癌提供了理論依據。

本研究觀察到食管癌患者經通蓮湯聯合微波熱療后p53陽性率較之單純微波熱療組顯著降低，表明檢測食管癌患者血清p53抗體對食管癌的治療效果評價有一定參考價值。本研究通過拉網細胞學法提取到活體癌組織，經免疫組化法檢測出survivin基因在中藥聯合熱療治療后，陽性率顯著下降，較之單純熱療組具有顯著性差異。

[1]Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics. CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69

[2]陳樹山，賈永森，秦麗娟，等.通蓮湯聯合微波熱療治療老年中晚期食管癌.長春中醫藥大學學報，2013，29（4）：585

[3]Chang E，Donahue J，Smith A，et al.Loss of p53，rather than beta-catenin overexpression，induces survivinmediated resistance to apoptosisin an esophageal cancer cell line.J Thorac Cardiovasc Surg，2010，140 （1）：225

[4]賈永森，馬會霞，王志文，等.治療食管癌的活血行氣中藥制劑及其制備方法.中國：ZL201110308544.0，2013年4 月10日

[5]張文征，張翠蓮，陳信義.微波熱療治療腫瘤的臨床應用體會.中國醫藥指南，2012，10（21）：70

[6]王暉，王勝.食管癌患者p53表達的臨床意義.中國現代醫生，2012，50（20）：136

[7]趙文鵬，路平，苗戰會，等.p53、survivin在食管癌中的作用.現代生物醫學進展，2010，10（6）：1140

R735.1文獻識別碼A

1672-397X（2014）03-0034-02

陳樹山（1968-），男，本科學歷，主治醫師，從事外科臨床研究。

賈永森，jysen@163.com

2013-12-05

編輯：韋杭吳寧

河北省中醫藥管理局科研計劃項目（2013236）；唐山市科學技術研究與發展計劃項目（121302115a）