乳腺癌標(biāo)本中BRCA－1蛋白表達(dá)與HER－2基因的臨床意義

黃承樂(lè)（廣西壯族自治區(qū)百色市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 533000）

乳腺癌是我國(guó)婦女常見(jiàn)的惡性腫瘤，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，其病死率占女性惡性腫瘤病死率的20%左右［1］。乳腺癌的主要發(fā)病部位在腺泡上皮及乳腺導(dǎo)管，根據(jù)不同的組織結(jié)構(gòu)和病理特點(diǎn)可分為導(dǎo)管內(nèi)原位癌、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、小葉原位癌、浸潤(rùn)性小葉癌等多種類(lèi)型，臨床中常見(jiàn)的為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌。有文獻(xiàn)報(bào)道顯示，乳腺組織因?yàn)樨?fù)調(diào)控因子失控，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞形成，為腫瘤細(xì)胞提供生長(zhǎng)需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)［2］。腫瘤細(xì)胞在生長(zhǎng)的同時(shí)釋放表皮生長(zhǎng)因子促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)區(qū)淋巴的形成，而且還釋放血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子促進(jìn)血管生成。乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌早期發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的概率高，且預(yù)后差。及早診斷并治療乳腺癌成為醫(yī)務(wù)人員的重要研究課題。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，乳腺癌生物學(xué)行為得到更深層次的研究，發(fā)現(xiàn)乳腺癌特異性標(biāo)志物，對(duì)早期預(yù)防、診斷、治療乳腺癌具有重要意義［3］。本文通過(guò)研究原癌基因人類(lèi)表達(dá)生長(zhǎng)因子受體2（HER－2）和乳腺癌易感基因1（BRCA－1），探討其與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2013年1～12月乳腺外科手術(shù)切除的病理標(biāo)本85例，病理明確診斷為乳腺癌病變患者，其中70例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、8例乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌、7例乳腺髓樣癌。研究對(duì)象均為女性，年齡28～76歲，平均45.34歲。患者均無(wú)乳腺癌家族史，實(shí)施乳腺癌根治性切除手術(shù)，術(shù)前未接受放化療治療。

1.2 試劑與方法

1.2.1 試劑 BRCA－1鼠抗單克隆抗體試劑盒、HER－2基因擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒，所有檢驗(yàn)操作均按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.2.2 檢測(cè)方法 BRCA－1采用免疫組化法檢測(cè)［4］。先將標(biāo)本固定進(jìn)行包埋切片處理，采用氧化物酶復(fù)合法進(jìn)行檢測(cè)，用微波進(jìn)行熱修復(fù)抗原，待冷卻后采用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，再用過(guò)氧化氫阻斷內(nèi)源性氧化物酶，用正常山羊血清進(jìn)行封閉孵化。滴加一抗過(guò)夜后，滴加二抗，每次滴加后用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，再次滴加過(guò)氧化物酶復(fù)合物溶液，用DAB顯色，蘇木素染色，烤片中性樹(shù)膠封片。用一抗作為陰性對(duì)照，與已知BRCA－1陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)片為陽(yáng)性對(duì)照。HER－2采用熒光復(fù)位雜交檢測(cè)［5］。先將標(biāo)本固定進(jìn)行包埋切片處理，將組織切片烤片過(guò)夜，組織切片脫蠟，脫水，浸入蛋白酶K工作液中，漂洗2次。將組織切片再次進(jìn)行脫水，干燥玻璃片，與探針雜交過(guò)夜，洗片后染色加蓋玻片。

1.3 結(jié)果判定 免疫組化法檢測(cè)結(jié)果判定：400倍視野下清晰見(jiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，表達(dá)不清晰為陰性［6］。熒光原位雜交結(jié)果判定：計(jì)數(shù)細(xì)胞集合中各信號(hào)清晰可見(jiàn)，細(xì)胞核清晰無(wú)重疊現(xiàn)象，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞中紅信號(hào)數(shù)／細(xì)胞中綠信號(hào)數(shù)比值，比值小于1.8為陰性，比值大于2.2為陽(yáng)性［7］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以α＝0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 BRCA－1基因檢出結(jié)果比較 BRCA－1基因在導(dǎo)管內(nèi)癌陽(yáng)性率為62.3%（5／8），浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌陽(yáng)性率為77.3%（54／70），乳腺髓樣癌陽(yáng)性率為71.4%（5／7），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。BRCA－1基因在有淋巴轉(zhuǎn)移患者陽(yáng)性率為62.9%（22／35），無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者陽(yáng)性率為82.5%（33／40），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 HER－2基因陽(yáng)性檢出結(jié)果比較 在85例乳腺癌病理標(biāo)本中，其陽(yáng)性檢出率為48.2%（41／85）；有淋巴轉(zhuǎn)移患者陽(yáng)性率為88.6%（31／35）例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者陽(yáng)性率為25.0%（10／40），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

乳腺癌是復(fù)雜的惡性疾病，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響女性健康及生活質(zhì)量。現(xiàn)階段對(duì)乳腺癌的治療主要采用外科手術(shù)、輔助藥物及放化療治療，但其預(yù)后效果并不理想。早期預(yù)防和診斷乳腺癌，采取合理的基因靶向治療是延長(zhǎng)患者生存時(shí)間，提高預(yù)后的有效方法。乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展由多種基因參與完成，在這一復(fù)雜的病理過(guò)程中，對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)的深入了解可進(jìn)一步了解基因的變化和其發(fā)病機(jī)制。BRCA－1基因是與乳腺癌發(fā)生相關(guān)的抑癌基因，可作為輔助診斷、預(yù)防、治療乳腺癌的重要生物學(xué)標(biāo)志物。檢測(cè)乳腺癌手術(shù)病理組織中的BRCA－1和HER－2情況，可分析兩個(gè)基因表達(dá)與乳腺癌病理特征之間的關(guān)系。

BRCA－1為一種腫瘤抑制基因，其抑癌作用主要呈隱性，在細(xì)胞增殖時(shí)BRCA－1可抑制細(xì)胞分裂，誘發(fā)細(xì)胞凋亡，是一種重要的細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控制因子［8］。當(dāng)BRCA－1發(fā)生基因突變后，其喪失調(diào)控能力，細(xì)胞失去正常分化、增殖作用，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生惡變。BRCA－1基因?yàn)槿橄侔┑囊赘谢颍哂行迯?fù)DNA、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)錄激活基因等功能。有文獻(xiàn)報(bào)道顯示，家族性乳腺癌患者的BRCA－1基因突變，導(dǎo)致BRCA－1蛋白表達(dá)喪失或功能改變，從而使家族性乳腺癌的發(fā)病率明顯升高。

HER－2基因是人類(lèi)原癌基因的一種，定位在人染色體上，本身具有刺激生長(zhǎng)性，是一種跨膜酪氨酸激酶受體，功能區(qū)主要包括細(xì)胞內(nèi)區(qū)、細(xì)胞外區(qū)和跨膜區(qū)，對(duì)細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)化、凋亡起到重要的調(diào)控作用。正常狀態(tài)下HER－2基因處于非激活狀態(tài)，參與細(xì)胞的正常分化、生長(zhǎng)。HER－2是乳腺癌重要的預(yù)測(cè)和預(yù)后標(biāo)志物。當(dāng)其因外界某種刺激過(guò)度表達(dá)時(shí)，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)節(jié)制生長(zhǎng)，細(xì)胞發(fā)生癌變。有文獻(xiàn)報(bào)道顯示［8］，大部分乳腺癌患者均存在HRE－2基因擴(kuò)增。HER－2的擴(kuò)增不但與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展有相關(guān)性，也是制定有效治療方案的重要參考指標(biāo)。

學(xué)者發(fā)現(xiàn)BRCA－1的類(lèi)型和病理特征與3陰性乳腺癌間存在某種聯(lián)系。本研究結(jié)果顯示，BRCA－1基因與HER－2基因在導(dǎo)管內(nèi)癌、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌和乳腺髓樣癌之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而在有淋巴轉(zhuǎn)移和無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移患者中的陽(yáng)性率分別為62.9%、82.5%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同時(shí)，BRCA－1檢出陽(yáng)性的乳腺癌病理檢查中HER－2陽(yáng)性率較低，說(shuō)明HER－2陽(yáng)性率可作為BRCA－1乳腺癌相對(duì)獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)。

綜上所述，BRCA－1蛋白、HER－2基因在乳腺癌中發(fā)揮了無(wú)法替代的作用，與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。

［1］利基林，唐艷萍，梁新強(qiáng)，等.乳腺癌患者BRCA－1蛋白表達(dá)與 HER－2基因擴(kuò)增的相關(guān)性［J］.廣西醫(yī)學(xué)，2013，35（4）：396－398.

［2］孟榮榮，應(yīng)明真，王雅杰.BRCA基因相關(guān)散發(fā)性乳腺癌研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)研究雜志，2012，41（4）：4－7.

［3］阮建波，康東平.乳腺癌手術(shù)標(biāo)本BRCA－1蛋白表達(dá)與HER－2基因擴(kuò)增的臨床意義［J］.求醫(yī)問(wèn)藥：學(xué)術(shù)版，2011，9（3）：36.

［4］趙善鵬，于澤平，顧軍，等.乳腺癌組織中BRCA1的蛋白表達(dá)與乳腺癌的相關(guān)性分析研究［J］.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2011，24（10）：1049－1053.

［5］吳濤，歐江華，哈木拉提·吾甫爾.新疆遺傳性乳腺癌BRCA－1／2基因突變檢測(cè)的研究［J］.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，36（10）：1442－1446.

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