溫州地區獻血者Kidd血型基因頻率調查與輸血風險評估

陳榮倉 林碧 張鋒 鄭璐 徐思莉 陳通

溫州地區獻血者Kidd血型基因頻率調查與輸血風險評估

陳榮倉 林碧 張鋒 鄭璐 徐思莉 陳通

目的 調查溫州地區獻血者Kidd血型基因頻率的分布，對Kidd血型不配合的輸血風險進行評估。方法采用尿素溶血試驗，對36 235例獻血者進行Jk（a-b-）稀有血型進行篩選，隨機抽取672例獻血者的標本采用微量板法進行Kidd血型抗原的鑒定，再用血清學方法對JK（a-b-）表型和可疑的Kidd血型抗原的確認。結果在36 235例獻血者中篩選出5例Jk（a-b-）表型，分布頻率為0．014%，基因頻率為0．012。672例獻血者中，Jka和Jkb的基因頻率分別為0．44和0．56。Jka和Jkb不配合的概率分別為0．21和0．16，Jka和Jkb不配合的概率合計為0．37。結論Kidd血型系統基因頻率符合Hardy-weinberg群體遺傳平衡法則；若懷疑為Kidd血型系統抗體時，應采用多種配血方法，以確保輸血的安全。

獻血者 Kidd血型 尿素溶血試驗 基因頻率 輸血風險

Kidd血型系統在輸血中具有重要的意義，其紅細胞上有2個常見的抗原：Jka抗原和Jkb抗原；其免疫原性微弱,一般對外來抗原免疫能力強的人才產生抗-Jka和抗-Jkb。通常情況下，是由懷孕或輸血致敏后產生Jka或Jkb抗體，偶爾引起中等強度的新生兒溶血病（HDN）[1]，但可引起嚴重的溶血性輸血反應，特別是嚴重的遲發性輸血反應[2-4]。因此，筆者對溫州地區獻血者Kidd血型抗原的基因頻率進行調查，同時評估在隨機輸血中Kidd血型不配合引起輸血反應的風險，現將結果報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 采取整體抽樣的原則，收集2013-03—09溫州地區36 235例獻血者，年齡18～55歲，且無親緣關系的血液標本，均采用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝的靜脈血，4℃保存。

1.2 試劑和儀器 分析純尿素試劑（上海達瑞精細化學品有限公司，批號：20120912）使用前配制為2mol/L的溶液（稱取尿素125g，溶解于1 000ml的蒸餾水中配制而成）；Liss溶液（上海血液生物醫藥有限公司，批號：20130701）；抗-Jka試劑血清（英國Millipore公司，批號：BIB1102B）和抗-Jkb試劑血清（德國Bio-Rad公司，批號：2246091）；96孔U型微量板（德國greiner Bio-Rad公司）；Galileo Neo全自動加樣儀（美國Immucor公司）；TL-5.0臺式平板離心機（上海市離心機械研究所）；振蕩器（德國Hettich公司）；KA2200臺式離心機（日本久保田株式會社）。

1.3 方法

1.3.1 2mol/L尿素溶血試驗[5]對Jk(a-b-)表型的篩選采用微量板法。通過Galieo Neo全自動加樣儀處理標本和試劑：將EDTA-K2抗凝血用0.9%氯化鈉溶液將每份標本制成2%紅細胞懸液（壓積紅細胞4μl+0.9%氯化鈉溶液200μl），并將2%紅細胞懸液20μl加入到微量板相應的U型孔中，再分別加入2mol/L尿素溶液100μl，完成標本和試劑分配的微孔板由有傳送帶自動傳出后，置于震蕩器上，微震混勻后靜置1～2min，在平板離心機上2 000r/min離心1 min，溶血為陽性，反之為陰性。

1.3.2 Kidd血型抗原的檢測 采用微孔板法。通過Galieo Neo全自動加樣處理標本和試劑：將EDTA-K2抗凝血用Liss溶液將每份標本制成2%紅細胞懸液（壓積紅細胞4μl+Liss溶液200μl），并將2%紅細胞懸液20μl加入到96孔U形微孔板孔中，分別將抗-Jka和抗-Jkb試劑血清各20μl加入96孔U形微孔板相應孔中，完成標本和試劑分配的微孔板由有傳送帶自動傳出后，置于震蕩器，振蕩混勻后，置于4℃冰箱60min，其間微量板微振混勻3次，取出微孔板，置于平板離心機2 000r/mim離心1min，微振后肉眼觀察結果，發生凝集為有相應的抗原，反之為無相應的抗原。

1.3.3 對JK（a-b-）表型和可疑的Kidd血型抗原的確認 采用鹽水試管法。取2支潔凈試管，分別加入抗-JKa血清和抗-JKb血清各50μl，再加入2%受檢者紅細胞懸液50μl，混勻，3 500r/min離心18s，肉眼觀察結果。用已知的JK（a+b-）和JK（a-b+）紅細胞（上海血液生物醫藥有限公司）作為對照。

1.4 JKa、JKb抗原在隨機輸血中不配合的概率計算根據Kidd血型基因頻率計算隨機輸血中Kidd抗原不配合的概率[6]。在隨機輸血中，Jka抗原不配合的概率為Pa=b2（1-b2）；Jkb抗原不配合的概率為Pb=a2（1-a2）。Jka、Jkb抗原不配合概率合計Pa+Pb=2ab（1-ab）（a和b分別代表Jka、Jkb基因頻率）。

1.5 統計學處理 采用SSPS13.0統計軟件。參照文獻[7]進行基因頻率計算，經χ2檢驗比較表型分布的期望值與觀察值，驗證是否符合Hardy-weinberg平衡法則。

2 結果

2.1 Jk（a-b-）表型的篩選 使用2mol/L尿素溶血試驗從36 235例標本中篩選出5例Jk（a-b-）表型陰性樣本，再經鹽水試管法血清學鑒定，均確認為Jk（a-b-）表型，分布頻率為0.014%，基因頻率為0.012。

2.2 Kidd血型抗原檢測 從36 235例標本中，隨機抽取的672例獻血者標本共檢測到3種表現型：Jk（a+ b-）、Jk（a-b+）和Jk（a+b+），未檢測到Jk（a-b-）表現型。基因頻率Jka=0.44，Jkb=0.56，Jkb＞Jka，各表型觀察值與期望值的差異無統計學意義（P＞0.05），資料符合Hardy-weinberg分布，詳見表1。

表1 672例獻血者Kidd血型分布和基因頻率分布

2.3 Jka和Jkb血型抗原不配合的概率 Jka不配合的概率為0.21，Jkb不配合的概率為0.16，Jka和Jkb不配合的概率合計為0.37。抗-Jka隨機輸血不配合的概率為0.68，抗-Jkb隨機輸血不配合的概率為0.80。

3 討論

1951年Allen等首先報道了Jka抗原，兩年后Plaut等報道了其對偶Jkb抗原[8]。1997年，國際輸血協會（ISBT）確定Kidd血型3種血型抗原，分別是Jka（Jk1）、Jkb（Jk2）和Jk3（Jk3），存在4種不同的表型：Jk（a+b-）、Jk（a-b+）、Jk（a+b+）和Jk（a-b-）。其中Jk（a-b-）表型是Pinkerton等于1959年首先在菲律賓人中報道的，是由遺傳同型的隱性對偶基因形成，JK（a-b-）表型的人沒有Jka、Jkb和Jk3抗原；隨后有文獻報道，罕見Jk（ab-）表型分布頻率存在種族和人群的差異，在太平洋的波利尼西亞人群中，分布頻率高達0.1%～1.4%，而歐洲人群中，該表型的分布頻率極低，在芬蘭人群中為0.03%[9]。而東亞人群中，北方人群顯示較低的分布頻率，如日本（0.0022%）[10]、上海（0.0039%）[11]和長春（0.005%）[12]。而南方人群顯示有相對較高的分布頻率，如成都（0.022%）[13]、中國臺灣（0.023%）[14]和泰國（0.025%）[15]。而溫州地區尚無此相關數據。根據Jk（a-b-）表型的人紅細胞對2mol/L尿素的溶血有抵抗性，筆者使用2mol/L尿素試驗篩查36 235例獻血者標本，篩選出5例Jk（a-b-）表型樣本，分布頻率為0.014%，低于成都、中國臺灣和泰國，但明顯高于日本、上海和南京長春等其他地區，調查結果提示在不同地域、不同人群之間存在一定的差異。為解決這一類患者的臨床輸血問題，筆者建議開展Jk（a-b-）稀有表型的篩選，建立紅細胞稀有血型檔案庫的兄弟血站實施全省或全國信息聯網，可以有效地解決臨床上對該類血型患者輸血問題的迫切需求，為搶救患者生命贏得寶貴的時間是非常有意義的。

在不同種族中，Kidd血型分布存在一定的差異，一般在西方人群中Jka＞Jkb（分別為0.50～0.74和0.26～0.50），在東方人群中則Jkb＞Jka（分別為0.50～0.69和0.31～0.50）[16]。筆者用抗-Jka和抗-Jkb血清分別對隨機抽取672例獻血者的標本采用微量板法進行Kidd血型抗原的鑒定，結果顯示溫州地區獻血者Kidd血型表型分布為Jk（a+b+）＞Jk（a-b+）＞Jk（a+b-），未發現Jk（a+ b-）；基因頻率Jkb＞Jka，符合東方人群Kidd血型基因頻率的分布規律。經Hardy-weinberg吻合度檢驗驗證，Kidd血型分布狀況及基因頻率相對穩定，符合Hardyweinberg群體遺傳平衡法則。與我國部分地區人群相比較，溫州地區與柳州地區（Jka=0.47、Jkb=0.53）[17]、四川地區（Jka=0.45、Jkb=0.55）[18]和上海地區（Jka=0.48、Jkb= 0.52）[19]和成都地區（Jka=0.44、Jkb=0.56）[20]Jka、Jkb抗原基因頻率比較接近，與浙江地區（Jka=0.49、Jkb=0.51）[21]、廣東深圳（Jka=0.41、Jkb=0.59）[16]和寧波地區（Jka=0.50、Jkb=0.50）[22]比較差距較大，說明Kidd血型系統基因頻率存在多態性分布，具有在不同的人群、不同的地域之間存在一定的差異，這可能由于地域不同、群體遷徙和人口流動情況不同而造成。

JK抗體的產生不只是由于Jk（a-b-）、Jk（a+b-）和Jk（a-b+）同樣可產生相對應的抗體，Jk（a+b-）可產生抗Jkb抗體，Jk（a-b+）可產生抗Jka抗體[23]。根據本次的調查結果，估計在隨機輸血中Jka和Jkb抗原之間的不配合輸血的風險可能性為0.37。一旦產生抗體，對于抗-JKa來說，隨機輸血不配合的可能性為0.68，即Jk（a+ b-）和Jk（a+b+）的表型頻率之和。同理，對于抗-Jkb來說，隨機輸血不配合的可能性為0.80，即Jk（a-b+）和Jk（a+b+）的表型頻率之和，因此我們在臨床輸血中應引起高度重視。與大多數血型抗體不同，抗-Jka、抗-Jkb在活體內產生后很快會消失的特性，經輸血免疫后鑒定出的強抗體，可能在數周或數月后難以鑒定，這些都是Kidd血型抗體具有臨床意義的原因[24]。因此，對有輸血史或妊娠史的患者必需進行抗體篩查，懷疑為Kidd血型系統抗體時，實驗室可以通過加入新鮮血清提高補體的濃度，以及使用鹽水介質法、快速聚凝胺法或者卡式配血法的同時，結合酶法以及經典的抗球蛋白法，采用多種配血方法聯合檢測此類抗體，防止抗-JKa和抗-JKb漏檢，以保障臨床輸血安全。

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Gene frequency of Kidd blood group and risk assessment of transfusion in blood donors of Wenzhou area

Objective To investigate the gene frequency of Kidd blood group and to assess the risk of mismatched transfusion in Wenzhou area．MethodsBlood samples were collected from 36235 donors in Wenzhou area．The Jk(a-b-) individuals were screened by urea lyses test and Kidd blood group antigens were identified in 672 randomly selected samples by microplate method．The Jk(a-b-)phenotype and suspicious Kidd blood group antigens were confirmed by serological method．ResultsFive individuals with Jk(a-b-)phenotype were screened from 36235 donors,the frequency of Jk(a-b-) was 0．014%and the gene frequency was 0．012．The gene frequency of Jka and Jkb in 672 blood donors was 0．44 and 0．56 respectively．The rate of Jka and Jkb mismatches was 0．21 and 0．16 respectively，with a total mismatch rate of 0．37．ConclusionThe gene frequency of Kidd blood group were consistent with the Hardy-weinberg population-based genetic equilibrium in Wenzhou area．The antibodies of Kidd blood group systems being suspected,it should use a variety of matching method in order to ensure the safety of blood transfusion．

Blood donors Kidd blood group Urea lyses testGene frequency Transfusion risk

2014-01-07）

（本文編輯：嚴瑋雯）

溫州市醫藥衛生科研資助項目（2013B37）

325027 溫州市中心血站

陳榮倉，E-mail：crc1223@126.com