聚乙二醇提取雞蛋黃抗體及其提取方法與應用

1 蛋黃抗體

蛋黃抗體是指蛋黃中存在的抗體，也稱蛋黃免疫球蛋白。科學家在鳥類的血液循環里發現三種免疫球蛋白（IgG、IgA與IgM），母雞在細胞分裂產蛋的過程中，會將其免疫球蛋白轉移至雞蛋，母雞血漿中之IgA與IgM，會在輸卵管中與其他的蛋白質結合而構成雞蛋蛋白的部分。比較特別的是，在成熟期中，血清IgG會經蛋黃薄膜轉移到蛋黃中，蛋黃的IgG與哺乳類的IgG在分子量、等電點、細胞膜上Fc受質的鍵結構上存在著相異點而被特定稱為IgY。

產蛋母雞經用特定的抗原反復數次免疫后，體內可產生較高滴度的特異性抗體，并同時儲存于卵黃中，其有效成分即稱蛋黃抗體，可以預防和治療相對應的疾病。對雞最常用于傳染性法氏囊病，在此病的發病早期應用效果較明顯，尤其對變異株或不同亞型等株引起的發病，如能從當地發病雞采集法氏囊制成囊組織滅活疫苗，用這種疫苗經數次免疫的雞所產的雞蛋，制成的蛋黃抗體液，用于防治當地的雞法氏囊病，可以取得良好的效果。蛋黃抗體液還具有成本低，制作工藝簡單的優勢，在對雞新城疫、禽流感、雞傳染性喉氣管炎等病的防治時也有應用。

蛋黃抗體精制抗體必須解決兩個問題，一是徹底滅活技術，二是大規模生產的萃提技術和工藝流程及其相配套的一系列檢驗、檢測等。目前有學者研究精制抗體的生產工藝滅活技術獲得成功，萃提采取酸化法，結合離心、超濾、除菌等，獲得了可供注射用的精制蛋黃抗體。精制蛋黃抗體必須經過無菌檢驗、安全檢驗、效力檢驗才能進入市場。精制蛋黃抗體有如下特點：安全，不具備垂直傳播病原的危險、不產生應激反應，對注射部位沒有刺激。不損傷法氏囊，無免疫抑制。使用方便，易于保存（可常溫保存和低溫保存）。注射后3～6小時，抗體即被吸收入血，開始發揮效能，中和相應的病毒、細菌或毒素，中止病原對機體的危害，緩解癥候，恢復健康。注射一次有效持續期為5～7天。精制蛋黃抗體有效期為冰箱保存（4～8℃），有效期至少2年以上。室溫保存，有效期為11個月。避光保存為宜。

2 提取方法與應用

利用新城疫康復雞所產的蛋試制高免蛋黃液，并用聚乙二醇6 000提取蛋黃抗體液，用于控制雞新城疫，效果較好。

康復雞只選擇。蛋雞按免疫程序，于55日齡、110日齡用新城疫（ND）Ⅰ系疫苗和雞新城疫油劑滅活疫苗接種，到190日齡突發以呼吸道噦音為主要癥狀的雞新城疫，產蛋率下降10%。用NDⅠ系疫苗3倍量和雞新城疫油劑滅活疫苗1毫升/只，分別肌肉注射，第7天后死亡停止，死亡率3.1%，全群雞采食量增加，產蛋率回升，至229日齡產蛋率達95%。從雞群中挑出發病后康復的并且雞白痢桿菌、支原體全血平板凝集試驗全部陰性的高產雞，隔離飼養，加喂抗生素和電解多維，適應3天，收集所產蛋備用。

蛋黃抗體液制備。將收集的雞蛋洗凈，用0.5%福爾馬林浸泡消毒20分鐘，取出晾干，無菌分離蛋黃，加2.5倍的生理鹽水稀釋，再按每500毫升蛋黃液加50毫升25%聚乙二醇6 000，8 000轉/分勻漿3分鐘，倒入玻璃缸內，置0～4℃冰箱內8～12小時，取出，這時蛋黃液變為兩層：上層為黏稠的脂蛋白，下層為含免疫抗體的清液，用虹吸法取出下層清液，裝瓶，加青霉素、鏈霉素2 000單位/毫升，即為蛋黃抗體液，體積為原蛋黃液的55%左右。

無菌檢驗。取成品蛋黃抗體液0.2毫升，接種于普通營養瓊脂培養基和厭氣肉湯培養基，37℃培養48小時，無細菌生長。

安全檢驗。選擇體重0.5千克蛋公雞，肌肉注射蛋黃抗體液2毫升/只，觀察一星期，未見異常反應。

臨床應用體會。用ND康復雞蛋制備的蛋黃抗體液，緊急控制ND發病雞群。對ND發病雞群，立即肌注蛋黃抗體液1～3毫升/只，一般2～3天即可控制死亡，效果明顯。之后，3～5天或據ND抗體監測結果，再接種雞新城疫Ⅰ系或弱毒疫苗，同時配合新城疫油劑滅活疫苗，使機體內免疫抗體保持一致持久，內服抗生素和電解多維，預防繼發感染，增強機體抗病力。蛋黃抗體液應凍結保存，零下5℃保存半年，零下10～15℃保存一年，效價不變，解凍后稍有沉淀，振搖即可使用，切勿將沉淀棄掉；忌反復凍融，否則會降低效價，影響防制效果。