花葉豆瓣綠組培技術研究

黃靖

摘 要：以花葉豆瓣綠品種的葉片、葉柄、莖段為外植體接種于MS附加不同激素的培養基中誘導愈傷組織，并進一步誘導分化出芽及再生植株，結果表明：葉柄誘導效果好于葉片及莖段，MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L配方最適宜初代誘導。誘導獲得的愈傷組織在MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L的培養基上進一步分化成苗，以無根苗培養在1/2 MS+NAA 0.2mg/L的培養基中，經23d培養生根。

關鍵詞：花葉豆瓣綠；組織培養；生長調節劑

中圖分類號 S68 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）06-36-03

花葉豆瓣綠（Peperomia obtusifoli）又名花葉椒草，屬胡椒科豆瓣綠屬變種，多年生草本植物。花葉型植株無主莖，葉簇生，近肉質較肥厚，倒卵形，其葉中部綠色，邊緣為一闊金黃色鑲邊。常用塑料盆、白瓷盆栽培，置于茶幾、裝飾柜、博古架、辦公桌上，十分美麗。多適用于室內觀賞，在我國南方亦可作為地被植物栽植。

花葉豆瓣綠很難獲得種子，故以無性繁殖為主。其無性繁殖有2種方法：一種為水插，只要溫度適宜，一年四季均可進行繁殖，簡單，成活率較高；另一種為土插，但由于豆瓣綠生長緩慢，采用此法扦插繁殖培養周期長，增殖系數低[1]。本實驗在前人研究的基礎上，進一步試驗了花葉豆瓣綠組織培養和工廠化快繁程序，以篩選出適合花葉豆瓣綠組織培養快速繁殖的最佳外植體，建立花葉豆瓣綠組培快繁技術體系，以期探索出利于花葉豆瓣綠工廠化生產的有效途徑[2-3]。

1 材料與方法

1.1 材料 供試材料取自福州建新園藝場，選取生長健壯、無病蟲危害的盆栽花葉豆瓣綠品種。

1.2 材料處理 將剪取的花葉豆瓣綠葉片、葉柄、莖段用自來水流水沖洗，后置于75%酒精中30s，倒去酒精，用無菌水漂洗，轉入0.1%HgCl2中分別消毒4min、6min、8min、10min、12min，用無菌水漂洗5～8次，將葉片切為0.5～0.7cm2的方塊，將葉柄、莖段切為0.3～0.5cm的小節備用。

1.3 培養基配制 以MS培養基為基本培養基，不同階段附加不同濃度的BA、NAA等生長調節劑（表1～3）。培養基煮沸后調pH值至5.8，注入容器中，封口后置于高壓鍋中在121℃，1.1kg/cm2下滅菌30min。

1.4 培養條件 將處理好的花葉豆瓣綠葉片切塊與莖段分別接種在不同配方培養基上，置于光照培養室內，室溫保持25±2℃，光照強度1 500～2 000lx，光照時間12h/d的條件下誘導。

1.5 繼代增殖培養 將形成的愈傷組織轉移到含⑤、⑥培養基中培養，每瓶接種3塊，培養25d左右后，將形成的叢生芽繼續分割接種，進一步擴大增殖。

1.6 生根培養 選擇生長健壯的小苗移至1/2 MS+NAA 0.2mg/L的生根培養基上，觀察記錄生根和小苗生長狀況，并統計生根率。

1.7 小苗移栽 為了使小苗適應盆載環境，可將已經生根的試管苗在室溫下開瓶練苗3～5d。取出試管苗，將小苗根部附著的培養基用清水洗凈，移入育苗盆中，培養土用消毒過的蛭石及泥炭土。

1.8 觀察記載 接種后每隔10d觀察一次，記錄成活數、污染率、出愈綠、萌芽率、生根率等情況。

2 結果與分析

2.1 消毒時間對花葉豆瓣綠無菌系建立的影響 外植體不同消毒時間處理效果如表3所示。通過表3數據可見，消毒時間不宜少于8min，消毒4min和消毒6min的外植體的污染率顯著高于其他消毒時間的外植體的污染率。而消毒12min，HgCl2殘留難以清洗，外植體全部死亡。經比較可知，消毒時間在8～10min為最優。

2.2 不同外植體的選擇 外植體接入時采用了葉片、葉柄與莖段3個部分，經過觀察記錄如表4所示。在相同條件下，葉柄分化速度較快，葉片其次，莖段較慢。但葉片褐化問題較其他部位嚴重。因此，從外植體來源上看，以葉柄效果最好，且誘導時間短，增殖率高。

2.3不同激素配比對愈傷組織誘導的影響 將消毒后的豆瓣綠葉柄外植體分別接入培養基①、②、③、④中，培養25d以后葉柄切口及基部周圍產生黃綠色愈傷組織。具體情況如表5所示。由表5可見，在不同激素配比和添加物情況下，花葉豆瓣綠葉柄的成芽率不同。在①、②、③培養基配比中，隨著BA與NAA使用比例提高，出愈率有顯著提升，但在④號培養基中BA用量超過一定比例時，出愈率顯著下降。因此，花葉豆瓣綠誘導最適配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L。

2.4 不同培養基對芽增殖的影響 外植體產生小苗以后，繼續采用同樣的培養基做繼代增殖，小苗高2～3cm時將轉移的叢生小苗切成較小的叢，或將較大的苗再切碎，分別在⑤、⑥、⑦培養基上培養30～40d，愈傷組織開始分化出芽，后增殖得到更多的叢生苗。三組激素配比中以⑥號效果最優。因此，花葉豆瓣綠最佳增殖配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。

2.5 根的誘導 選取生長健壯的2～3cm小苗，移植到生根培養基1/2 MS+ NAA 0.2mg/L上。一般在23d左右便可生根，根長度多為1～2cm。

2.6 移栽 選擇生長健壯、無玻璃化現象、根長2～3cm、高4～5cm的生根苗進行移栽。移栽前把培養瓶打開后于室溫下煉苗。一周后將苗從培養基中拔起，將根部培養基清除干凈后再移植入培養土中。培養土選用消毒過的泥炭土+蛭石，加強溫濕管理，通常情況下移栽成活率可達100%。

3 結論與討論

（1）花葉豆瓣綠的葉片、葉柄、莖段等均可作為外植體培養成功，在誘導時間上，各部位外植體差異并不大，誘導效果上葉柄較好，同等條件下葉片作為外植體雖然褐化率較高，但其為相對值，絕對值尚在可接受范圍。考慮到葉片最易獲取，在工廠化快繁中也可用葉片代替葉柄。

（2）植物激素是培養基中關鍵物質，在基本培養基確定的前提下，篩選合適的激素種類和激素配比是組織培養成功與否的關鍵。綜上所述，花葉豆瓣綠快繁的基本培養基為Ms培養基，誘導愈傷組織的最適配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L；叢生芽增殖的最優配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L；生根配方為：1/2 MS+NAA 0.2mg/L。

（3）花葉豆瓣綠的組培快繁潛力很大。理論上，花葉豆瓣綠每次增殖可達10～20倍，在1a內通過組培繁殖出幾十萬株苗是實際可行的。如能做到培養過程中初代誘導、繼代增殖、生根都可在同一培養基上進行，一次成苗將大大提高花葉豆瓣綠大批量商業生產的效率，從而獲得更好的經濟效益。

參考文獻

[1]王濤，彭立新.豆瓣綠的組織培養與快速繁殖研究[J].天津農學院學報，2011，18（2）：1-5.

[2]蔡明，李樹貴.豆瓣綠葉片再生植株[J].西南園藝，2001，29（4）：43.

[3]蔣澤平，朱鹿鳴.豆瓣綠試管苗快速繁殖 [J].江蘇林業科技，1990（1）：14-15.

[4]譚文澄，戴策剛.觀賞植物組織培養技術[M].北京：中國林業出版社，2000. （責編：施婷婷）endprint

摘 要：以花葉豆瓣綠品種的葉片、葉柄、莖段為外植體接種于MS附加不同激素的培養基中誘導愈傷組織，并進一步誘導分化出芽及再生植株，結果表明：葉柄誘導效果好于葉片及莖段，MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L配方最適宜初代誘導。誘導獲得的愈傷組織在MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L的培養基上進一步分化成苗，以無根苗培養在1/2 MS+NAA 0.2mg/L的培養基中，經23d培養生根。

關鍵詞：花葉豆瓣綠；組織培養；生長調節劑

中圖分類號 S68 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）06-36-03

花葉豆瓣綠（Peperomia obtusifoli）又名花葉椒草，屬胡椒科豆瓣綠屬變種，多年生草本植物。花葉型植株無主莖，葉簇生，近肉質較肥厚，倒卵形，其葉中部綠色，邊緣為一闊金黃色鑲邊。常用塑料盆、白瓷盆栽培，置于茶幾、裝飾柜、博古架、辦公桌上，十分美麗。多適用于室內觀賞，在我國南方亦可作為地被植物栽植。

花葉豆瓣綠很難獲得種子，故以無性繁殖為主。其無性繁殖有2種方法：一種為水插，只要溫度適宜，一年四季均可進行繁殖，簡單，成活率較高；另一種為土插，但由于豆瓣綠生長緩慢，采用此法扦插繁殖培養周期長，增殖系數低[1]。本實驗在前人研究的基礎上，進一步試驗了花葉豆瓣綠組織培養和工廠化快繁程序，以篩選出適合花葉豆瓣綠組織培養快速繁殖的最佳外植體，建立花葉豆瓣綠組培快繁技術體系，以期探索出利于花葉豆瓣綠工廠化生產的有效途徑[2-3]。

1 材料與方法

1.1 材料 供試材料取自福州建新園藝場，選取生長健壯、無病蟲危害的盆栽花葉豆瓣綠品種。

1.2 材料處理 將剪取的花葉豆瓣綠葉片、葉柄、莖段用自來水流水沖洗，后置于75%酒精中30s，倒去酒精，用無菌水漂洗，轉入0.1%HgCl2中分別消毒4min、6min、8min、10min、12min，用無菌水漂洗5～8次，將葉片切為0.5～0.7cm2的方塊，將葉柄、莖段切為0.3～0.5cm的小節備用。

1.3 培養基配制 以MS培養基為基本培養基，不同階段附加不同濃度的BA、NAA等生長調節劑（表1～3）。培養基煮沸后調pH值至5.8，注入容器中，封口后置于高壓鍋中在121℃，1.1kg/cm2下滅菌30min。

1.4 培養條件 將處理好的花葉豆瓣綠葉片切塊與莖段分別接種在不同配方培養基上，置于光照培養室內，室溫保持25±2℃，光照強度1 500～2 000lx，光照時間12h/d的條件下誘導。

1.5 繼代增殖培養 將形成的愈傷組織轉移到含⑤、⑥培養基中培養，每瓶接種3塊，培養25d左右后，將形成的叢生芽繼續分割接種，進一步擴大增殖。

1.6 生根培養 選擇生長健壯的小苗移至1/2 MS+NAA 0.2mg/L的生根培養基上，觀察記錄生根和小苗生長狀況，并統計生根率。

1.7 小苗移栽 為了使小苗適應盆載環境，可將已經生根的試管苗在室溫下開瓶練苗3～5d。取出試管苗，將小苗根部附著的培養基用清水洗凈，移入育苗盆中，培養土用消毒過的蛭石及泥炭土。

1.8 觀察記載 接種后每隔10d觀察一次，記錄成活數、污染率、出愈綠、萌芽率、生根率等情況。

2 結果與分析

2.1 消毒時間對花葉豆瓣綠無菌系建立的影響 外植體不同消毒時間處理效果如表3所示。通過表3數據可見，消毒時間不宜少于8min，消毒4min和消毒6min的外植體的污染率顯著高于其他消毒時間的外植體的污染率。而消毒12min，HgCl2殘留難以清洗，外植體全部死亡。經比較可知，消毒時間在8～10min為最優。

2.2 不同外植體的選擇 外植體接入時采用了葉片、葉柄與莖段3個部分，經過觀察記錄如表4所示。在相同條件下，葉柄分化速度較快，葉片其次，莖段較慢。但葉片褐化問題較其他部位嚴重。因此，從外植體來源上看，以葉柄效果最好，且誘導時間短，增殖率高。

2.3不同激素配比對愈傷組織誘導的影響 將消毒后的豆瓣綠葉柄外植體分別接入培養基①、②、③、④中，培養25d以后葉柄切口及基部周圍產生黃綠色愈傷組織。具體情況如表5所示。由表5可見，在不同激素配比和添加物情況下，花葉豆瓣綠葉柄的成芽率不同。在①、②、③培養基配比中，隨著BA與NAA使用比例提高，出愈率有顯著提升，但在④號培養基中BA用量超過一定比例時，出愈率顯著下降。因此，花葉豆瓣綠誘導最適配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L。

2.4 不同培養基對芽增殖的影響 外植體產生小苗以后，繼續采用同樣的培養基做繼代增殖，小苗高2～3cm時將轉移的叢生小苗切成較小的叢，或將較大的苗再切碎，分別在⑤、⑥、⑦培養基上培養30～40d，愈傷組織開始分化出芽，后增殖得到更多的叢生苗。三組激素配比中以⑥號效果最優。因此，花葉豆瓣綠最佳增殖配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。

2.5 根的誘導 選取生長健壯的2～3cm小苗，移植到生根培養基1/2 MS+ NAA 0.2mg/L上。一般在23d左右便可生根，根長度多為1～2cm。

2.6 移栽 選擇生長健壯、無玻璃化現象、根長2～3cm、高4～5cm的生根苗進行移栽。移栽前把培養瓶打開后于室溫下煉苗。一周后將苗從培養基中拔起，將根部培養基清除干凈后再移植入培養土中。培養土選用消毒過的泥炭土+蛭石，加強溫濕管理，通常情況下移栽成活率可達100%。

3 結論與討論

（1）花葉豆瓣綠的葉片、葉柄、莖段等均可作為外植體培養成功，在誘導時間上，各部位外植體差異并不大，誘導效果上葉柄較好，同等條件下葉片作為外植體雖然褐化率較高，但其為相對值，絕對值尚在可接受范圍。考慮到葉片最易獲取，在工廠化快繁中也可用葉片代替葉柄。

（2）植物激素是培養基中關鍵物質，在基本培養基確定的前提下，篩選合適的激素種類和激素配比是組織培養成功與否的關鍵。綜上所述，花葉豆瓣綠快繁的基本培養基為Ms培養基，誘導愈傷組織的最適配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L；叢生芽增殖的最優配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L；生根配方為：1/2 MS+NAA 0.2mg/L。

（3）花葉豆瓣綠的組培快繁潛力很大。理論上，花葉豆瓣綠每次增殖可達10～20倍，在1a內通過組培繁殖出幾十萬株苗是實際可行的。如能做到培養過程中初代誘導、繼代增殖、生根都可在同一培養基上進行，一次成苗將大大提高花葉豆瓣綠大批量商業生產的效率，從而獲得更好的經濟效益。

參考文獻

[1]王濤，彭立新.豆瓣綠的組織培養與快速繁殖研究[J].天津農學院學報，2011，18（2）：1-5.

[2]蔡明，李樹貴.豆瓣綠葉片再生植株[J].西南園藝，2001，29（4）：43.

[3]蔣澤平，朱鹿鳴.豆瓣綠試管苗快速繁殖 [J].江蘇林業科技，1990（1）：14-15.

[4]譚文澄，戴策剛.觀賞植物組織培養技術[M].北京：中國林業出版社，2000. （責編：施婷婷）endprint

摘 要：以花葉豆瓣綠品種的葉片、葉柄、莖段為外植體接種于MS附加不同激素的培養基中誘導愈傷組織，并進一步誘導分化出芽及再生植株，結果表明：葉柄誘導效果好于葉片及莖段，MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L配方最適宜初代誘導。誘導獲得的愈傷組織在MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L的培養基上進一步分化成苗，以無根苗培養在1/2 MS+NAA 0.2mg/L的培養基中，經23d培養生根。

關鍵詞：花葉豆瓣綠；組織培養；生長調節劑

中圖分類號 S68 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）06-36-03

花葉豆瓣綠（Peperomia obtusifoli）又名花葉椒草，屬胡椒科豆瓣綠屬變種，多年生草本植物。花葉型植株無主莖，葉簇生，近肉質較肥厚，倒卵形，其葉中部綠色，邊緣為一闊金黃色鑲邊。常用塑料盆、白瓷盆栽培，置于茶幾、裝飾柜、博古架、辦公桌上，十分美麗。多適用于室內觀賞，在我國南方亦可作為地被植物栽植。

花葉豆瓣綠很難獲得種子，故以無性繁殖為主。其無性繁殖有2種方法：一種為水插，只要溫度適宜，一年四季均可進行繁殖，簡單，成活率較高；另一種為土插，但由于豆瓣綠生長緩慢，采用此法扦插繁殖培養周期長，增殖系數低[1]。本實驗在前人研究的基礎上，進一步試驗了花葉豆瓣綠組織培養和工廠化快繁程序，以篩選出適合花葉豆瓣綠組織培養快速繁殖的最佳外植體，建立花葉豆瓣綠組培快繁技術體系，以期探索出利于花葉豆瓣綠工廠化生產的有效途徑[2-3]。

1 材料與方法

1.1 材料 供試材料取自福州建新園藝場，選取生長健壯、無病蟲危害的盆栽花葉豆瓣綠品種。

1.2 材料處理 將剪取的花葉豆瓣綠葉片、葉柄、莖段用自來水流水沖洗，后置于75%酒精中30s，倒去酒精，用無菌水漂洗，轉入0.1%HgCl2中分別消毒4min、6min、8min、10min、12min，用無菌水漂洗5～8次，將葉片切為0.5～0.7cm2的方塊，將葉柄、莖段切為0.3～0.5cm的小節備用。

1.3 培養基配制 以MS培養基為基本培養基，不同階段附加不同濃度的BA、NAA等生長調節劑（表1～3）。培養基煮沸后調pH值至5.8，注入容器中，封口后置于高壓鍋中在121℃，1.1kg/cm2下滅菌30min。

1.4 培養條件 將處理好的花葉豆瓣綠葉片切塊與莖段分別接種在不同配方培養基上，置于光照培養室內，室溫保持25±2℃，光照強度1 500～2 000lx，光照時間12h/d的條件下誘導。

1.5 繼代增殖培養 將形成的愈傷組織轉移到含⑤、⑥培養基中培養，每瓶接種3塊，培養25d左右后，將形成的叢生芽繼續分割接種，進一步擴大增殖。

1.6 生根培養 選擇生長健壯的小苗移至1/2 MS+NAA 0.2mg/L的生根培養基上，觀察記錄生根和小苗生長狀況，并統計生根率。

1.7 小苗移栽 為了使小苗適應盆載環境，可將已經生根的試管苗在室溫下開瓶練苗3～5d。取出試管苗，將小苗根部附著的培養基用清水洗凈，移入育苗盆中，培養土用消毒過的蛭石及泥炭土。

1.8 觀察記載 接種后每隔10d觀察一次，記錄成活數、污染率、出愈綠、萌芽率、生根率等情況。

2 結果與分析

2.1 消毒時間對花葉豆瓣綠無菌系建立的影響 外植體不同消毒時間處理效果如表3所示。通過表3數據可見，消毒時間不宜少于8min，消毒4min和消毒6min的外植體的污染率顯著高于其他消毒時間的外植體的污染率。而消毒12min，HgCl2殘留難以清洗，外植體全部死亡。經比較可知，消毒時間在8～10min為最優。

2.2 不同外植體的選擇 外植體接入時采用了葉片、葉柄與莖段3個部分，經過觀察記錄如表4所示。在相同條件下，葉柄分化速度較快，葉片其次，莖段較慢。但葉片褐化問題較其他部位嚴重。因此，從外植體來源上看，以葉柄效果最好，且誘導時間短，增殖率高。

2.3不同激素配比對愈傷組織誘導的影響 將消毒后的豆瓣綠葉柄外植體分別接入培養基①、②、③、④中，培養25d以后葉柄切口及基部周圍產生黃綠色愈傷組織。具體情況如表5所示。由表5可見，在不同激素配比和添加物情況下，花葉豆瓣綠葉柄的成芽率不同。在①、②、③培養基配比中，隨著BA與NAA使用比例提高，出愈率有顯著提升，但在④號培養基中BA用量超過一定比例時，出愈率顯著下降。因此，花葉豆瓣綠誘導最適配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L。

2.4 不同培養基對芽增殖的影響 外植體產生小苗以后，繼續采用同樣的培養基做繼代增殖，小苗高2～3cm時將轉移的叢生小苗切成較小的叢，或將較大的苗再切碎，分別在⑤、⑥、⑦培養基上培養30～40d，愈傷組織開始分化出芽，后增殖得到更多的叢生苗。三組激素配比中以⑥號效果最優。因此，花葉豆瓣綠最佳增殖配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。

2.5 根的誘導 選取生長健壯的2～3cm小苗，移植到生根培養基1/2 MS+ NAA 0.2mg/L上。一般在23d左右便可生根，根長度多為1～2cm。

2.6 移栽 選擇生長健壯、無玻璃化現象、根長2～3cm、高4～5cm的生根苗進行移栽。移栽前把培養瓶打開后于室溫下煉苗。一周后將苗從培養基中拔起，將根部培養基清除干凈后再移植入培養土中。培養土選用消毒過的泥炭土+蛭石，加強溫濕管理，通常情況下移栽成活率可達100%。

3 結論與討論

（1）花葉豆瓣綠的葉片、葉柄、莖段等均可作為外植體培養成功，在誘導時間上，各部位外植體差異并不大，誘導效果上葉柄較好，同等條件下葉片作為外植體雖然褐化率較高，但其為相對值，絕對值尚在可接受范圍。考慮到葉片最易獲取，在工廠化快繁中也可用葉片代替葉柄。

（2）植物激素是培養基中關鍵物質，在基本培養基確定的前提下，篩選合適的激素種類和激素配比是組織培養成功與否的關鍵。綜上所述，花葉豆瓣綠快繁的基本培養基為Ms培養基，誘導愈傷組織的最適配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L；叢生芽增殖的最優配方為：MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L；生根配方為：1/2 MS+NAA 0.2mg/L。

（3）花葉豆瓣綠的組培快繁潛力很大。理論上，花葉豆瓣綠每次增殖可達10～20倍，在1a內通過組培繁殖出幾十萬株苗是實際可行的。如能做到培養過程中初代誘導、繼代增殖、生根都可在同一培養基上進行，一次成苗將大大提高花葉豆瓣綠大批量商業生產的效率，從而獲得更好的經濟效益。

參考文獻

[1]王濤，彭立新.豆瓣綠的組織培養與快速繁殖研究[J].天津農學院學報，2011，18（2）：1-5.

[2]蔡明，李樹貴.豆瓣綠葉片再生植株[J].西南園藝，2001，29（4）：43.

[3]蔣澤平，朱鹿鳴.豆瓣綠試管苗快速繁殖 [J].江蘇林業科技，1990（1）：14-15.

[4]譚文澄，戴策剛.觀賞植物組織培養技術[M].北京：中國林業出版社，2000. （責編：施婷婷）endprint