TLR5在變應性鼻炎患者鼻黏膜組織中的表達

劉銳越　劉濤　周華容

[摘要] 目的 檢測變應性鼻炎患者鼻黏膜組織中TLR5的表達。方法 采用免疫組織化學SABC法檢測30例變應性鼻炎患者（試驗組）和25例非變應性鼻炎患者（對照組）鼻黏膜組織中TLR5的表達。結果 TLR5在試驗組的陽性表達率（83.3%）明顯高于對照組（8.0%），x2=30.965，P<0.05。結論 TLR5在變應性鼻炎患者鼻黏膜組織中高表達。

[關鍵詞] TLR5；變應性鼻炎；鼻黏膜

[中圖分類號] R765.21 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2014）03-58-03

過敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是耳鼻咽喉科常見病之一，現多稱變應性鼻炎，目前國內發病率約20%～30%之間。其發病機制尚未完全闡明，目前多認為該病為IgE介導的I型變態反應，多種免疫細胞如T、B淋巴細胞、肥大細胞等及多種細胞因子均參與其發病的復雜機制[1]。臨床上以連續陣發性噴嚏、大量水樣鼻涕、鼻癢及鼻塞為主要癥狀，部分患者伴有嗅覺減退，嚴重影響患者的學習、工作和生活，目前已成為全球性的健康問題。

TOLL樣受體（Toll-like receptors，TLRs）是1997年發現的機體對病原體侵襲產生先天性免疫應答信號通路中的一類受體，通過監視和識別不同的病原相關分子模式（PAMP）激發機體的免疫反應[2]。TLR5作為家族中的一員，細菌鞭毛蛋白是其唯一配體。近來研究發現TLR5是唯一具有免疫負調節作用的分子，可直接間接地參與免疫疾病的發病過程[3]。有資料顯示，TLR5在變應性鼻炎患者鼻

黏膜組織中的表達確實與普通患者存在顯著差異。為了了解在變應性鼻炎患者鼻黏膜組織中TLR5的表達情況，通過以下試驗進行研究。

1 材料與方法

1.1 材料

取2013年4月～2013年7月山西醫科大學第一醫院耳鼻咽喉科住院行鼻內鏡手術的變應性鼻炎伴下鼻甲肥大或伴鼻息肉患者30例為試驗組，手術過程中嚴格無菌操作取鼻黏膜，同時選取鼻中隔偏曲并下鼻甲肥大而行部分下鼻甲切除術患者的下鼻甲黏膜組織25例作為對照，-70℃凍存備用。

試驗組患者變應性鼻炎的診斷參照2004年蘭州會議診斷標準[4]。

1.2 主要試劑

兔抗人TLR5多克隆抗體（博士德），兔多聚體二抗（博士德），DAB顯色試劑盒（博士德）。

1.3 TLR5蛋白檢測方法

采用免疫組織化學SABC法，操作步驟嚴格按照試劑說明書進行，所采用石蠟標本均以4?m厚度連續切片。試驗組和對照組一抗稀釋濃度均為1∶100。

1.4 結果判定

試驗結果的判定標準參考許良中等[5]的方法。電子顯微鏡下觀察切片，每張切片隨機選取5個高倍視野進行細胞計數，陽性細胞數量的百分比和陽性細胞染色強度作為評分依據。染色強度：無色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；陽性細胞數量百分比：無陽性細胞計0分，陽性細胞數≤10%計1分，～50%計2分，～75%計3分，>75%計4分；2者相乘得分0～3分為陰性（-），>3分為陽性（+）。

1.5 統計學處理

SPSS軟件進行統計學處理，定性資料采用率來表示，兩組間TLR5的表達率比較采用x2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

由表1可知，試驗組TLR5表達的陽性率為83.3%，明顯高于對照組的8.0%（x2=30.965，P<0.05），差異具有統計學意義。TLR5蛋白主要表達于鼻黏膜上皮細胞的胞漿中，部分表達于胞核，呈棕黃色顆粒。

3 討論

變應性鼻炎患者發作期癥狀明顯且可能伴有嗅覺減退，嚴重影響了患者正常的學習、工作和生活，是一個刻不容緩的全球性健康問題。近年來國內外均有資料顯示，TLRs必然直接或間接地參與了變應性鼻炎的發病過程[6]。研究已經確認，在不同的組織環境中，TLRs的表達情況各異。例如骨髓來源的樹突狀細胞表達高水平的TLR4[7]，而固有層的樹突狀細胞不表達TLR4，而表達TLR5，并可以高效的對其配體做出免疫應答[8]。

查閱文獻得知，TLR5在HP感染患者的胃黏膜組織中高表達，主要表達在細胞質和（或）細胞膜，其原因在于表達于胃上皮細胞中的TLR5與HP相互作用，啟動一系列炎癥因子介導的級聯反應[9]。對于以上文獻資料結合本次試驗研究結果，做進一步以下討論。

本試驗的研究結果表明，變應性鼻炎患者鼻黏膜組織中高表達TLR5蛋白，推測人體對變應原的免疫反應至少有一部分是通過激活該受體引起的。雖然目前尚不清楚變應性鼻炎患者鼻黏膜中TLR5高表達的具體機制，但結合TLR5在胃腸道組織內的表達情況，可以對其機制做進一步推測。有研究已經確認，變應性鼻炎患者鼻黏膜中TNF-α、IFN-γ、IL-8等細胞因子量明顯增加[10]，推測是由于變應原刺激致使宿主對TLR5高表達，啟動一系列由炎癥信號轉導的級聯反應，引起多種炎癥因子的“洪水式“釋放，激發炎癥反應，產生大量的細胞因子，而細胞因子又可以反饋調控TLR5的表達，從而在炎癥反應中，TLR5蛋白-細胞因子之間形成一個相互調控的復雜關系，這種關系決定炎癥反應的發生、發展和轉歸。今后進一步的研究必將會逐步探明這種相互作用的關系，一旦闡明這種機制，必將對變應性鼻炎的發病機制有更為深入的認識，從而為變應性鼻炎的治療方向提供理論依據，減輕患者的痛苦。

綜上所述，TLR5在變應性鼻炎患者鼻黏膜組織中高表達，提示TLR5直接或間接參與了變應性鼻炎的發病過程。本試驗中，對照組有極少量的陽性表達可能是由于該組織切片來源的患者患有變應性鼻炎，但并未處在發作期，造成一定的誤差。

[參考文獻]endprint

[1] 魏欣.變應性鼻炎的發病機制[J].海南醫學，2011，22（10）：8-12.

[2] 常曉彤，輦曉峰，王振輝.Toll 樣受體信號轉導途徑研究進展[J].生理科學進展，2011，42（5）：340-346.

[3] 楊昱，徐劍鋮.Toll樣受體5在機體免疫反應中的作用[J].重慶醫學，2006，35（13）：1231-1233.

[4] 周兵，王向東，魏均民.2004 年全國變應性鼻炎與哮喘關系專題學術會議紀要[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2005， 40（3）：181.

[5] 許良中，楊文濤.免疫組織化學反應結果的判斷標準[J].中國癌癥雜志，1996，6（4）：229-231.

[6] Underhill DM，Ozinsky A.Toll-like receptors：key mediators of microbe detection[J].Current opinion in immunology，2002，14（1）：103-110.

[7] Tallant T，Deb A，Kar N，et al.Flagellin acting via TLR5 is the major activator of key signaling pathways leading to NF-κB and proinflammatory gene program activation in intestinal epithelial cells[J].BMC microbiology，2004，4（1）：33.

[8] Feng T，Cong Y，Alexander K，et al.Regulation of Toll-like receptor 5 gene expression and function on mucosal dendritic cells[J].PloS one，2012，7（4）：e35918.

[9] 刁云輝，張建立，馮百歲.幽門螺桿菌感染患者胃黏膜組織中 TLR2，TLR5 的表達[J].鄭州大學學報（醫學版）， 2009，5：38.

[10] 劉日明.Toll 樣受體與變態反應關系研究進展[J].國外醫學（免疫學分冊），28（4）：220-223.

（收稿日期：2013-12-16）endprint

[1] 魏欣.變應性鼻炎的發病機制[J].海南醫學，2011，22（10）：8-12.

[2] 常曉彤，輦曉峰，王振輝.Toll 樣受體信號轉導途徑研究進展[J].生理科學進展，2011，42（5）：340-346.

[3] 楊昱，徐劍鋮.Toll樣受體5在機體免疫反應中的作用[J].重慶醫學，2006，35（13）：1231-1233.

[4] 周兵，王向東，魏均民.2004 年全國變應性鼻炎與哮喘關系專題學術會議紀要[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2005， 40（3）：181.

[5] 許良中，楊文濤.免疫組織化學反應結果的判斷標準[J].中國癌癥雜志，1996，6（4）：229-231.

[6] Underhill DM，Ozinsky A.Toll-like receptors：key mediators of microbe detection[J].Current opinion in immunology，2002，14（1）：103-110.

[7] Tallant T，Deb A，Kar N，et al.Flagellin acting via TLR5 is the major activator of key signaling pathways leading to NF-κB and proinflammatory gene program activation in intestinal epithelial cells[J].BMC microbiology，2004，4（1）：33.

[8] Feng T，Cong Y，Alexander K，et al.Regulation of Toll-like receptor 5 gene expression and function on mucosal dendritic cells[J].PloS one，2012，7（4）：e35918.

[9] 刁云輝，張建立，馮百歲.幽門螺桿菌感染患者胃黏膜組織中 TLR2，TLR5 的表達[J].鄭州大學學報（醫學版）， 2009，5：38.

[10] 劉日明.Toll 樣受體與變態反應關系研究進展[J].國外醫學（免疫學分冊），28（4）：220-223.

（收稿日期：2013-12-16）endprint

[1] 魏欣.變應性鼻炎的發病機制[J].海南醫學，2011，22（10）：8-12.

[2] 常曉彤，輦曉峰，王振輝.Toll 樣受體信號轉導途徑研究進展[J].生理科學進展，2011，42（5）：340-346.

[3] 楊昱，徐劍鋮.Toll樣受體5在機體免疫反應中的作用[J].重慶醫學，2006，35（13）：1231-1233.

[4] 周兵，王向東，魏均民.2004 年全國變應性鼻炎與哮喘關系專題學術會議紀要[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2005， 40（3）：181.

[5] 許良中，楊文濤.免疫組織化學反應結果的判斷標準[J].中國癌癥雜志，1996，6（4）：229-231.

[6] Underhill DM，Ozinsky A.Toll-like receptors：key mediators of microbe detection[J].Current opinion in immunology，2002，14（1）：103-110.

[7] Tallant T，Deb A，Kar N，et al.Flagellin acting via TLR5 is the major activator of key signaling pathways leading to NF-κB and proinflammatory gene program activation in intestinal epithelial cells[J].BMC microbiology，2004，4（1）：33.

[8] Feng T，Cong Y，Alexander K，et al.Regulation of Toll-like receptor 5 gene expression and function on mucosal dendritic cells[J].PloS one，2012，7（4）：e35918.

[9] 刁云輝，張建立，馮百歲.幽門螺桿菌感染患者胃黏膜組織中 TLR2，TLR5 的表達[J].鄭州大學學報（醫學版）， 2009，5：38.

[10] 劉日明.Toll 樣受體與變態反應關系研究進展[J].國外醫學（免疫學分冊），28（4）：220-223.

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