HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者血清HBeAg與肝組織病理的相關性研究

郭如意，余 青，余雪平，林志鵬，林成祖，林 琪，蘇智軍

乙型肝炎病毒(HBV)復制與肝臟損害程度存在相關性，血清HBeAg水平可反映慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV復制情況，但血清HBeAg水平與肝組織病理的相關性研究，目前較少文獻報道，且各相關報道因應用HBeAg滴度檢測試劑不同，所得結果并不一致[1-3]。本文通過調查2005年1月至2009年12月我院行肝組織穿刺活檢的HBeAg陽性CHB患者的病歷資料，旨在探討肝組織炎癥程度、纖維化分期等與血清HBeAg，HBV DNA和ALT的相關性，現報道如下。

1 材料與方法

1.1病例選擇 137例HBeAg陽性CHB患者均為本院2005年1月至2009年12月的住院患者，其中男性101例，女性36例，年齡20～36歲，平均27.3±8.2歲。所有患者入院前均未接受過抗病毒治療，診斷符合2005年中華醫學會修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標準[4]，并排除甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染，肝膿腫，肝周感染，化膿性膽管炎，肝癌及酒精性、藥物性、自身免疫性肝病。

1.2血清學檢測 乙型肝炎病毒標志物HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc定量檢測采用微粒子發光全自動免疫分析儀(AxSYM，美國Abbott公司)及配套試劑盒(編號7A45)檢測。HBV DNA定量檢測采用熒光PCR定量核酸分析儀(9700型，美國PE公司)和FQ-PCR診斷試劑盒檢測(中山醫科大學達安基因公司)，檢測下限為<103拷貝/mL。生化指標采用全自動生化分析儀(Beckman LX-20，美國Beckman公司)及配套試劑檢測。

1.3肝組織病理學檢查 全部患者術前常規檢查外周血凝血酶原時間、凝血酶原活動度、血小板等，在明確無禁忌癥后，在超聲波引導下用一次性半自動活檢針(Super Core，加拿大Anogiotech公司)獲取肝組織，長度均在1.5 cm以上，標本置于10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋切片，行HE網狀纖維染色及HBsAg/HBcAg免疫組織化學染色(試劑由福州邁新生物技術有限公司提供)，由兩位資深病理科醫師讀片，病理學炎癥分級(G0-G4)及纖維化分期(S0-S4)診斷標準遵照2001年《病毒性肝炎防治方案》[5]。

1.4肝組織免疫組織化學檢查 兔抗人HBsAg、HBcAg抗體(1∶100)購自武漢博士德公司；鼠抗兔PicTureTM二抗，編號PV-6000，購自美國Zymed公司。

2 結 果

2.1血清HBeAg、HBV DNA、ALT、年齡與肝組織炎癥活動度的關系 血清HBeAg滴度隨肝組織炎癥程度的逐漸加重而有下降的趨勢，其中血清HBeAg滴度在G1組顯著高于G2、G3、G4組，G2組顯著高于G3、G4組(均P<0.05)。血清ALT值隨著肝組織炎癥程度的加重有上升趨勢，其中G1組ALT水平均高于G2、G3、G4組，G2組的ALT水平均高于G3、G4組，差異均有統計學意義(均P<0.05)。G3組年齡高于G1、G2組，差異均有統計學意義(均P<0.05)。血清HBV DNA在各個組間差異均無統計學意義(均P>0.05，見表1)。

2.2血清HBeAg、HBV DNA、ALT、年齡與肝組織纖維化分期的關系 血清HBeAg滴度隨肝組織纖維化分期的加劇而有下降的趨勢。其中，血清HBeAg滴度在S3、S4期顯著低于S1、S2期，差異均有統計學意義(均P<0.05)。血清ALT水平在S2、S3期顯著高于S0、S1期，差異有統計學意義(均P<0.05)，但ALT值在S4期卻低于S2、S3期，差異有統計學意義(均P<0.05)。年齡、血清HBV DNA與肝組織炎癥分期無明顯相關性(均P>0.05)，見表2。

表1 各指標與肝組織炎癥的關系

Note: Comparing to G1,1)P<0.05; Comparing to G2,2)P<0.05.

HBV--hepatitis B virus; HBeAg--hepatitis B e antigen; ALT--alanine aminotransferase.

表2 各指標與肝組織纖維化分期的關系

Note: Comparing to S0,1)P<0.05; Comparing to S1,2)P<0.05; Comparing to S2,3)P<0.05.

HBV--hepatitis B virus; HBeAg--hepatitis B e antigen; ALT--alanine aminotransferase.

2.3炎癥分級0.05)。按照纖維化分期分組比較：纖維化分期

表3 炎癥分級

Note: HBV--hepatitis B virus; HBeAg--hepatitis B e antigen; ALT--alanine aminotransferase.

2.4各指標預測肝組織炎癥≥G2或纖維化分期≥S2的比較 除年齡、HBV DNA外，血清HBeAg和ALT水平用于預測肝組織炎癥分級均有統計學意義(均P<0.01)，且HBeAg滴度預測肝組織炎癥≥G2的價值高于血清ALT，敏感度和特異度分別為76.31%和51.19%，見圖1A；血清HBeAg預測肝組織纖維化分期≥S2的靈敏度和特異度分別為70.29%和50.61%，但較血清ALT低(71.19%和54.36%)。見圖1B。

圖1 各指標預測肝組織炎癥≥G2、纖維化分期≥S2和HBcAg表達情況

2.5血清HBeAg滴度預測肝細胞表達HBcAg優于HBV DNA 進行肝組織免疫組織化學檢測的共134例，其中肝細胞HBcAg陽性88例，肝細胞HBcAg陰性46例。HBcAg陽性組血清HBeAg滴度及HBV DNA載量均高于HBcAg陰性組，ALT水平低于HBcAg陰性組，差異均有統計學意義(P<0.05)；HBcAg陽性組年齡低于HBcAg陰性組，但差異無統計學意義(P>0.05，見表6)。血清HBeAg滴度與HBV DNA水平指標用于判斷肝細胞HBcAg的表達均有顯著統計學意義(均P<0.01)；年齡、ALT用于判定肝細胞HBcAg的表達均無統計學意義(均P>0.05)；HBeAg滴度用于預測肝細胞表達HBcAg的靈敏度和特異度分別為80.02%和65.89%，高于血清HBV DNA(78.89%和43.21%)，見圖1C。

表4 肝細胞HBcAg陽性組與陰性組的比較

Note: HBV--hepatitis B virus; HBeAg--hepatitis B e antigen; ALT--alanine aminotransferase.

3 討 論

CHB是我國一種常見的傳染病[5]。國內外的乙型肝炎防治指南均明確指出，CHB的治療目標是持續抑制HBV復制，阻斷或延緩疾病進展為肝癌或失代償性肝病[5-7]?？共《局委煘镃HB的最基本治療，但無論是干擾素抑或核苷(酸)類似物其適應證均為HBV復制活躍同時存在一定程度的肝臟損害，臨床上判斷肝臟損害程度多采用血清ALT水平和(或)肝組織病理檢查。肝組織病理學檢查是判斷肝炎活動性和是否抗病毒治療的主要依據[5-7]，盡管肝組織穿刺操作簡便、相對安全，但也存在風險性及患者依從性差等問題，難以在我國普遍開展。因此在我國，臨床上更經常應用ALT作為評價肝臟炎癥程度的指標并以此指導是否行抗病毒治療。但是近年來國內外研究提示，ALT與病理關聯并不緊密[6,8-10]。有研究證實20%～30%ALT正常的HBV感染者其肝臟中仍存在中至重度壞死性炎癥，少數患者有顯著肝纖維化[10]。故單純依據血清ALT來判斷肝組織炎癥及纖維化程度并用于指導抗病毒治療，可能使得眾多患者失去抗病毒治療的最佳時機。鑒于肝穿刺是有創性檢查，探討常規實驗室檢查與肝組織病理相關性，尋找非創傷性手段以判斷肝臟損害程度，從而提高患者依從性，以早期、及時把握抗病毒治療時機，是目前國內外肝病領域的研究熱點之一。

HBeAg與HBV復制有緊密相關性，它既可誘導機體產生免疫耐受，使HBV逃逸，又是感染細胞的靶抗原，使更多的細胞毒性T細胞進入肝組織對感染的肝細胞進行攻擊，導致肝損害加重，而持續的肝炎活動可誘發或促進肝纖維化的發生。因此我們推測，HBeAg水平可能與肝組織病理存在一定程度的相關性。本研究發現，隨著肝組織炎癥及纖維化程度加劇，血清HBeAg滴度逐漸下降，ALT水平逐漸上升，而HBV DNA水平無明顯變化。血清HBeAg和ALT水平均可獨立預測肝組織炎癥≥G2和纖維化≥S2，均優于血清HBV DNA水平和年齡(肝組織炎癥≥G2和或纖維化≥S2為CHB抗病毒治療的適應征)。且血清HBeAg預測肝組織炎癥≥G2的價值優于ALT，而預測纖維化≥S2的價值略低于ALT。血清HBeAg預測肝纖維化分期的價值不及與炎癥分級關系顯著，考慮與肝纖維形成過程(肝星狀細胞激活后，促進自身增殖及膠原合成，并轉化為肌纖維細胞，合成大量細胞外基質并異常沉積于肝臟中)有關[11-12]。這個過程除了需要在肝臟炎癥長期存在及間斷加劇外，還需在轉化生長因子β1等細胞因子的共同參與[12]。

劉建芳等[13]報道，肝組織HBV DNA水平明顯高于血清HBV DNA的含量，且部分HBeAg陰性CHB患者血清HBV DNA低于檢測下限，但肝組織HBV DNA仍高于檢測上限，提示血清HBV DNA在一定程度上可反映HBV復制的活躍程度，但與肝組織HBV DNA水平并非完全平行變化。HBcAg為C基因編碼合成，首先在胞漿內形成，而后經核孔進入細胞核內進行復制，在血清中一般檢測不到游離的HBcAg，因HBcAg是病毒的核殼結構蛋白，故能反映HBV在肝內的存在，是體內HBV復制的重要指標[14]。國外文獻報道，肝細胞HBcAg陽性表達強度與肝內HBV DNA水平呈顯著正相關[14-16]。血清HBeAg和HBV DNA同為HBV復制指標，然而目前有關外周血HBeAg和肝內HBV DNA復制或免疫組化HBcAg表達的研究較少。本研究發現，肝細胞HBcAg陽性組血清HBeAg、HBV DNA水平均高于肝細胞HBcAg陰性組，且兩者互成顯著正相關，提示血清HBeAg、HBV DNA水平均可反映肝組織內HBV復制狀況。進一步研究顯示，血清HBeAg預測肝細胞表達HBcAg的靈敏度和特異度分別為80.02%和65.89%，高于血清HBV DNA，提示血清HBeAg較HBV DNA水平更能預測肝細胞HBcAg表達情況，更能反映肝內HBV DNA復制情況。

綜上所述，血清HBeAg與肝組織炎癥程度及纖維化分期呈負相關。血清HBeAg滴度判定肝組織炎癥程度的靈敏度及曲線下面積均優于年齡、ALT、HBV DNA水平，預測肝纖維化程度的價值低于ALT。血清HBeAg較血清HBV DNA更能反映肝細胞內HBV復制情況。因此血清HBeAg滴度可作為一種反應肝組織病理情況的無創性、簡便的實驗室檢測指標。聯合檢測血清HBeAg和ALT水平有助于判斷肝臟損害程度，及時把握抗病毒治療時機。

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