睪丸細(xì)胞生物學(xué)研究進(jìn)展

祝輝，崔毓桂，周作民

（1．南京醫(yī)科大學(xué)生殖醫(yī)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；2．南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科，南京210029）

睪丸是男性生殖腺，能產(chǎn)生精子和分泌雄激素。成人睪丸長(zhǎng)約4．5cm，寬約2．5cm，厚約3．0cm，重約12g。睪丸實(shí)質(zhì)被睪丸小隔分成200～300個(gè)睪丸小葉，每個(gè)睪丸小葉含1～4條曲細(xì)精管，管腔的周?chē)鸀榻Y(jié)締組織構(gòu)成的間質(zhì)。曲細(xì)精管主要由生精細(xì)胞和支持細(xì)胞（Sertoli cell）組成，是精子發(fā)生場(chǎng)所；間質(zhì)中主要含間質(zhì)細(xì)胞（Leydig cell），合成與分泌雄激素［1－2］。睪丸功能依賴(lài)生精細(xì)胞、支持細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的正常發(fā)育分化，從而形成正常的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，并在特定時(shí)期有序地表達(dá)相關(guān)基因／蛋白質(zhì)，以保證精子生成和雄激素分泌。本文簡(jiǎn)介睪丸細(xì)胞的發(fā)育分化，著重睪丸細(xì)胞的生物學(xué)研究進(jìn)展。

一、睪丸細(xì)胞的分化和發(fā)育

1．生精細(xì)胞的分化：生精細(xì)胞由原始生殖細(xì)胞（PGCs）分化而來(lái)［3－4］。關(guān)于人 PGCs分化發(fā)育的研究較少，報(bào)道顯示：人胚第7～9周時(shí)很多生殖細(xì)胞已具有生殖母細(xì)胞（性原細(xì)胞，gonocyte）表型；18周時(shí)分化為前精原細(xì)胞（prespermatogonia）［5－6］；隨著曲細(xì)精管的形成，早期散在于睪丸索中央或周邊的生殖細(xì)胞逐漸移位于管壁上皮細(xì)胞基底部，24周后顯示出精原細(xì)胞（spermatogonia）的特征［7］。對(duì)小鼠PGCs分化的研究顯示：出生后第1天的小鼠睪丸，大多數(shù)PGCs仍在索中央，但部分PGCs遷向基膜，此時(shí)的生殖細(xì)胞可稱(chēng)為生殖母細(xì)胞；至出生后第6天，生殖細(xì)胞絕大部分遷移至基膜，分化形成原始A型精原細(xì)胞（primitive type A spermatogonia）；出生后第8天，生精上皮中可見(jiàn)到A型精原細(xì)胞（type A spermatogonia）和B型精原細(xì)胞（type B spermatogonia）；此后直至青春期時(shí)，精原細(xì)胞才分化形成精母細(xì)胞，經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂和分化變形，最終生成精子［8－9］。

2．支持細(xì)胞的分化：在PGCs發(fā)育分化的同時(shí)，來(lái)源于初級(jí)性索的支持細(xì)胞也逐漸分化形成，此時(shí)的細(xì)胞有不規(guī)則的細(xì)胞核和突出的核仁。在胎兒睪丸中，支持細(xì)胞占據(jù)生精上皮的大部分。但從人胚20周至32周，支持細(xì)胞與生殖細(xì)胞之比約從3∶1減少為2∶1。至新生兒期，僅有少數(shù)支持細(xì)胞，核呈三角形著色深，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)少許張力原纖維，仍不具備性成熟期支持細(xì)胞的典型結(jié)構(gòu)［7，10］。此后直至青春期前，關(guān)于人支持細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的研究很少。在小鼠，出生后第1天，支持細(xì)胞多為長(zhǎng)橢圓形，核仁明顯，核膜可見(jiàn)有異染色質(zhì)附著；出生后第10天，支持細(xì)胞胞體向索中明顯突出，核色淺不規(guī)則，明顯可見(jiàn)核仁；大約在出生后第15天青春期開(kāi)始時(shí)，曲細(xì)精管管腔開(kāi)始形成，支持細(xì)胞呈現(xiàn)成熟期的典型結(jié)構(gòu)［10］。

3．間質(zhì)細(xì)胞的分化：分散在曲細(xì)精管之間的間充質(zhì)細(xì)胞分化為間質(zhì)細(xì)胞。在哺乳動(dòng)物，間質(zhì)細(xì)胞分為形態(tài)和生化特征不同的兩個(gè)類(lèi)群：胚胎間質(zhì)細(xì)胞（FLCs）和成年間質(zhì)細(xì)胞（ALCs）。人胚胎期，其間質(zhì)細(xì)胞前體（分化前型）在孕6～7周開(kāi)始功能激活；孕7周以后間質(zhì)細(xì)胞逐漸增殖分化，胞質(zhì)中滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線(xiàn)粒體開(kāi)始增加，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少；孕19周后間質(zhì)細(xì)胞變性退化。研究顯示：人胚7～14周，間質(zhì)細(xì)胞處于分化階段，細(xì)胞發(fā)育為分化型；14～18周，間質(zhì)細(xì)胞處于成熟發(fā)育階段，細(xì)胞轉(zhuǎn)化為成熟型，具有旺盛的合成分泌雄激素能力，形成胚胎時(shí)期雄激素的分泌高峰；人胚13～16周時(shí)，間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量最多，占睪丸體積一半以上［11－12］。ALCs不是來(lái)源于已有的FLCs，而可能來(lái)源于未分化的管周樣干細(xì)胞（Leydig干細(xì)胞）。在大鼠的研究顯示，Leydig干細(xì)胞出生后開(kāi)始增殖，出生后14d轉(zhuǎn)化為紡錘形的前體Leydig細(xì)胞；前體細(xì)胞短暫存在于14～28d間，在這個(gè)時(shí)期細(xì)胞逐漸增殖轉(zhuǎn)化為未成熟Leydig細(xì)胞，胞質(zhì)中含有大量脂滴；未成熟Leydig細(xì)胞經(jīng)過(guò)1～2次分裂及進(jìn)一步分化，出生后56d形成成熟的ALCs，胞質(zhì)中脂滴減少，黃體生成素（LH）受體增多［13］。

二、生精細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)

1．精原細(xì)胞：精原細(xì)胞位于生精上皮基膜。對(duì)大鼠和小鼠精原細(xì)胞的研究較多，其細(xì)胞類(lèi)型和生化表型與人精原細(xì)胞有所不同。小鼠精原細(xì)胞分為A型精原細(xì)胞，中間型精原細(xì)胞（intermediat spermatogonia）和B型精原細(xì)胞；A型精原細(xì)胞又分為未分化和分化型兩大類(lèi)。未分化A型精原細(xì)胞包括 A-single（As）、A-pair（Apr）和 A-aligned（Aal）細(xì)胞，As是單個(gè)存在的精原細(xì)胞，分裂增殖產(chǎn)生2個(gè)通過(guò)胞質(zhì)橋相連的Apr細(xì)胞，Apr細(xì)胞進(jìn)一步分裂形成4、8、16個(gè)成鏈狀排列的Aal細(xì)胞。這些未分化精原細(xì)胞（主要是Aal細(xì)胞）進(jìn)而增殖分化生成A1、A2、A3、A4細(xì)胞，它們屬于分化的A型精原細(xì)胞。分化的A型精原細(xì)胞分裂分化生成中間型精原細(xì)胞、B型精原細(xì)胞［14］。早先的研究中，一般將未分化的A型精原細(xì)胞認(rèn)為是小鼠的精原干細(xì)胞（SSCs），現(xiàn)在研究表明只有As細(xì)胞是SSCs，并且可能并不是所有As細(xì)胞均具有干細(xì)胞特征［14－15］。

哺乳動(dòng)物的精子發(fā)生是經(jīng)典的干細(xì)胞依賴(lài)過(guò)程，SSCs經(jīng)自我增殖和分化最終形成精子。因此，研究SSCs增殖和分化的機(jī)制已成為生殖領(lǐng)域的重要課題，是深入揭示精子發(fā)生機(jī)制和診治雄性不育的重要途徑。借助基因敲除、精原細(xì)胞移植技術(shù)、SSCs體外培養(yǎng)等研究平臺(tái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)小鼠SSCs增殖分化機(jī)制的研究已取得一定進(jìn)展，證實(shí)了一系列生長(zhǎng)因子（如 GDNF、FGF2）、信號(hào)通路（如PI3KAkt通路、MEK 通路）、轉(zhuǎn)錄因子（如 Plzf、Etv5、Bcl6b）、MicroRNAs（miRs）以及細(xì)胞所處微環(huán)境（如黏附分子、干細(xì)胞龕）在其中的作用［14－16］，但完整的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)尚未完全闡明。值得注意的是，已有研究顯示小鼠和人的精原干細(xì)胞有不同的表面標(biāo)記物［17］，它們分化為精母細(xì)胞的分子機(jī)理可能也存在著差異。

2．初級(jí)精母細(xì)胞：由B型精原細(xì)胞分裂形成的初級(jí)精母細(xì)胞處于分裂間期，稱(chēng)細(xì)線(xiàn)前期精母細(xì)胞，其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與B型精原細(xì)胞相似。間期的初級(jí)精母細(xì)胞停留時(shí)間很短，立即進(jìn)入分裂期，此時(shí)的初級(jí)精母細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器增多，高爾基復(fù)合體發(fā)達(dá)，線(xiàn)粒體逐漸變成泡狀線(xiàn)粒體，胞質(zhì)密度高于精原細(xì)胞。由于分裂前期較長(zhǎng)，達(dá)22d，所以在切片上可以看到大量處于分裂前期各階段的初級(jí)精母細(xì)胞，根據(jù)它們的細(xì)胞核和染色體形態(tài)特征不同，可分為細(xì)線(xiàn)期、偶線(xiàn)期、粗線(xiàn)期、雙線(xiàn)期和終變期［1－2，18］。

初級(jí)精母細(xì)胞是啟動(dòng)減數(shù)分裂的時(shí)期，這是配子發(fā)生的第一個(gè)關(guān)鍵步驟，闡明其調(diào)控機(jī)制是生殖生物學(xué)研究的核心內(nèi)容。在哺乳動(dòng)物中，減數(shù)分裂啟動(dòng)機(jī)制的研究大多在胚胎期進(jìn)行，研究顯示減數(shù)分裂啟動(dòng)需要內(nèi)在與外在兩方面條件：外源條件主要是視黃酸（RA）降解酶CYP26b1介導(dǎo)的水平；內(nèi)在條件為原始生殖細(xì)胞在特定時(shí)期表達(dá)DAZL蛋白，從而使細(xì)胞具備響應(yīng)RA的能力，保證了Stra8、Dmc1、Scp3等減數(shù)分裂相關(guān)基因的正常表達(dá)［19］。在雌性小鼠胚胎卵巢內(nèi)，CYP26b1的水平低下，保證高水平的RA作用于生殖細(xì)胞，誘導(dǎo)Stra8表達(dá)而啟動(dòng)減數(shù)分裂。而雄性小鼠胚胎睪丸中CYP26b1高表達(dá)，RA水平低下，抑制Stra8表達(dá)，使生殖細(xì)胞阻滯于有絲分裂G0／G1期；至出生后青春期，睪丸中Stra8表達(dá)，啟動(dòng)減數(shù)分裂［20］。然而，近來(lái)有研究顯示Stra8的表達(dá)不依賴(lài)CYP26b1介導(dǎo)的RA水平［21］，RA在減數(shù)分裂起始過(guò)程中的作用受到質(zhì)疑。因此，減數(shù)分裂的啟動(dòng)受哪些因子調(diào)控以及如何調(diào)控，仍是迫切需要解決的問(wèn)題。

3．次級(jí)精母細(xì)胞：初級(jí)精母細(xì)胞完成第一次減數(shù)分裂，形成兩個(gè)體積較小的次級(jí)精母細(xì)胞（secondary spermatocyte）。次級(jí)精母細(xì)胞更靠近管腔，具有均質(zhì)狀的圓形核，染色質(zhì)呈細(xì)網(wǎng)狀，并有一些大而深染的環(huán)形塊［1－2］。次級(jí)精母細(xì)胞存在的時(shí)期短，在組織切片中不易見(jiàn)到。

4．精子細(xì)胞：次級(jí)精母細(xì)胞完成第二次減數(shù)分裂，形成精子細(xì)胞（spermatid）。根據(jù)精子細(xì)胞發(fā)育的成熟程度及形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，可分為圓形精子細(xì)胞（round spermatid，RS）和長(zhǎng)形精子細(xì)胞（elongated spermatid，ES）。精子細(xì)胞經(jīng)核的濃縮和核蛋白轉(zhuǎn)型、頂體形成、尾部形成、多余胞質(zhì)的丟失等一系列復(fù)雜而有序的過(guò)程，轉(zhuǎn)變?yōu)榫樱╯permatozoon），稱(chēng)為精子變形（spermiogenesis）。由于單倍體細(xì)胞的特殊性，對(duì)于精子變形的研究，以往主要借助于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)觀察、超微結(jié)構(gòu)觀察、免疫細(xì)胞化學(xué)等形態(tài)學(xué)手段，研究顯示一些特異的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)可能參與精子變形的各種生物學(xué)事件。如高爾基體分泌產(chǎn)生的囊泡參與頂體形成，隨著精子細(xì)胞核的濃縮變長(zhǎng)，高爾基體不斷產(chǎn)生囊泡與之融合，呈扁平狀覆蓋在細(xì)胞核表面，逐漸包繞精子細(xì)胞核的大半部形成頂體［22］；頂漿復(fù)合物位于精子頂體與核之間，能穩(wěn)定頂體并將其錨定在精子核上，同時(shí)作為骨架提供一定的機(jī)械應(yīng)力來(lái)調(diào)節(jié)外力對(duì)核的拉伸作用［23］；精子頸帶是正在變形的長(zhǎng)形精子細(xì)胞特有的一種微管結(jié)構(gòu)，一方面它與頂體、頂漿一起形成頂體－頂漿－頸帶復(fù)合物，參與核的濃縮與變形，此外還參與精子尾部以及殘余體的形成［24］。近年來(lái)，隨著基因敲除以及各種高通量技術(shù)的應(yīng)用，逐漸在分子水平揭示精子變形的機(jī)制，特異的基因／蛋白質(zhì)及其之間的相互作用被證實(shí)參與精子變形的各個(gè)生物學(xué)事件［25］。

5．精子：人類(lèi)精子是男性生殖細(xì)胞系發(fā)育的終端產(chǎn)物，它最終通過(guò)與卵細(xì)胞融合完成受精，將父輩的遺傳信息傳遞給后代。在附睪分泌蛋白的作用下，大量的精子功能蛋白發(fā)生修飾加工，如磷酸化、糖基化、酯化、酰化、羧基化，使精子逐步獲得各項(xiàng)功能［26］。目前對(duì)精子功能的研究，除揭示精子特異基因的表達(dá)種類(lèi)、時(shí)空和表達(dá)量變化外，其蛋白本身的修飾及調(diào)控也是非常重要的內(nèi)容。事實(shí)上，精子特殊功能發(fā)揮的背后存在著非常復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，絕不是一個(gè)或幾個(gè)基因／蛋白所能控制。近年來(lái)，高通量的轉(zhuǎn)錄組以及蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)已應(yīng)用于精子功能及其調(diào)控的研究［26－28］，這為全面揭示精子功能提供了基礎(chǔ)。

三、支持細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)

1．支持細(xì)胞（Sertoli細(xì)胞）形態(tài)結(jié)構(gòu)：成熟型支持細(xì)胞形狀復(fù)雜，在光鏡下甚至不能看清楚其細(xì)胞輪廓，近年的電鏡研究有一些新進(jìn)展。支持細(xì)胞基部緊貼基膜，頂部伸達(dá)管腔，側(cè)面和腔面伸出許多不規(guī)則突起，包圍著各級(jí)生精細(xì)胞。支持細(xì)胞核大，核表面有一至數(shù)個(gè)較深的凹陷，核孔多，核質(zhì)均質(zhì)狀，異染色質(zhì)稀疏，核仁發(fā)達(dá)［2，29］。支持細(xì)胞胞質(zhì)的電子密度較高，含有各種細(xì)胞器：（1）大量細(xì)長(zhǎng)形的線(xiàn)粒體，基質(zhì)致密。（2）發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體，位于核附近，由平行的池及小囊泡組成。（3）呈管狀的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，主要分布在細(xì)胞基部。（4）細(xì)胞基部的滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)常聚集在脂滴周?chē)?，形成同心圓狀結(jié)構(gòu)；在圍繞精子頭的細(xì)胞頂部胞質(zhì)中，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)平行排列，形成表面小池，可能與精子的排放有關(guān)。（5）溶酶體系統(tǒng)的組成成分多樣化，與支持細(xì)胞降解和處理精子殘余胞質(zhì)的功能相關(guān)。（6）含微絲和微管成分，它們是支持細(xì)胞的骨架，是細(xì)胞形狀主動(dòng)改變的基礎(chǔ)，保證生精細(xì)胞在生精上皮中逐步上升以及精子的排放；其中，在細(xì)胞頂部凹陷深處的平行微絲束，是在精子細(xì)胞核濃縮的過(guò)程中形成的，可能是維持精子細(xì)胞附著于支持細(xì)胞的一種特殊裝置［2，29］。除各種細(xì)胞器外，在支持細(xì)胞頂端胞質(zhì)中?？梢?jiàn)精子殘余體；基部胞質(zhì)中則含有脂滴、糖原等內(nèi)含物，脂滴的含量和支持細(xì)胞的功能狀態(tài)有關(guān)，在精子排放后其含量增多，可能是從吞噬的殘余體轉(zhuǎn)化而來(lái)，隨后脂滴逐漸減少［2，29］。

2．支持細(xì)胞的連接結(jié)構(gòu)：相鄰支持細(xì)胞以及支持細(xì)胞－生精細(xì)胞接觸面的連接結(jié)構(gòu)，是支持細(xì)胞行使功能的重要結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，主要分為三類(lèi)：緊密連接（tight junction，TJ）、錨定連接（anchoring junction）和縫隙連接（gap junction，GJ）［30］。緊密連接是相鄰支持細(xì)胞基部細(xì)胞膜間形成的連接結(jié)構(gòu)，電鏡下呈點(diǎn)狀、斑狀或帶狀，由閉鎖蛋白（occludins）、緊密連接蛋白（claudins）、連接黏附分子（junctional adhesion molecules，JAMs）等構(gòu)成，迄今報(bào)道的緊密連接相關(guān)蛋白已有100多種，這些蛋白在細(xì)胞間連接和細(xì)胞能動(dòng)性方面發(fā)揮重要作用［30－31］。支持細(xì)胞間形成的緊密連接是血－睪屏障（blood-testis barrier，BTB）的主要組成部分，將生精上皮分隔成基底室（basal compartment）和近腔室（adluminal compartment），基底室有精原細(xì)胞和細(xì)線(xiàn)前期精母細(xì)胞，近腔室有較晚期初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和精子［30－31］。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，精子發(fā)生過(guò)程中支持細(xì)胞緊密連接的重建可能直接或間接地與生殖細(xì)胞發(fā)育過(guò)程及生殖細(xì)胞穿過(guò)BTB有密切聯(lián)系。因此，研究緊密連接的重建對(duì)今后探索精子發(fā)生機(jī)制有極為重要的意義。錨定連接包括黏附連接（adheren junction，AJ）、細(xì) 胞 外 質(zhì) 特 化 （ectoplasmic specialization，ES）、管狀復(fù)合物（tubulobulbar complex，TBC）、橋粒以及半橋粒五種連接結(jié)構(gòu)，參與組成BTB［30］?？p隙連接由相鄰細(xì)胞膜上的GJ蛋白半通道對(duì)接形成，是支持細(xì)胞間以及支持細(xì)胞－生精細(xì)胞間的化學(xué)信號(hào)通道，參與異質(zhì)細(xì)胞間的電子代謝作用，使相鄰細(xì)胞活動(dòng)同步，對(duì)精子發(fā)生過(guò)程中的同期化現(xiàn)象具有重要作用［32］。

3．BTB：存在于曲細(xì)精管與睪丸間質(zhì)的血管之間，由以下幾部分組成：（1）毛細(xì)血管內(nèi)皮及基膜；（2）間質(zhì)的結(jié)締組織；（3）生精上皮基膜；（4）支持細(xì)胞間的連接結(jié)構(gòu)。BTB中的細(xì)胞連接可有多種不同的連接方式，包括TJ、基底TBC、基底ES、橋粒和縫隙連接。其中，具有周期性重建作用的TJ是構(gòu)成BTB最為重要的組成成分，對(duì)血液中各種物質(zhì)的通透性選擇性很強(qiáng)，是屏障中最不易通過(guò)的結(jié)構(gòu)，而B(niǎo)TB的有序開(kāi)放是精子生成的保證［30，33］。BTB的一個(gè)重要功能是形成并維持有利于精子發(fā)生的微環(huán)境；另一方面，BTB還是一道有效的免疫屏障，使精母細(xì)胞和精子抗原不能與體內(nèi)的免疫系統(tǒng)接觸，因而可避免生精細(xì)胞自身免疫反應(yīng)發(fā)生。

四、間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)

出生后，ALCs逐漸開(kāi)始增殖分化，青春期后分化為成熟的ALCs。成熟ALCs呈多角形或球形，直徑約為15～20μm；核圓居中；胞質(zhì)嗜酸性強(qiáng)，含豐富的滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、管狀嵴線(xiàn)粒體和脂滴［1－2］。間質(zhì)細(xì)胞的主要功能是合成和分泌雄激素。胞質(zhì)中的滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)含豐富的膽固醇酯酶，能催化由血中攝取的脂肪酸和膽固醇形成酯化膽固醇并儲(chǔ)存在脂滴中。脂滴周?chē)锌扇苄怎ッ福纱呋沃械哪懝檀减メ尫懦鲇坞x的膽固醇作為合成類(lèi)固醇的原料。合成雄激素功能活躍的Leydig細(xì)胞利用脂滴中的物質(zhì)比較快，脂滴減少，體積變小；反之，合成雄激素功能不活躍的間質(zhì)細(xì)胞，脂滴多，體積也大。因此脂滴的多少，在一定程度上可作為衡量間質(zhì)細(xì)胞功能的一個(gè)形態(tài)學(xué)指標(biāo)。脂滴釋放的膽固醇快速轉(zhuǎn)運(yùn)至線(xiàn)粒體內(nèi)膜，經(jīng)線(xiàn)粒體酶的作用轉(zhuǎn)化為孕烯醇酮，此后在滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)酶的作用下再轉(zhuǎn)化為睪酮。成年期時(shí)睪酮分泌穩(wěn)定，以維持精子發(fā)生、男性第二性征和性功能；睪酮還能促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、骨骺融合，并刺激骨髓造血，此外對(duì)機(jī)體免疫功能也有調(diào)節(jié)作用［1－2］。近年研究顯示，間質(zhì)細(xì)胞還能合成和分泌多種生長(zhǎng)因子和生物活性物質(zhì)，參與睪丸功能及骨代謝的調(diào)節(jié)［34］。

近年來(lái)，借助于核磁共振、透射電鏡、免疫電鏡、激光共聚焦顯微鏡等先進(jìn)儀器和技術(shù)，睪丸細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的研究仍大有可為，如支持細(xì)胞的構(gòu)象、支持細(xì)胞與生精細(xì)胞的連接結(jié)構(gòu)、精子發(fā)生和精子形成。此外，高通量技術(shù)在男性生殖研究中的應(yīng)用，將有助于全面、深入地在分子水平理解精子發(fā)生和精子功能的生物學(xué)過(guò)程及調(diào)控。

［1］ Junqueira LC，Carneiro J．Basic Histology［M］．New York：McGraw-Hill Co．，2005，468-479．

［2］ 成令忠，鐘翠平，蔡文琴 ．現(xiàn)代組織學(xué) ［M］．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社2003：968-977．

［3］ Sadler TW．Langman’s Medical Embryology ［M］．Philadelphia：Lippincott Williams ＆ Wilkins，2006：337-340．

［4］ Sekido R，Lovell-Badge R．Genetic control of testis development［J］．Sex Dev，2013，7：21-32．

［5］ Gaskell TL， Esnal A， Robinson LL， et al．Immunohistochemical profiling of germ cells within the human fetal testis：identification of three subpopulations ［J］．Biol Reprod，2004，71：2012-2021．

［6］ Ostrer H，Huang HY，Masch RJ，et al．A cellular study of human testis development［J］．Sex Dev，2007，1：286-292．

［7］ 谷華運(yùn) 主編 ．中國(guó)人胚胎發(fā)育時(shí)序和畸胎預(yù)防 ［M］．上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1993：143-145．

［8］ Prabhu SM，Meistrich ML，McLaughlin EA，et al．Expression of c-Kit receptor mRNA and protein in the developing，adult and irradiated rodent testis ［J］．Reproduction，2006，131：489-499．

［9］ Saitou M，Yamaji M．Primordial germ cells in mice［J］．Cold Spring Harb Perspect Biol，2012，4．

［10］ Alukal JP，Lamb DJ．The Sertoli cell：morphology，function，and regulation ［A］．In：Lipshultz LI，Howards SS，Niederberger CS（ed）．Infertility in the Male［M］．London：Cambridge University Press，2009：48-73．

［11］ Svechnikov K，Landreh L，Weisser J，et al．Origin，development and regulation of human Leydig cells［J］．Horm Res Paediatr，2010，73：93-101．

［12］ Zirkin BR，Papadopoulos V，Hard MP．Leydig cell development and function［A］．In：Lipshultz LI，Howards SS，Niederberger CS（ed）．Infertility in the Male［M］．London：Cambridge University Press，2009：29-47．

［13］ Chen H，Stanley E，Jin S，et al．Stem Leydig cells：from fetal to aged animals［J］．Birth Defects Res C Embryo Today，2010，90：272-283．

［14］ Kanatsu-Shinohara M，Shinohara T．Spermatogonial stem cell self-renewal and development［J］．Annu Rev Cell Dev Biol，2013，29：163-187．

［15］ Oatley JM，Brinster RL．Regulation of spermatogonial stem cell self-renewal in mammals［J］．Annu Rev Cell Dev Biol，2008，24：263-286．

［16］ Niu Z，Goodyear SM，Rao S，et al．MicroRNA-21regulates the self-renewal of mouse spermatogonial stem cells［J］．Proc Natl Acad Sci USA，2011，108：12740-12745．

［17］ He Z，Kokkinaki M，Jiang J，et al．Isolation，characterization，and culture of human spermatogonia［J］．Biol Reprod，2010，82：363-372．

［18］ Hermo L，Pelletier RM，Cyr DG，et al．Surfing the wave，cycle，life history，and genes／proteins expressed by testicular germ cells．Part 1：background to spermatogenesis，spermatogonia，and spermatocyte ［J］．Microsc Res Tech，2010，73：241-278．

［19］ Lin Y，Gill ME，Koubova J，et al．Germ cell-intrinsic andextrinsic factors govern meiotic initiation in mouse embryos［J］．Science，2008，322：1685-1687．

［20］ Anderson EL，Baltus AE，Roepers-Gajadien HL，et al．Stra8 and its inducer，retinoic acid，regulate meiotic initiation in both spermatogenesis and oogenesis in mice［J］．Proc Natl Acad Sci USA，2008，105：14976-14980．

［21］ Kumar S，Chatzi C，Brade T，et al．Sex-specific timing of meiotic initiation is regulated by Cyp26b1independent of retinoic acid signaling［J］．Nat Commun，2011，2：151．

［22］ Ramalho-Santos J，Moreno RD，Wessel GM，et al．Membrane trafficking machinery components associated with the mammalian acrosome during spermiogenesis［J］．Exp Cell Res，2001，267：45-60．

［23］ Kierszenbaum AL，Tres LL．The acrosome-acroplaxomemanchette complex and the shaping of the spermatid head［J］．Arch Histol Cytol，2004，67：271-284．

［24］ Hermo L，Pelletier RM，Cyr DG，et al．Surfing the wave，cycle，life history，and genes／proteins expressed by testicular germ cells．Part 2：changes in spermatid organelles associated with development of spermatozoa ［J］．Microsc Res Tech，2010，73：279-319．

［25］ Guo X，Shen J，Xia Z，et al．Proteomic analysis of proteins involved in spermiogenesis in mouse［J］．J Proteome Res，2010，9：1246-1256．

［26］ Guyonnet B，Dacheux F，Dacheux JL，et al．The epididymal transcriptome and proteome provide some insights into new epididymal regulations［J］．J Androl，2011，32：651-664．

［27］ Wang G，Guo Y，Zhou T，et al．In-depth proteomic analysis of the human sperm reveals complex protein compositions［J］．J Proteomics，2013，79：114-122．

［28］ Wang G，Wu Y，Zhou T，et al．Mapping of the N-linked glycoproteome of human spermatozoa［J］．J Proteome Res，2013，12：5750-5759．

［29］ Brehm R，Steger K．Regulation of Sertoli cell and germ cell differentation［M］．Berlin：Springer-Verlag，2005，7-11．

［30］ Lee NP，Wong EW，Mruk DD，et al．Testicular cell junction：A novel target for male contraception［J］．Curr Med Chem，2009，16：906-915．

［31］ Cheng CY，Mruk DD．Cell junction dynamics in the testis：Sertoli-germ cell interactions and male contraceptive development［J］．Physiol Rev，2002，82：825-874．

［32］ Saez JC，Berthoud VM，Branes MC，et al．Plasma membrane channels formed by connexins：their regulation and functions［J］．Physiol Rev，2003，83：359-400．

［33］ Wong EW，Mruk DD，Cheng CY．Biology and regulation of ectoplasmic specialization，an atypical adherens junction type，in the testis［J］．Biochim Biophys Acta，2008，1778：692-708．

［34］ Ferlin A，Selice R，Carraro U，et al．Testicular function and bone metabolism-beyond testosterone ［J］． Nat Rev Endocrinol，2013，9：548-554．