水貂綠膿桿菌和肺炎克雷伯菌混合感染的診治

王秋菊 戴秀美 王清明 常維山*

（①山東菁華農(nóng)牧-諸城市皮毛動物研究所 山東 諸城 262200②山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院 山東 泰安)

2013年7月30日，山東諸城市某水貂養(yǎng)殖場發(fā)生采食量下降，呼吸困難，口鼻流血，死前尖叫為特征的水貂急性傳染病。該場共飼養(yǎng)水貂1500只，6d死亡100多只，送諸城市皮毛動物研究所診斷，通過臨床癥狀、病理剖檢及實驗室檢驗，確診為綠膿桿菌和肺炎克雷伯菌混合感染。

1 臨床特征

病貂表現(xiàn)為突然發(fā)病，倒地死亡，食欲不振，精神沉郁，體溫升高，鼻鏡干燥，呼吸困難，呈腹式呼吸，口鼻流血，死前尖叫，散發(fā)，病程短，1～2d死亡。用頭孢氨芐和恩諾沙星治療未見明顯效果。

2 剖檢變化

頸部皮下腫大有膿泡，剖開后流出粘稠的灰白色的膿汁，局部肌肉呈暗紅色;氣管環(huán)輕微出血，氣管內(nèi)有大量的泡沫狀含有濃汁的液體；胸腔積液；胸腺有點狀出血；整個肺臟大面積淤血、出血，切面流出泡沫狀血液，肺門淋巴結(jié)腫大出血；肝臟稍發(fā)黃，輕度腫大；脾臟腫脹，整個呈暗紅色，質(zhì)地變硬具有彈性；腎臟被膜易剝落，皮質(zhì)髓質(zhì)均呈暗紅色，稍腫；腸系膜淋巴結(jié)腫脹，出血，有膿性滲出。

3 實驗室診斷

3.1 犬瘟熱病毒(CDV)檢測 從心臟、肺臟、肝臟、膀胱、直腸、取樣加入稀釋液中，混勻后滴入犬瘟熱檢測卡，數(shù)分鐘后觀察結(jié)果為陰性，排除是犬瘟熱感染。

3.2 病料涂片鏡檢 無菌取新鮮病死貂肺臟、肝臟、脾臟、心血、淋巴結(jié)等分別進行直接涂片，革蘭氏染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)有一種數(shù)量不等的單個、成雙或呈短鏈狀排列的中等大小革蘭氏陰性桿菌；另有一種細菌呈革蘭陰性的球桿菌，菌體較大有莢膜，成雙或短鏈狀或單個排列。

3.3 細菌分離培養(yǎng) 在病料涂片鏡檢的同時，無菌取上述病料接種普通瓊脂、麥康凱瓊脂以及鮮血瓊脂培養(yǎng)基，放入37℃恒溫箱中進行有氧和燭缸法厭氧培養(yǎng)24h，觀察培養(yǎng)特性。肺臟、肝臟、脾臟、淋巴結(jié)以及心血在普通瓊脂培養(yǎng)基，均形成圓形、隆起、濕潤、邊緣整齊、帶有明顯藍綠色和灰白色的菌落。在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上，出現(xiàn)2種菌落，一種菌落較大，呈灰褐色，周圍有溶血環(huán)；另一種呈灰白色，不溶血。在麥康凱培養(yǎng)基上，長出圓形、隆起、易融合的黏液樣的粉紅色和灰綠色的2種菌落，粉紅色菌落用接種環(huán)挑取呈絲狀粘連，鏡檢為卵圓形且有透明莢膜的短桿菌；灰綠色菌落與普通瓊脂上藍綠色菌落和鮮血瓊脂上溶血的菌落的細菌相一致。將觀察到的2種細菌進行純培養(yǎng)，革蘭氏染色、鏡檢，均為單個、成雙或呈短鏈狀排列的中等大小的革蘭氏陰性桿菌，初步判定為綠膿桿菌和肺炎克雷伯菌。

3.4 生化鑒定 將分離純化的兩種菌進行分別接種生化反應(yīng)管進行生化鑒定，溶血的藍綠色菌落結(jié)果為：分解葡萄糖、伯膠糖、單奶糖、甘露糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；不分解麥芽糖、菊糖、棉籽糖、甘露醇、乳糖及蔗糖，能液化明膠；分解尿素，不形成吲哚，氧化酶試驗陽性，可利用枸櫞酸鹽；不產(chǎn)生H2S，MR試驗和VP試驗均為陰性。在麥康凱上生長成粉色的不溶血的菌落結(jié)果為：能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、鼠李糖、甘露醇、木糖、棉籽糖、阿拉伯糖和水楊苷產(chǎn)酸產(chǎn)氣；不水解肌醇和山梨醇，不液化明膠；不產(chǎn)生H2S和靛基質(zhì)，MR試驗陽性，VP試驗陰性。以上生化反應(yīng)記過符合綠膿桿菌和克雷伯菌的特性，根據(jù)以上實驗確定為綠膿桿菌和肺炎克雷伯菌。

3.5 動物試驗 選用8只健康小白鼠做動物試驗，分為4組每組3只。1組和2組分別用綠膿桿菌和肺炎克雷伯氏菌24h肉湯培養(yǎng)物腹腔注射，0.1ml/只，3組腹腔注射綠膿桿菌和克雷伯菌的混液0.1ml/只，4組注射滅菌生理鹽水作為對照組。結(jié)果顯示，4組對照組全部正常，無一發(fā)病；1、2、3組小白鼠很快出現(xiàn)精神沉郁、體溫升高癥狀，24h內(nèi)全部死亡，解剖后用肝臟、心血等涂片、鏡檢，結(jié)果檢出大量與接種細菌形態(tài)相同的病菌。通過以上綜合診斷，確診為綠膿桿菌和肺炎克雷伯菌混合感染。

4 藥敏試驗

采用常規(guī)紙片法選用16種常用抗菌藥物對分離的綠膿桿菌和肺炎克雷伯菌進行藥物敏感試驗，分別選擇阿米卡星、恩諾沙星、復方新諾明、強力霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、新霉素、多粘菌素B、慶大霉素、左氧氟沙星、磺胺二甲氧嘧啶、頭孢噻肟、替米考星、痢菌凈、大觀霉素、安普霉素等16種藥物進行藥敏實驗，結(jié)果表明2種菌對環(huán)丙沙星、新霉素、多粘菌素B、慶大霉素高敏，強力霉素、頭孢噻肟、恩諾沙星中敏，克雷伯菌對大觀霉素、安普霉素、復方新諾明中敏，綠膿桿菌表現(xiàn)低敏，其他藥物均無明顯抑菌環(huán)。

5 治療

（1）立即對病貂和有癥狀的貂進行隔離；對籠舍、地面、糞便及時進行消毒，飼槽和飲水槽用菁華安寧徹底清洗消毒，1次/d；對病死貂進行深埋活焚燒；使用新鮮飼料，加強飼養(yǎng)管理，提高貂群的抗病力。（2）根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，大群投喂肺炎速治和清瘟止痢疾散，清熱解毒，抗菌消炎，1次/d，連用5d，同時配合用黃芪多糖、電解多維、維生素C、維生素B進行輔助治療，用藥1d后死亡減少，3d后死亡停止，5d后全群恢復正常。

6 討論與小結(jié)

近年來隨著毛皮動物養(yǎng)殖的發(fā)展，疾病發(fā)展也越來越嚴重，出現(xiàn)多種疾病混合感染或者繼發(fā)感染的現(xiàn)象。綠膿桿菌又稱銅綠假單胞菌主要引起水貂的貂出血性肺炎，臨床癥狀主要急性死亡，死前呼吸困難以及口，鼻流泡沫狀血液，肺臟大面積出血淤血以及腦膜炎為特征機型敗血癥疾病。本病發(fā)病急，病程短，死亡率高。肺炎克雷伯菌主要寄生在水貂的呼吸道和腸道，是條件致病菌，主要引起以膿腫蜂窩織炎，麻痹以及膿毒敗血癥。本病常爆發(fā)流行，死亡率較高。通過臨床癥狀，解剖癥狀，病原的形態(tài)學觀察、分離培養(yǎng)、生化試驗和動物致病試驗，證實該起水貂發(fā)病是由綠膿桿菌和肺炎克雷伯菌混合感染所致。對這2種病發(fā)生和防治分析主要有以下幾個方面：（1）7～9月份正處于炎熱的夏季，也是綠膿桿菌和肺炎克雷伯菌發(fā)病的高峰期，激素貂開始換毛，生長迅速，抵抗力降低，致使體內(nèi)存在的條件病原菌大量繁殖，最終引起感染和死亡。夏季天氣炎熱，貂舍通風散熱差，高溫高濕，水貂散熱功能較差，尤其是黑貂發(fā)病明顯高于白貂，公貂發(fā)病高于母貂，打激素的水貂發(fā)病高于留種未打激素的水貂，因此夏季對水貂應(yīng)加強管理，做好通風、降溫、防暑的工作。（2）綠膿桿菌在自然界廣泛存在，當綠膿桿菌污染環(huán)境、飼料、被毛，在外界環(huán)境因素作用下，通過口腔、鼻腔侵入體內(nèi)引起發(fā)病，因此要嚴格監(jiān)測飼料衛(wèi)生和水源衛(wèi)生，防止病從口入。注意環(huán)境的消毒，加強飼養(yǎng)管理，可以有效預防該病發(fā)生。另外這兩種菌容易產(chǎn)生耐藥性，要選擇幾種消毒劑交叉使用。對于有發(fā)生水貂出血性肺炎的養(yǎng)殖場，可以定期接種綠膿桿菌疫苗，對預防綠膿桿菌病有一定效果，對2種菌也可以提前用藥物預防。（3）發(fā)病后畜主擅自使用多種藥物治療，使細菌對多種藥物已產(chǎn)生耐藥性，增加了治療的難度。為了減少經(jīng)濟損失和不必要的浪費，發(fā)病后應(yīng)立即到相關(guān)部門進行診斷，通過藥敏試驗確定敏感藥物進行治療，才能收到顯著的防治效果。這兩種菌對抗生素極易產(chǎn)生耐藥，采用抗菌素治療時應(yīng)首選高敏藥物，合理用藥(選擇敏感度高但是損傷小的藥物，慶大霉素雖然敏感但是腎毒性較強，不建議選用)，配合中藥標本兼治，有利于貂群早日恢復健康。