微柱凝膠卡式法在臨床輸血中的應用價值分析

葉巧國，張衛良，盧德權，楊毓，何靜，李交，梁麗雯

(1、佛山市順德區第一人民醫院附屬陳村醫院檢驗科，廣東 佛山 528300；2、廣州市白云區中醫醫院；3、廣州醫科大學第四附屬醫院；4、佛山市順德區中心血站)

隨著輸血醫學的不斷發展，輸血已經成為了臨床一種特殊治療和搶救生命的重要措施，傳統的交叉配血方法有鹽水法、酶法、聚凝胺法等，這些方法靈敏度低，操作繁瑣，耗時長，影響因素多，嚴重影響了受血者的輸血安全，引起了臨床的高度重視。微柱凝膠技術是近年來國際公認的安全輸血的推薦方法,該法克服了傳統方法的種種缺陷，安全、快速、靈敏，為臨床安全輸血提供了很好的保障,已成為許多發達國家血型血清學檢測的常規技術，我國目前已逐步推廣使用。我院自2009年引入該技術，現對2012年5月至2013年8月有輸血史、妊娠史或短期內需多次輸血的備血、配血標本932例，采用微柱凝膠卡式法進行不規則抗體檢測和交叉配血，結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗對象 2012年5月至2013年8月我院有輸血史、妊娠史或短期內需多次輸血者的備血和配血標本932例，其中男529例，女403例，其中：有輸血史的681例，有妊娠史的87例，短期內需多次輸血者6例，另外，有輸血史+妊娠史的有29例，有輸血史+短期內需多次輸血的有127例，有輸血史+妊娠史+短期內需多次輸血的共有2例，年齡為21d至92歲。

1.2 主要試劑與儀器 ABO、Rh(D)血型定型檢測卡、微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡(中山市生科試劑儀器有限公司)；ABO血型反定型用紅細胞試劑盒、抗體篩選紅細胞試劑盒、譜細胞(上海血液生物醫藥有限責任公司,批號：20125704)；FYQ型免疫微柱孵育器，TD-2Y醫學檢驗多功能離心機。

1.3 標本要求 抗體篩選、交叉配血采用EDTA抗凝的新鮮血樣，血量不少于3ml，不規則抗體鑒定血量至少5ml；疑難交叉配血要求送檢EDTA抗凝血和不抗凝血各一管，血量均不少于3ml(2～8℃，48h內)，不得使用溶血和高脂血標本。

1.4 試驗方法

1.4.1 對932例備血、配血標本在交叉配血前先用微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡進行不規則抗體篩檢，篩檢結果的判定參照篩選紅細胞試劑盒說明書的結果判定示意圖，篩檢結果呈陰性的輸血者，進一步做交叉配血實驗。

1.4.2 不規則抗體篩檢呈陽性，或篩檢呈陰性但交叉配血主側凝集者，對患者血樣進行抗體特異性鑒定，鑒定結果比對譜細胞的細胞反應格局圖，分析出抗體類型，再選取抗體相應抗原為陰性的同型供血者與患者進行交叉配血實驗。

1.4.3 交叉配血次側凝集者，對患者紅細胞加做直接抗人球蛋白實驗以檢測紅細胞是否被血型抗體致敏，同時對供血者血漿進行不規則抗體篩查。上述各操作步驟嚴格按照微柱凝膠卡說明書和 《臨床輸血技術規范》進行。

2 結果

在932例備血、配血標本中，共篩檢出不規則抗體3例(0.32%)，經特異性鑒定，檢出抗-E 2例(0.21%)，抗-c 1例(0.11%)，選取不規則抗體相應抗原陰性的供血者與該3名患者進行交叉配血，配血成功。同時交叉配血次側凝集的有3例，其中2例直接抗人球蛋白試驗陽性，表明患者的紅細胞已被血型抗體致敏，另1例為血清蛋白紊亂及白/球蛋白比例倒置引起的假凝集；交叉配血主、次側均凝集的有2例，由患者自身抗體所引起。

3 討論

微柱凝膠卡式法是微柱凝膠技術與免疫血清學技術相結合的產物，是近年發展起來的一種新型免疫檢測方法,與傳統方法相比，微柱凝膠法具有靈敏度高、特異性強、結果直觀準確且可長期保存、能自動化操作、影響因素少的特點。在靈敏度上，比聚凝胺法高出2～4個滴度，比抗人球蛋白、酶法高出3-6個滴度[1]。在特異性上，傳統的試驗方法對一些弱的抗體檢出率較低，易漏檢，且對部分血型系統的抗體檢測不了，鹽水法甚至只能檢測IgM抗體，而微柱凝膠法則可同時檢測出IgM和IgG抗體，并能捕捉到傳統方法無法檢測到的微弱的抗原抗體反應，很好地保障了臨床的輸血安全。

不規則抗體的產生多見于Rh系統，是引起遲發型溶血性輸血反應、新生兒溶血病以及引起交叉配血不合的重要原因，據有關文獻報道，由不規則抗體導致的交叉配血不合占總數的60%以上[2]，而輸血、妊娠等是不規則抗體產生的主要原因。據報道，每輸1U血液使受血者紅細胞致敏的風險為1%～1.6%，多次輸血產生同種抗體的概率為15%～20%，約80%以上Rh陰性受血者在接受Rh陽性血液后的2～5個月內能產生抗體，如經再次免疫，因“回憶反應”，3周內抗體濃度即可達到高峰[3]。因此，對需輸血治療的患者、孕婦，尤其是有輸血史、妊娠史或短期內需多次輸血者進行不規則抗體的篩查，通過早期發現和確認具有臨床意義的抗體并在配血前鑒定此抗體，一來可獲得充足的時間來選擇與患者相配合的血液，避免因尋找不到相合的血源而延誤治療，二來孕婦可以在孕期進行新生兒溶血病的預防和治療，這對優生優育具有重要價值。

在本研究中，筆者對有輸血史、妊娠史或短期內需多次輸血者這些不規則抗體產生的主要因素進行分析，共篩檢出不規則抗體3例，檢出率為0.32%，接近于鄭三等[4]采用微柱凝膠法得出的0.29%檢出率，在有關文獻報道的正常人群中檢出率0.3%～2%[5]的范圍內。此3例患者均有輸血史或妊娠史，在交叉配血時，均表現為主側凝集次側無凝集，經鑒定抗體特異性，證實為抗-E 2例，抗-c 1例。雖然不規則抗體在正常人群中的檢出率很低，但不規則抗體陽性的患者一旦輸入具有相應抗原紅細胞，抗原抗體發生免疫結合，在補體的參與下使輸入的紅細胞發生溶血，引起溶血性輸血反應，嚴重時危及患者的性命，這應引起臨床的高度重視。在輸血對策上，應選取不規則抗體相應抗原陰性的供血者與患者進行交叉配血及輸注。

同時，在交叉配血實驗中，有2例主、次側及自身對照均發生凝集，由患者自身抗體所引起。自身抗體分為溫抗體和冷抗體，前者主要見于自身免疫性疾病，后者則多見于冷凝集素綜合征、支原體肺炎、傳染性單核細胞增多癥等。在輸血對策上，自身抗體患者應盡量避免輸血，因為輸血可能誘發嚴重的溶血性輸血反應，如確需輸血，溫抗體患者采取的方法是用多個供血者與之交叉，取相對凝集最弱的供血者紅細胞給予洗滌后輸注，且成人每次輸注不超過2個單位[6]。冷抗體患者須在溫暖環境中或使用輸血加溫器將同型洗滌紅細胞加溫后緩慢輸注。在輸注過程中，均需密切觀察患者病情，注意有無溶血現象發生，如發生輸血反應，應立即停止輸血，進行有效的處理，以確保病人生命安全。

交叉配血次側出現凝集較為常見，原因也較為復雜，需結合臨床資料進行分析。本文共有3例交叉配血僅次側發生凝集，對供血者的不規則抗體篩查均為陰性，這排除了由供血者引起凝集的可能性，對患者紅細胞進行直接抗人球蛋白試驗，其中2例直抗陽性，表明受血者的紅細胞已經包被了血型抗體，這是引起次側凝集最常見的原因，主要見于溶貧、再障、多發性骨髓瘤以及反復輸血尤其是輸注大量血漿的患者，輸血時可輸注同型洗滌紅細胞。次側凝集直抗陰性的病例，為血清蛋白紊亂及白/球蛋白比例倒置引起的假凝集，多見于腎臟疾病、肝膽疾病的患者，一些腫瘤癌癥、白血病、上消化道出血、貧血的患者，在交叉配血時也易引起假凝集[7]。另外，藥物免疫性抗體、供血者血漿中存在針對病人紅細胞抗原的抗體，亦是引起次側凝集的常見原因。

不規則抗體篩查試驗在臨床輸血中是很有價值的，但仍有其局限性：一是低頻率抗原的抗體或有劑量效應的抗體，可能被漏檢，二是以往免疫的抗體已降到難以檢測的水平，因此抗體篩選試驗不一定能檢出所有有臨床意義的抗體，受血者以往的抗體鑒定記錄有重要參考價值，或者安排抗原性更完全和特異性更強的篩選細胞或敏感度更高的技術做試驗[8]。也有國外的一些學者認為采用一組譜細胞進行抗體鑒定有一定的局限性，有可能漏檢常見的組合抗體，建議采用兩組譜細胞以提高組合抗體的檢出率。同時，輸血安全涉及從獻血者靜脈到受血者靜脈整個輸血鏈各個環節的安全，必須采取各項綜合措施嚴格管理和監控[9]，有條件的血液中心/血站，亦應當加強對獻血者尤其是有輸血史或妊娠史的首次獻血者血清/血漿不規則抗體的篩選工作，以減少不規則抗體進入受血者體內的可能性，保障受血者的輸血安全。

綜上所述，不規則抗體篩查應作為輸血前檢查的常規項目，尤其是對有輸血史、妊娠史或短期內需多次輸血者非常重要，而微柱凝膠檢測技術作為國際公認的安全輸血的推薦方法，使不規則抗體檢測理論金標準成為臨床金標準，對降低和避免溶血性輸血反應、新生兒溶血病，保證臨床輸血安全具有重要的臨床應用價值。

[1]張瑛.微柱凝膠法在檢測孕婦紅細胞免疫抗體中的應用[J].寧夏醫學雜志,2003,25(10):617-618.

[2]鄭志民.引起交叉配血不合的原因探討 [J].檢驗醫學與臨床,2011,8(9):1087.

[3]寇麗筠.臨床基礎檢驗學[M].第2版.北京:人民衛生出版社,1997：75-76.

[4]鄭三,馮學冠.微柱凝膠法檢測不規則抗體的臨床應用[J].海南醫學院學報,2009,15(10):1311-1312.

[5]肖星甫.輸血技術手冊[M].成都：四川科學技術出版社,1992:95.

[6]汪傳喜,田兆嵩.AIHA病人的輸血前檢查和成分輸血[J].中國輸血雜志,2000,13(1):61-65.

[7]楊瑩,譚雅玲,蔣永青.卡式配血在臨床輸血中的應用價值[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(3):332-333.

[8]陳小伍,于新發,田兆嵩.輸血治療學[M].北京：科學出版社,2012:40-41.

[9]余晉林,朱業華,田兆嵩.血站質量管理培訓教程[M].北京：科學出版社,2009:6-10，25-35.