瘦素及瘦素受體在銀屑病皮損中的表達

黃朝衛 楊 洋 劉新庭

瘦素及瘦素受體在銀屑病皮損中的表達

黃朝衛 楊 洋 劉新庭

目的: 檢測銀屑病皮損中瘦素及其受體的表達。方法: 40例銀屑病患者皮損和18名正常人皮膚標本，采用SP免疫組化法檢測皮膚石蠟標本中瘦素的表達，ELISA法檢測瘦素受體的表達。結果: 銀屑病患者皮損中瘦素表達明顯高于正常皮膚(P＜0.01)，主要分布在表皮的胞漿和胞核。患者皮損中瘦素受體含量為103.4±18.7 pg/mL高于正常對照組的76.9±13.5 pg/mL(P＜0.05)。結論:瘦素及其受體可能參與了銀屑病的發病。

銀屑病； 瘦素； 瘦素受體

瘦素(eptin)是一種脂肪源蛋白激素，具有廣泛的生物學效應，介入了多種疾病的發生發展過程，它可誘導人Th1型細胞因子的產生，增強Th1促炎癥免疫應答，抑制Th2亞群的細胞活性，通過調節炎癥反應，參與免疫功能的發揮。1目前國內外多數文獻研究的是血清瘦素水平與尋常型銀屑病的相關性。2我們研究了瘦素及其受體在銀屑病患者皮損中的表達，探討它們在銀屑病發病中的作用及其意義，為銀屑病的治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 對象 我院2011年10月至2012年7月間臨床資料完整的門診或住院患者40例，均符合《臨床皮膚病學》進行期尋常型銀屑病診斷標準。入選標準:具有典型的皮損并經病理確診，除銀屑病外，受試者身體健康，至少4周內未使用糖皮質激素、免疫抑制劑、維A酸類藥物及其他系統治療藥物，4周內無外用治療銀屑病的藥物，不伴有其他類型皮膚病，無自身免疫性疾病、糖尿病、慢性腎衰、腫瘤或其他嚴重疾患。排除體質肥胖和過度消瘦者。其中男23例、女17例；年齡14～75歲，平均33.18±16.68歲；體重45.5～68.2 kg，平均58.4±10.3 kg；病程3月～21年，平均3.18±4.73年。18名正常對照，取自外科手術者，無皮膚疾病、無腫瘤、無肥胖或過度消瘦者的皮膚，男10名、女8名；年齡10～65歲，平均29.6±8.7歲；體重35.6～71.4 kg，平均55.6±15.1 kg。對符合上述入選標準者詳細記錄病史資料，PASI評分為1.50～25.5。

1.2 實驗方法

1.2.1 材料 瘦素抗體(晶美生物工程有限公司)；免疫組化SP試劑盒，DAB試劑盒(北京中山生物技術有限公司)。

1.2.2 方法 取軀干或四肢典型皮損10%甲醛固定24 h常規石蠟包埋，連續切片5μm厚。同時取綠豆大皮損勻漿器研磨成勻漿，置與液氮罐內保存備用。常規脫水，石蠟包埋、切片，脫蠟至水；3%H2O2孵育10 min，阻斷內源性過氧化物酶的活性；枸櫞酸緩沖液中92℃熱抗原修復15 min，室溫自然冷卻30 min；抗原修復液修復抗原，滴加山羊血清封閉液10 min，滴加瘦素抗體4℃冰箱過夜；滴加生物素標記二抗，37℃孵育30 min；滴加辣根酶標記鏈霉親和素，37℃孵育30 min；DAB顯色20 min左右，蘇木素復染、脫水、透明、封片，鏡檢。陰性對照用枸櫞酸緩沖液替代一抗和二抗。

銀屑病皮損勻漿瘦素受體含量的測定采用雙抗夾心酶聯免疫吸附試驗法，嚴格依照試劑盒說明書進行。

1.2.3 結果判定 組織切片在光鏡下觀察細胞中有黃色、棕黃色或褐色顆粒沉著為陽性細胞。按染色強度及陽性細胞數來計算評分:染色強度將無、弱、中、強分別計0～3分；根據陽性細胞數量在觀察的同類細胞所占比例，分為4類:0分為陽性細胞≤2%，1分為陽性細胞3%～20%，2分為陽性細胞數21%～60%，3分為陽性細胞數＞60%。綜合評價值由兩類計分分值的乘積表示，0～3分為(－)，4分為(＋)，6分為(＋＋)，9分為(＋＋＋)。

1.2.4 統計學方法 采用SPSS 11.0軟件進行分析。瘦素在銀屑病患者與正常皮膚之間的表達差異采用Fisher精確概率法計算，瘦素受體值與正常對照組間的表達采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

結果見表1，圖1，2，3。

表1 瘦素在銀屑病組及對照組的表達

銀屑病皮損中瘦素受體含量103.4±18.7 pg/mL，正常皮膚76.9±13.5 pg/mL，主要分布在表皮的胞漿和胞核。兩組比較t＝6.38，P＜0.01。

2 結果

圖1 正常皮膚中瘦素的表達(SP，×400)圖2 銀屑病皮損中瘦素的表達(SP，×100)圖3 銀屑病皮損中瘦素的表達(SP，×400)

3 討論

瘦素是肥胖基因編碼的一種蛋白激素，Zhang等3于1994年首先從人和小鼠的脂肪組織中分離并克隆出來。現在對瘦素作用的認識早已超越肥胖與消瘦的范疇，它與能量平衡、發育和生殖以及免疫功能、糖尿病、白血病、慢性腎衰竭都有密切關系。瘦素除了由脂肪組織表達外，在許多脂肪外組織如胃黏膜、骨骼肌、胎盤、乳腺上皮、子宮內膜均可發現瘦素的存在。用分子生物學方法檢測，發現在骨、間葉細胞、肝、腦、心、胎盤、腎、肌肉、睪丸、卵巢、腸、腎上腺中均有瘦素受體表達。4

在本研究中，我們對瘦素在正常人皮膚和銀屑病皮損的表達進行了初步研究，實驗結果顯示，瘦素在銀屑病皮損有不同程度的表達。正常人皮膚中瘦素少量表達，銀屑病皮損中瘦素表達強于正常皮膚(P＜0.01)，主要表達于顆粒層、棘層角質形成細胞胞質和胞核中，在角質層角化不全的細胞中表達非常微弱。銀屑病皮損中瘦素受體含量與正常皮膚有明顯差異(P＜0.05)。說明瘦素受體在皮膚中也是存在的，在銀屑病皮損中的含量較正常皮膚高。

銀屑病發病機制仍然不十分清楚，但90年代初確立的T細胞在銀屑病發病中的核心作用已得到公認。5Th1/Th17共同介導的免疫紊亂在銀屑病的發病中起重要作用。6拮抗Th1/Th17細胞因子的生物制劑對銀屑病具有肯定的臨床療效，支持上述理論。7Th2細胞具有拮抗Th1細胞的作用，Th2細胞分泌的細胞因子IL－4和IL－6具有抑制Th1細胞分化的作用，同樣Th1細胞分泌的細胞因子IL－2和IFN－γ具有抑制Th2細胞分化的作用，因此Th1/Th2細胞失衡被認為是導致銀屑病發病的重要基礎。

瘦素及受體影響銀屑病的機制尚不清楚，研究顯示瘦素在調節免疫應答方面扮演重要的角色，瘦素調節T細胞、B細胞、單核－巨噬細胞的功能，對NK細胞的功能和活性也同樣重要。8瘦素是類似于IL－2功能的細胞因子，可促進天然T細胞和記憶T的增殖，促進Th1型細胞的細胞活性及產生的細胞因子、抑制Th2亞群的細胞活性及產生的細胞因子、誘導CD4＋T細胞高表達細胞間黏附分子和緩慢抗原，通過調節炎癥反應，參與免疫功能的發揮，9導致Th1/Th2細胞失衡，這可能是瘦素影響銀屑病發病的機制。減少TNF－α和瘦素，有利于銀屑病的改善，10從側面反映了瘦素與銀屑病的關系。瘦素及受體是否還有其他機制影響銀屑病發生發展還需作進一步研究。

1Martin－Romero C，Santos－Alvarez J，Goberna R，et al.Human leptin enhances activation and proliferation of human circulating T lymphocytes.Cell Immunol，2000，199(1):15－24.

2王巖，趙玉銘，畢桂姣.血清瘦素水平與尋常型銀屑病的相關性研究.中華微生物學和免疫學雜志，2005，25(4):255－256.

3 Zhang Y，Proenca R，MaffeiM，et al.Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue.Nature，1994，372 (6505):425－432.

4Chen SC，Cunningham JJ，Smeyne RJ，et al.Expression of OB receptor splice variants during prenatal development of the mouse.JRecept Signal Transduct Res，2000，20(1):87－103.

5王剛.銀屑病研究熱點.中華皮膚科雜志，2013，46(3):153－156.

6Coimbra S，Figueiredo A，Castro E，etal.The roles of cells and cytokines in the pathogenesis of psoriasis.Int JDermatol，2012，51(4):389－395.

7 Cai Y，Fleming C，Yan J.New insights of cells in the pathogenesis of psoriasis.Cell Mol Immunol，2012，9(4):302－309.

8 Tian Z，Sun R，Wei H，et al.Impaired natural killer(NK)cell activityin leptin receptor deficientmice:leptin as a critical regulator inNK cell development and ctivation.Biochem Biophys Res Commun，2002，298(3):297－302.

9 Landman RE，Puder JJ，Xiao E.Endotoxin stimulates leptin in the human and nonhuman primate.J Clin Endocrinol Metab，2003，88:1285－1291.

10Hamminga EA，van der Lely AJ，Neumann HA.Chronic inflammation in psoriasis and obesity:implications for therapy. Med Hypotheses，2006，67(4):768－773.

(收稿:2013－05－21 修回:2013－09－11)

The expression of lep tin and its receptor in the lesions of psoriasis

HUANG Chao-wei，YANG Yang，LIU Xin-ting.Department ofDermatology，the Central Hospital of Huang Shi City(Puai District)，435001

Objective:To detect the expression of leptin and its receptor in psoriastic lesions.Methods: The expression of leptin and its receptor in paraffin－embedded tissues from 40 patientswith progressive psoriasis and 18 healthy controlswere detected using streptavidin－peroxidase immunohistochemistrymethods and enzyme－linked immunosorbentassay(ELISA).Results:Theexpressions of leptin was significantly higher in patientswith psoriasis than that in controls(P＜0.01).Leptin receptor levelwas significantly higher in patients with psoriasis than that in controls(P＜0.05).Conclusion:Leptin and its receptormay be involved in the pathogenesis of psoriasis.

psoriasis；leptin；leptin receptor

黃石市中心醫院普愛院區，435001