皮膚鱗狀細胞癌組織中p33ING1蛋白的表達

姚 瑩

（河南科技大學第二附屬醫院皮膚科，河南 洛陽 471000）

皮膚鱗狀細胞癌組織中p33ING1蛋白的表達

姚 瑩

（河南科技大學第二附屬醫院皮膚科，河南 洛陽 471000）

目的 研究p33ING1基因表達與皮膚鱗狀細胞癌的發生、發展的關系。方法 應用免疫組化檢測我科在1999年～2004年35例皮膚鱗狀細胞癌及25例原位鱗癌（Bowen病）組織中的p33ING1表達情況。結果 皮膚鱗狀細胞癌p33ING1蛋白表達陽性率為42.9%（15/35），明顯低于正常組的82.9%（29/35），二者比較有明顯差異性，χ2=11.99，P＜0.05。其原位鱗癌中陽性表達為14(56%），同樣明顯低于正常組織的陽性率82.9%（29/35），二者比較有明顯差異性，χ2=5.18，P＜0.05。結論 p33ING1蛋白在皮膚鱗狀細胞癌組織中的表達下降，提示p33ING1蛋白在皮膚鱗狀細胞癌的發生、進展有重要意義，并有可能成為腫瘤檢測蛋白之一。

基因；鱗狀細胞癌；皮膚；免疫組化

近年來我國癌癥發病人數持續增多，嚴重降低了國內群眾的健康水平，對癌細胞病變情況深入研究是很有必要的。臨床研究證明腫瘤發生、發展的重要因素包括原癌基因的活化與抑癌基因的失活，其中抑癌基因可能是抵制腫瘤發生的重要保護機制[1]。醫學理論提出采用抑癌基因對癌癥病況進行綜合處理，ING1基因是臨床癌細胞研究中提出的新基因，其對一些癌細胞組織具有顯著的抑制作用[2,3]。考慮到ING1抑癌基因又不一樣類別的啟動隱私，需針對某一種展開研究才能獲得理想的結果[4]。本研究即探討ING1（In nibitor of growth 1）抑癌基因表達產物p33ING1蛋白在皮膚鱗狀細胞癌中的表達及與皮膚鱗狀細胞癌發生、發展過程中所起到的作用及與皮膚鱗癌臨床病理的關系。

1 資料與方法

1.1 標本來源

取自2007年～2012年在我科手術切除并行組織病理檢查的正常皮膚組織35例、原位鱗癌（Bowen病）皮膚組織25例及皮膚鱗狀細胞癌皮膚組織35例。其中男38例，女22例。年齡32～80歲，平均年齡56歲。28例發生于顏面部，5例發生于手背，2例發生于下唇。

1.2 抗體

羊抗人 p33ING1（C-19）多克隆抗體，購自美國Santa Cruz公司，工作濃度為1?100；SP試劑盒購自北京中山生物技術公司。

1.3 組織標本的制備

將組織標本（正常皮膚組織、原位鱗癌皮膚組織及鱗狀細胞癌皮膚組織）經福爾馬林固定后，脫水、透明、浸蠟包埋，4 ℃保存，4 μm厚連續切片。

1.4 HE染色

切片常規脫蠟入水后水洗，蘇木色精室溫下染色1 min，1%鹽酸酒精分色3 s，1%氨水返藍5 min，伊紅室溫下復染5 min，再遞度脫水透明，中性樹膠封片。

1.5 免疫組化

按SP試劑盒說明書進行，切片脫蠟入水后，PBS水洗3次，每次5 min，3%H2O2室溫孵育15 min，PBS水洗3次，每次5 min，微波抗原修復95～98 ℃ 15 min，自然冷卻，正常封閉血清室溫下孵育15 min，甩干；加入一抗工作液37 ℃下孵育2 h（空白對照片不加一抗，余不變），PBS漂洗3次，每次5 min，擦干，加入生物素標記的二抗，37 ℃下孵育15～20 min，PBS漂洗3次，每次5 min，擦干，加入辣根過氧化物酶標記的親和素37 ℃下孵育15～20 min，使其與二抗的標記生物素充分結合，PBS漂洗3次，每次5 min，DAB室溫下顯色，鏡控反應時間（約3 min），蒸餾水充分沖洗中止反應。蘇木精復染胞核，染色1 min，1%氨水返藍5 min，脫水透明，中性樹膠封片。

圖1 p33ING1在正常皮膚組織中的高表達，可見基底層細胞的陽性表達明顯高于上層細胞的陽性表達 ×200

圖2 p33ING1在鱗癌中的低陽性表達 ×100

圖3 p33ING1在鮑溫病中的低陽性表達 ×200

1.6 陽性結果的判定

于5個（×200）不同高倍鏡視野相同范圍下計數免疫組化染色陽性細胞數與癌實質細胞的平均百分比，陽性細胞率＜25%計為陰性（-），25%～50%為陽性（+）、50%～75%為（++），＞75%為（+++）[5]。

1.7 統計學處理

采用SPSS13.0軟件進行統計，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

P33ING1在正常皮膚、原位鱗癌、及鱗癌中均定位于細胞質，見圖1～3。根據陽性結果判定標準可得到正常皮膚組織、原位鱗癌、皮膚鱗癌組織中的陽性患者百分比分別為82.9%、56%、42.9%，見表1。正常皮膚組織中的陽性表達率明顯高于原位鱗癌和皮膚鱗癌組織中的陽性表達率（P＜0.05）。

表1 P33ING1蛋白的在皮膚鱗癌中的表達

3 討 論

癌癥已經成為世界醫學界研究的焦點內容，每年全球癌癥人數病死率不斷增多，嚴重威脅了人類生存的安全性。世界醫學研究組織發現，癌癥治療不能僅僅依賴于藥物使用或化學治療，還需從病理學上分析癌癥細胞組織的變化情況，為人工提供更加科學的治療方案，才能奠定最終的治療效果。從臨床研究情況看，抑制基因是傳統癌癥治療外的新方式，其結合理論研究機制對癌癥病況進行綜合處理，大大抑制了癌癥病況的發生率。按照現有醫學研究成果，癌癥細胞受到基因組織驅動的影響，常在某個階段發生基因組織突變等問題，使癌細胞組織呈現不穩定狀態。p53是一種比較典型的抑癌基因，其作用機制不能單獨地完成，而是要結合抑癌基因——ING1才能發揮作用，這是臨床抑癌研究的重要成果[5]。依據最終的研究數據，表面ING能夠對細胞增值增長具有抑制作用，加快了癌細胞的病死率，達到了抑制癌變的作用[6,7]。

進一步研究表明，p33ING1并非在獨立條件下形成抑癌功能，其所以能夠發揮出抑癌基因作用[7]，與p53之間有著不可分割的關系，彼此之間相互依賴才產生了醫學病例作用。一般情況下，可以先對p21/ WAFI給予激活處理，再借助細胞生長過程達到反饋的，為細胞組織分析提供了可靠的參照數據。在反饋作用發生同時，p21/WAFI也能夠對p53產生刺激，使得p33ING1起到應有的抑癌功效。從功效機制來看，p33ING1會表現出各種表達形式，特別是在異常狀態下則無法抑制基因細胞的死亡，這是癌癥腫瘤形成的一個主要因素。經過多年的臨床經驗，最后得出p33ING1、p53等必須在相互輔助的條件下，才能對癌癥發揮出抑制的效果，大大降低了患者癌變的發生率[5]。

本次皮膚鱗狀細胞癌組織研究發現，p33ING1的組織表達率有明顯的變化，具體情況：正常皮膚（82.9%）、原位皮膚鱗癌（56%）、皮膚鱗癌組織（42.9%），整體上在不斷地減小，這說明了p33ING1參與癌細胞抑制的效果顯著，可從多個方面抑制癌細胞病變的發生率。由于當前醫療水平的局限性，對p33ING1在癌細胞病變抑制中作用的研究不夠深入，p33ING1所具有的其他功能尚未被發現，這是未來醫學研究需深入探討的內容。本研究尚未研究p33ING1與皮膚鱗癌分級之間的關系，從而可以推測p33ING1的表達與病理分級及患者預后的關系。由于本實驗收集的為過去幾年的病理蠟塊，對這些病例的隨訪仍在進行中，所以對p33ING1在皮膚鱗狀細胞癌中的預后及轉移方面的作用，有待于進一步的研究。

[1] Oren M.Tumorsuppression.Teaming up to restrain cancer[J].Nature, 1998,391(6664):233-234.

[2] Garkavt I,Kazarov A,Gudkov K,et al.Supression of the novel growth inhibtor p33ING1 promotes neeoplastic transformation[J]. Nat Genet,1996,14(4):415-420.

[3] Garkavt I,Boland D,Mai J,et al.Specific monoclonal antibody raised against the p33ING1,tumors supressor [J].Hybridoma,l997, 16(6):537-540.

[4] Gibson UE,Heid CA,Williams PM.A novel method for real time quantitative RT-PCR[J].Genome Res,1996,6(10):995-1001.

[5] Garkavtse VL,Grigorian IA,Ossovskaya VS,et al.The candidate tumor suppressor P33lNGI cooperates with P53 in cell growth control[J].Nature,1998,391(6664):295-298.

[6] IGor G,Karl R.Extention of the replicative life span of human diploid flbroblasts by inhibition of the p33lNGl candidate tumor suppressor[J].Mol Cell Biol,1997,17(4):2014-2019.

[7] Helbing G,Veillette C,Riabowol K,et al.A novel candidate tumor supppressor,ING1,is involved in the regulation of apoptosis[J]. Cancer Res,1997,57(7):1255-1258.

p33ING1Gene Expression in Cutaneous Squamous Cell Carcinoma

YAO Ying
(Department of Dermatology, The Second Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology, Luoyang 471000, China)

Objective To investigate the expression of p33ING1protein rate in skin squamous cell carcinoma and their clinical significance. Methods All samples of normal and cancer tissues from 95 patients were detected for their protein expression levels of p33ING1with the SP immunohistochemical staining. Results The positive rate of p33ING1in cutaneous squamous cell carcinoma was 42.9%, significantly lower than that of normal skin tissue 82.9%, P＜0.05. The expression of p33ING1was lower in Bowen disease tissues (56%) than that of normal tissues (82.9%). Conclusion The low expression of p33ING1in carcinoma may be important fators related to carcinogenesis, development of cutaneous squamous cell carcinoma.

Gene; Squamous cell carcinoma; Skin; Immunohistochemistry

R739.5

：B

：1671-8194（2014）07-0058-02