采卵方法對西施舌早期發育生長的影響

劉德經，朱善央

(1．長樂市漳港海蚌場，福州350200；2．中國水產科學研究院東海水產研究所，上海200090)

西施舌(Coelomactraantiquatespengler)俗稱“海蚌”、“貴妃蚌”、“沙蛤”，屬軟體動物門(Mollusca)瓣鰓綱(Lamellibranchia)簾蛤目(Veneroida)蛤蜊科(Mactridae)腔蛤蜊屬(Coelomactra)。是一種生長快、個體大、品味好、價值高的海產雙殼貝類，也是我國正在研究的海水養殖珍品。有關西施舌的胚胎發育、幼蟲生長、繁殖生物學以及影響幼蟲發育的環境因素等方面的研究已有過報道[1～4]。近年來，在育苗過程中，筆者對不同采卵方法獲得的西施舌幼蟲進行培養，比較其發育生長狀況，為完善西施舌人工育苗工藝提供參考。

1 材料與方法

1.1材料

從江蘇省啟樂自然海區采捕的殼長8.0cm～9.0cm西施舌60粒，作為親貝。

1.2試驗方法

1.2.1采卵方法試驗設A組、B組、C組3組，每組6次重復，每3次重復取其平均值，即第1、第2平行組。A組采卵前預先把20粒親貝在底面積11.25m2、水深0.8m的室內水泥池里飼養。用養蝦池上層水，經60目篩絹過濾后，加入扁藻(Platymonasspp.)0.4×104cell/mL、球等鞭金藻(Isochrysisgaldana)6×104cell/mL、新月菱形藻(Nitzschiaclosterium)6×104cell/mL為餌料。每日7∶00全量換水1次，并清理排泄物。在水溫24.0℃～26.8℃、鹽度27‰～30‰條件下飼育9d，自然排放后用600目篩絹收集受精卵；在A組親貝精、卵排放的當日，解剖B組20粒西施舌，從中選擇4粒性腺較豐滿的親貝，以雌、雄3∶1采集精子、卵子，在玻璃皿內混合30min后用砂濾海水稀釋，以200目篩絹濾除黏液，經600目篩絹過濾，收集受精卵；C組親貝20粒陰干3h后經20cm/s～25cm/s流水刺激，精子、卵子排放后用600目篩絹收集受精卵。

1.2.2受精卵的孵化收集到的A組、B組、C組受精卵，分別放入3個1000mL的玻璃燒杯里，用砂濾海水孵化受精卵，孵化密度30粒/mL～40粒/mL。每1h倒去燒杯50%海水，加入新鮮的砂濾海水，使它恢復懸浮狀態，連續5次，直至擔輪幼蟲上浮為止。

1.2.3幼蟲培育在8000mL玻璃缸里，用5000mL砂濾海水，移入1000個西施舌的直線鉸合期幼蟲，放到裝有等溫海水的泡沫箱里，采用水浴法，使缸內水溫相對穩定。每天7∶00～8∶00、17∶00～18∶00各換水1次，每次換水60%，換水后投入球等鞭金藻1×104cell/mL。幼蟲發育到殼頂期后，添加扁藻0.3×104cell/mL。每天7∶00、14∶00觀測水溫和比重，按文獻[5]換算成鹽度值。

1.2.4數據統計與分析每隔2d，上午換水前，在各試驗組及其平行組隨機取樣，鏡檢30個幼蟲，觀察發育狀況，測量其殼長，求平均值。試驗數據參照文獻[6]進行差異顯著性測定、方差分析及多重比較。

2 結果

2.1不同采卵方法幼蟲發育生長情況

不同采卵方法所獲得的直線鉸合期幼蟲在水溫25.60℃±1.15℃、鹽度28.10‰±3.20‰、光照200lx～600lx條件下，經9d培養，A組、B組、C組殼長平均值分別為272.00μm±18.4μm、239.60μm±19.97μm、C組260.00μm±20.07μm，日平均殼長增長度分別為21.11μm/d、17.51μm/d、19.78μm/d。由此可見，幼蟲生長速度A組>C組>B組(圖1)。

Fig.1ContrastgrowthofmethodofdifferentgatherovumforlarvaeshelllengthCoelomactraantiquata

A組與B組的殼長平均值相差32.4μm，是A組與B組機誤4.91的6.598倍，顯示差異極顯著(P<0.01)。A組與C組、C組與B組的殼長平均值相差分別為機誤的2.03倍和3.94倍，表明差異顯著(P<0.05)(表1)。方差分析，F=9.06，F>0.01(2.87)(P<0.01，n=30)，差異極顯著。LSD法多重比較，A組、C組與B組相比，均達1%極顯著水準。

表1幼蟲殼長生長度差異顯著性

Table1ThelarvalshelllengthgrowthandsignificantdifferencebetweendegreeofdeferminationofCoelomactraantiquate

組間Towgroup平均值差異(X)Averagedifference機誤(S、E)Standarderror差異顯著度SignificangdegreeofdifferenceA組與B組32404916598C組與B組20405173945A組與C組10004922030

2.2幼蟲培育成活率、變態率的比較

2.2.1幼蟲培育成活率A組、B組、C組 3組9日齡幼蟲平均成活率依次為50.00%±4.82%、37.00%±6.64%、42.86%±3.57%(圖2)。方差分析，差異顯著，F=6.00，F>0.05(2.6)(P<0.01，n=3)。多重比較，A組與C組差異不顯著(P>0.05)，A組與B組比較，達1%顯著水準。

Fig.2Nine-day-oldsurvialrateoflarvaeCoelomactraantiquata

2.2.2幼蟲附著變態率幼蟲經12d培養，A組、B組、C組 3組變態率的平均值分別為51.33%±6.05%、35.77%±10.55%、40.59%±3.19%(圖3)。方差分析，差異顯著，F=8.58，F>0.05(2.6)(P<0.01，n=3)。多重比較，A組與B組、C組間差異顯著，A組與B組間差異極顯著(P<0.01)，A組與C組間差異顯著(P<0.05)。

3 討論

西施舌的卵子與長牡蠣(Crassostreagigas)一樣，發育到初級卵母細胞就具有受精能力，并能發育生長成稚貝。受精卵發育和分化所必需的物質來源于卵母細胞在發育過程中的積累。棲息在自然海區野生群體的西施舌的親本，由于受不同生境的制約，其性腺發育并不同步。因此，不同發育階段的卵母細胞所含的內源營養亦不盡相同。所以，通過解剖取卵、人工受精所獲得受精卵發育生長較慢，幼蟲個體大小差異顯著，其標準差較大，幼蟲培養成活率亦較低。筆者認為，這主要緣于卵細胞內源營養欠佳所致。Jones等[7]對麥哲倫扁圓扇貝(Placopectenmagellanic-us)幼蟲生長的研究后指出，貝類幼體發育生長主要受到親本的影響，其中以“母本效應”為主。此后，Bayne[8]闡釋，海產雙殼類軟體動物配子發生的能源來源于親本營養的積累。粟志民等[9]闡述，生殖腺的質量是貝類繁殖成敗的關鍵?？梢?，產前對野生西施舌親本進行人工飼育，有助于生殖腺的發育及其卵母細胞的營養積累，有利于幼蟲的發育生長，也是提高西施舌人工育苗種質質量的有效措施。

在西施舌的人工育苗中，利用蝦池水中含有的多種浮游硅藻，再添加蘊含二十二碳六烯酸(DHA)的金藻和二十碳五烯酸(EPA)的扁藻作為產前及產后親貝的餌料，對于促進親貝性發育效果良好。采取解剖取卵人工受精方法所獲得的幼蟲，附著變態后1個月，大部分稚貝殼可達10mm左右，但有些稚貝殼長僅2mm～3mm，原因在于先天不足。每年的5月～6月份，水溫24℃～26℃，西施舌親貝經10d左右精養，在1個月內可連續自行排放精卵2次～3次。采取上述辦法采卵，既簡便、省工，又能充分發揮親貝生殖能力的作用；既減少親貝用量與消耗，又有利于幼蟲發育生長，提高人工育苗的種質質量。這對于節省育苗成本、改善育苗工藝模式乃至保護匱乏的西施舌自然資源，均有助益。

在文章撰寫過程中，廈門海洋職業技術學院張云飛教授、廣東海洋大學蔡英亞教授給予了大力幫助，謹致謝意。

[1]陳文龍,劉德經,許萬竹.西施舌人工育苗的初步研究[J],水產學報,1966,3(2):130-141.

[2]吳進鋒,陳素文,梁超愉,等.西施舌人工育苗及幼蟲、稚貝生長研究[J].湛江海洋大學:自然科學版,2003，23(4):14-19.

[3]劉德經,謝開恩.西施舌的繁殖生物學[J].動物學雜志,2003,38(4):10-15.

[4]劉德經,李正華,張克存.影響西施舌幼蟲發育環境因素的初步研究[J].特產研究,2008,30(2)：10-13.

[5]張萬禹.海水鹽度簡易計算法[J].海洋科學,1982,12(3):57-59.

[6]李春喜,王志和,王文林.生物統計學[M].北京:科學出版社,2001:81-110.

[7]JONES R,BATES J A,INNES D J,et al,Quantitative genetic analysis of growth in larval scallops(Placopecten mogellanicus)[J]．Mar Biol,1966,124(9):671-677.

[8]BAYNT B.L,Aspects of reproduction in bivalve mollusks.Wil-eg.ML(Ed),Estuarine processes[M]．New York:Academic press,1976:432-448.

[9]粟志民,劉志剛,歐陽志,等.皺肋文蛤人工育苗技術的研究[J].南方水產科學,2012,8(2):36-42.

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