葛根黃酮自微乳化滴丸的制備及體外評價

樊紅波，王玉，劉昕，孫士淋，張廣遠，管清香

(吉林大學藥學院，長春130021)

葛根為臨床常用中藥，具有解肌退熱、升陽透疹、生津止瀉的功效，葛根黃酮為其主要有效成分，臨床上主要用于治療心血管疾病[1]，但其難溶于水，口服吸收程度較差，生物利用度小，體內消除快且不易蓄積[2]。因此，提高葛根黃酮溶解度及生物利用度成為其制劑研究中的主要問題。研究表明，自微乳化給藥系統(Self-microemulsifying drug delivery system，SMEDDS)可提高水難溶性藥物生物利用度[3]，但自乳化制劑都是液體形式，通常是封裝在軟膠囊或硬膠囊中，易造成囊壁軟化。本試驗將自微乳技術與固體分散技術結合，制備葛根黃酮自微乳化滴丸，擬在提高葛根黃酮的口服生物利用度的同時，避免自微乳制成膠囊時囊壁軟化導致的藥物漏泄[4]，簡化其制備工藝，提高生產率，降低成本，有利于勞動保護[5]。

1 儀器與試藥

AB204-N電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；THZ-82水浴恒溫振蕩器(金壇市精達儀器制造廠)；DW-1型滴丸機(江蘇泰州市制藥機械二廠)；RCZ-8A智能藥物溶出儀(天津大學精密儀器廠)。

Crodamol GTCC(Croda公司)，Maisine 35-1(法國Gattefosse公司)，Cremophor RH 40(德國BASF公司)，葛根黃酮(純度66.7%，西安賽邦醫藥科技有限公司)，葛根素標準品(中國藥品生物制品檢驗所)，甲基硅油、液體石蠟均為化學純，其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1標準曲線的繪制

取葛根素儲備液適量，用蒸餾水稀釋適當倍數配制成濃度分別為2.036μg/mL、4.072μg/mL、6.108μg/mL、8.144μg/mL、10.180μg/mL、12.220μg/mL的系列葛根素標準品溶液。分別在250nm波長處測定吸光度，用吸光度(Y)對濃度(X)作線性回歸，得回歸方程為：Y=0.0672X+0.004 76(R2=0.9998)。

2.2葛根黃酮自微乳的制備

取處方量Crodamol GTCC、Maisine 35-1﹑Cremophor RH 40和1，2-丙二醇，混勻，加入處方量葛根黃酮，超聲溶解，攪拌均勻，得葛根黃酮自微乳。

2.3葛根黃酮自微乳化滴丸的制備

根據預實驗確定SMEDDS與滴丸基質比例、溫度和滴距對自乳化滴丸有較大的影響，每個因素選擇3個水平，采用L9(34)正交法優選滴丸制備工藝，因素水平見表1。以滴丸硬度、圓整度、丸重差異為指標進行綜合評價，具體評分標準如表2所示。

表1L9(34)實驗因素水平表

Table 1Factors and levels of L9(34) orthogonal test

表2L9(34)應變量評價標準

Table 2Evaluation criterion of depend variables for L9(34) orthogonal test

2.4體外釋放度研究

對比葛根黃酮自微乳化滴丸與市售愈風寧心滴丸體外釋放行為。取2種滴丸各6粒，以(37±0.5)℃脫氣蒸餾水900mL為釋放介質，轉速為75r/min，分別于2min、5min、10min、20min、40min、60min取樣5mL，補充同體積同溫度的蒸餾水，樣品經0.45μm微孔濾膜過濾后，稀釋后測定含量。

3 結果與討論

3.1精密度實驗

取葛根素儲備液適量，用蒸餾水稀釋配制低濃度(2.036μg/mL)、中濃度(6.108μg/mL)、高濃度(12.220μg/mL)葛根素溶液，測定日內及日間精密度。結果表明，本方法精密度的RSD均小于2%，該方法精密度良好。

3.2回收率實驗

按處方稱取一定比例的空白輔料，分別加入不同體積葛根素儲備液，配制低濃度(2.036μg/mL)、中濃度(6.108μg/mL)、高濃度(12.220μg/mL)樣品溶液，0.45μm微孔濾膜，取續濾液測定吸收度。結果表明，平均回收率大于95%，RSD小于2%，該方法回收率良好。

3.3葛根黃酮自微乳化滴丸工藝優選

預實驗表明，冷凝劑溫度小于2℃時，滴丸不圓整、丸重差異大；冷凝劑溫度大于10℃時，滴丸形狀變扁、丸重差異大。本試驗分別用甲基硅油和液體石蠟作冷凝劑，結果發現，甲基硅油做冷凝基質得到的滴丸丸形圓整度、硬度、表面光滑度等均較液體石蠟好。在混合自微乳與滴丸基質時發現，自微乳比例較高時，滴丸硬度差，容易黏連；基質比例高，硬度好，圓整度好，但載藥量小，服用量大，且成本高。考慮到載藥量，確定自微乳與滴丸基質的質量混合范圍在1∶3.5～1∶4.5、固定滴速50滴/min、冷凝劑溫度2℃～10℃制備滴丸。

由極差分析結果，影響滴丸成型工藝的因素依次排列為B>C>A，其中A因素的水平1、水平2與水平3之間相差不大。為提高載藥量，A因素選擇A1；B因素水平2明顯優于水平1和水平3，確定采用B2；C因素水平2明顯優于水平1和水平3，確定采用C2。故確定各因素采用A1B2C2，即SMEDDS與基質比例為1∶3.5、物料溫度80℃、滴距為10cm(表3)。

表3L9(34)實驗及結果

Table 3L9(34) Experiment s and results

3.4葛根黃酮自微乳化滴丸體外釋放度

制成自微乳的藥物滴丸釋放速率明顯高于僅制成滴丸的藥物，自微乳化滴丸10min的溶出度可達105.10%，而愈風寧心滴丸10min的釋放度僅達到82.03%(圖1)。自微乳滴丸釋放速率明顯高于僅制成滴丸的藥物，可能是因自微乳加入溶液形成載藥小乳滴，增加了藥物表面積和溶解度，提高了溶出度。

由此可見，自微乳技術與固體分散體技術結合可更好地提高葛根黃酮的體外溶出速率和葛根黃酮口服生物利用度。葛根黃酮自微乳化滴丸大鼠體內研究將另文報道。

[1]陳江林,江麗霞,曾靖.葛根異黃酮對運動訓練大鼠血液生化指標及抗氧化的影響[J].中國當代醫藥,2014,21(1):6-8.

[2]徐軼爾,李秋紅,楊菲菲,等.中藥葛根的藥理藥效研究[J].吉林中醫藥,2010,30(11):993-994.

[3]Larsen AT,Ohlsson AG,Polentarutti B,et al.Oral bioavailability of cinnarizine in dogs：Relation to SNEDDS droplet size，drug solubility and in vitro precipitation[J].European Journal of Pharmaceutical Sciences,2013,48:335-339.

[4]Mei XH,Etzler FM,Wang ZR,et al.Use of texture analyzer to study hydrophilic solvent effects on the mechanical properties of hard gelatin capsules[J].International Journal of Pharmaceutics,2006,324:128-135.

[5]周雅琴,陳燕軍,馮青然.中藥滴丸劑的研究進展[J].中國中藥雜志,2006,31(2):101-105.