結直腸癌肝轉移相關的分子標志物

陳婧，何友吉

(東南大學醫學院 微生物與免疫學系，江蘇 南京 210009)

結直腸癌已發展成為中國第五大癌癥殺手[1]，遠處轉移是結直腸癌患者的主要死因，40%～50%的患者在原發灶切除后發生肝轉移。不可手術的肝轉移患者盡管有靶向藥物的使用，其中位生存期仍不超過2年。因此，盡早發現肝轉移對于判斷結直腸癌患者的預后以及是否需要采取干預措施至關重要。

腫瘤細胞的浸潤和轉移是一個復雜的過程。腫瘤轉移的“宿命論”認為，決定腫瘤生物學行為及臨床表型的遺傳學改變在原發腫瘤中已經存在[2]，該學說已被Van’t Veer等用芯片技術在乳腺癌的原發灶中證實[3]。

在結直腸癌的研究中發現，肝轉移灶中的DNA拷貝數譜及基因表達譜與其原發灶高度相似，與上述“宿命”模型一致[4- 5]，表明從結直腸癌的原發灶出發能夠找出預測其肝轉移的生物學指標。在對結直腸癌組織和細胞株展開的大量分子和細胞遺傳學研究中發現，結直腸癌的發展有明確的病理階段，每個階段有特異的癌/抑癌基因的突變[6]。這些改變發生的關鍵機制是基因組的不穩定，可歸納為兩種方式：由DNA錯配修復缺陷導致的微衛星不穩定(microsatellite instability， MIN or MSI)，僅占15%，其腫瘤細胞通常保持正常的二倍體狀態；另一種則是在染色體水平上呈現的基因組不穩定性，即由于染色體不穩定(chromosomal instable，CIN)而產生非整倍體(aneuploidy)的變化，占85%。

本文中作者對目前正在從染色體、基因、蛋白等各水平尋找與結直腸癌肝轉移相關分子標志物的文獻進行綜述。

1 與結直腸癌肝轉移相關的染色體變異

基于現有aCGH(array comparative genomic hybridization)和SNP(single nucleotide polymorphism)的研究，結直腸癌中常被報道的染色體改變包括7， 8q， 13q 和20q的擴增及4， 8p，14q， 15q， 17p 和18q的缺失[7- 9]，現已證實DNA拷貝數的變化發生在特定模式下，并與不同的臨床表現相關[10- 12]。

目前SNP芯片的分辨率已經能夠檢測到染色體上小于2.5kb有變異的區域，Sayagues J.M等用高分辨率的SNP(500K)檢測了23例肝轉移患者的原發灶，發現7， 8q，11q，13q，20q和X的擴增以及1p， 8p， 17p，18q的缺失最為常見。該研究認為，在變異染色體中4種重現的斷裂點位于1p1，8p12，17p11.2，20p12.1，又以17p11.2最為多見[13]。

采用FISH、aCGH技術，以發生肝轉移和未發生轉移或肝外臟器轉移的原發性結直腸癌為標本進行比較，發現肝轉移患者原發灶中染色體變化最為明顯的是20q，其擴增倍數明顯高于未發生肝轉移組[5，14]，還有一部分染色體的變化表現為8q的擴增及18q的缺失[5，15]。

2 變異的染色體上與結直腸癌肝轉移相關的候選基因(蛋白)

2.1 鋅指蛋白 217(ZEN217)

原癌基因ZEN217定位于20q13.2，被認為是有可能驅動20q13擴增的靶分子。在結直腸癌肝轉移灶中，ZEN217出現擴增的頻率明顯高于原發灶，未發生肝轉移的患者其原發灶未出現該基因的多拷貝，提示ZEN217的擴增增加了結直腸癌肝轉移的風險[16]。

2.2 細胞凋亡易感蛋白(chromosome segregation 1- like，CSE1L)

定位于20q13.13，編碼一種輸出蛋白，介導經典核定位信號(NLS)通路中輸入蛋白-α的回收[17]。研究發現CSE1L/CAS的mRNA在腫瘤細胞中表達高于正常腺體細胞，該基因被干擾后結直腸癌細胞黏附能力下降，凋亡比例增加。免疫組化的方法顯示，CSE1L/CAS在結直腸癌細胞胞質中的高表達與高TNM分期及浸潤深度相關，高表達CSE1L/CAS的結腸癌細胞系HT- 29具有向肝臟轉移的高風險，5/7的小鼠在注射HT- 29后出現肝臟轉移灶而無其他臟器轉移，提示該蛋白參與了結直腸癌細胞的肝轉移過程[18]。

2.3 轉錄因子 E2F- 1

多種腫瘤細胞經常高表達轉錄因子E2F1[19]，基因定位于20q11.2， E2F1游離化后活化S期相關蛋白。現認為，E2F1活性的調節紊亂是腫瘤形成過程中的一個始發事件。通過芯片技術發現了越來越多的E2F1的靶分子，這些分子本身或它們作用的次級蛋白可能在轉移過程中發揮了作用。Marian等用CGH及q- PCR的方法發現，結腸癌肝、肺轉移灶中20q有普遍的擴增(16/18)，而E2F1拷貝數目在肝、肺轉移灶中均值為4.1、3.9，在原發灶中的拷貝數為2.52[20]。

2.4 結直腸癌缺失蛋白(DCC)

定位于18q21.2，是公認的抑癌基因，編碼一種穿膜蛋白，表達于大部分正常組織以及腸黏膜上，參與細胞- 細胞以及細胞- 基質間的相互調節，影響細胞生長、分化及轉移的發生[21]。18號染色體的缺失在腺瘤向浸潤性腫瘤的發展過程中呈上升趨勢[22]，DCC被認為是這種雜合性缺失的靶基因。原發灶中DCC的缺失與患者的預后不良相關[23]，并可作為結直腸癌遠處轉移的預測指標，雖然這種預測的敏感性可能與患者的分期相關，在所有患者中敏感性為42%，特異性為71%，在Ⅱ期患者中陽性預測值為19%，陰性預測值為88%[24]。

2.5 Smad4(DPC4)

定位于18q21.1，該基因產物是TGF-β信號通路中介導細胞生長和發育相關的中間產物，Smad4與Smad2、Smad3形成一種復合物作用于細胞核上，并在此激活TGF-β轉錄過程中的多個相關基因[25]。已有多篇文獻報道，Smad4表達的變化更多出現在進展性結直腸癌以及轉移性結直腸癌中。免疫組化的方法顯示，轉移灶比原發灶更易發生Smad4缺失，肝轉移灶比肝外轉移灶的缺失更易發生[26]，當給Balb/c小鼠注射CT26- Smad4下調的細胞系時，小鼠發生肝轉移的風險增加且小鼠肝轉移灶的重量明顯高于對照組，發生肝轉移的小鼠平均生存時間明顯低于對照組(26dvs44.5d)，說明Smad4能夠抑制CT26在體內的肝轉移傾向[27]。

2.6 MMP- 7(matrilysin、pump- 1)

定位于11q21- q22，負責正常情況下細胞外基質重塑及病理性的基底膜及基質的破壞。研究表明，攜帶有MMP- 7轉導子的細胞在SCID小鼠體內更加具備向肌層侵襲及向肝臟轉移的能力，轉移灶中MMP- 7前體蛋白(pro- MMP7)表達高于正常肝組織[28]。有研究指出，入院時診斷有肝轉移患者的MMP- 7陽性率(72%)高于5年后發生肝轉移的患者(47%)，所有轉移組患者原發灶MMP- 7的表達明顯高于未發生轉移組的患者，并且這種轉移以淋巴循環途徑居多[29]。新近研究指出，患者血清中MMP- 7水平與患者年齡、腫瘤直徑及遠處轉移相關[30]。

2.7 PRL- 3(PTP4A3)

定位于8q24.3，編碼一種位于細胞膜表面的酪氨酸磷酸酶，22kD。Saha等應用人基因表達系列分析(SAGE)首次證實，PRL編碼的蛋白高表達于結直腸癌的肝轉移灶，而幾乎不表達于正常大腸上皮細胞表面，弱表達于腺瘤以及原發灶組織中[31]。Bardelli等擴大了轉移灶的檢測范圍，發現PRL- 3只高表達于結直腸癌的大部分轉移灶(肝、肺、腦、淋巴結)，而不在其他癌癥的肝轉移灶和原發灶中高表達，且這種高表達不源于基因的擴增[32]。Kato等證實PRL- 3基因在結直腸癌細胞肝轉移的過程中所扮演的角色是增強細胞的活動性，敲除該基因后細胞的活動性及在肝臟形成的克隆明顯減少[33]。也有報道認為它不僅能破壞原血管的基底層有助于腫瘤細胞的擴散，并能在轉移灶有助于異常新血管的生成[34]。

2.8 NDRG1

NDRG1(cap43/rit42/RTP/Drg1/TDD5)是第一個被證實的轉移抑制因子，位于8q24.2，NDRG1的過度表達能夠明顯抑制腫瘤細胞的轉移能力，當給無胸腺的小鼠注入過量表達NDRG1的細胞系SW620后發現，只有23%的小鼠發生了肝轉移而對照組有75%發生了肝轉移[35]。SW480和SW620是來源于同一患者但轉移能力不同的兩株細胞系(SW620轉移能力強)，當SW480細胞中的NDRG1基因被干擾后，其表型及轉移能力均向SW620接近[36]。

2.9 C- Met

定位于7q21- 31，編碼一種跨膜糖蛋白，與肝細胞生長因子/擴散因子(HGF/SF)結合[37]，可使細胞進入有絲分裂及抗凋亡程序[38]。C-Met編碼的蛋白在血管重塑、細胞運動性能提高、生長、侵襲、分化、遷移發揮作用[38- 40]。Zeng等用PCR- LDR/FISH的方法發現，C- Met基因拷貝數目的增加在結直腸癌的原發灶中是一件小概率事件(9/247)，但原發灶中C- Met基因拷貝數目增加的患者發生肝轉移的概率較高(6/9)，同時這類患者腫瘤細胞的浸潤程度較深[41]。

2.10 CCR(chemokine receptor)

在Ghadjar等的研究中發現，CCR6在原發灶組織中表達雖不盡相同，但高表達CCR6的患者發生肝轉移的概率(9/11)要遠高于低表達CCR6的患者(2/21)，在多重回歸分析中控制性別、年齡、病理分級等相關因素后，原發灶中CCR6的高表達可以作為預測肝轉移的獨立因子[42]，該基因定位于6q27。

3 血清中與結直腸癌肝轉移相關的指標

3.1 miRNA

miRNA是長度為18～22的非編碼核糖核苷酸片段，通過干擾轉錄或抑制翻譯過程來調節靶基因的表達[43]。盡管miRNAs的數目在不斷增加，但是只有少數miRNA具有原癌或抑癌基因的作用，并參與腫瘤的發病機制[44]。Cheng等用qPCR的方法在中國的Ⅰ～Ⅲ期結直腸癌患者中發現，血漿中高濃度的miR- 141與結直腸癌患者的遠處轉移相關，但與淋巴結轉移無關[45]。Wang等用qPCR方法發現，結直腸癌肝轉移患者外周血中miR- 29a含量高于未發生肝轉移的患者，該標志物對于區分肝轉移的敏感性達到75%[46]。

3.2 REG- Ⅳ

REG- Ⅳ定位于1p13.1- p12，編碼的REG- Ⅳ屬于鈣依賴性凝集素超家族成員及EGFR/Akt/激活蛋白- 1信號通路的有效激活劑。用qPCR的方法證實，大于70%的結直腸癌患者體內均顯示REG- Ⅳ表達上調[47- 48]。Oue等用免疫組化的方法發現，發生肝轉移的結直腸癌患者REG- Ⅳ表達明顯高于未發生肝轉移的患者，隨后ELISA的方法證實肝轉移患者血清中REG- Ⅳ高于無肝轉移的患者[49]。

上述可在血清中檢測的新型指標還需要更多更大的基礎實驗及臨床實驗的驗證才能推廣到臨床,目前在臨床應用的廣譜血清指標為CEA，雖然它能夠提示腫瘤的發生，但是缺乏足夠的及時性與敏感性。

4 基因突變

結直腸癌中最常見的體細胞突變位于PI3K/RAS- RAF信號通路中，通過PIK3CA、KRAS和BRAF基因的突變使得該通路達到過度活化的狀態。這些突變的頻率和熱點在西方結直腸癌患者中已經明確，更多的研究傾向于它們的狀態與患者對靶向治療藥物的敏感性及患者預后的研究。它們與肝轉移發生的負相關性只在Bruin 等的研究中被報道，顯示攜帶有20q擴增且無突變患者肝轉移發生率高達61%，是其他患者肝轉移發生率的3倍。因此，他們認為聯合檢測結直腸癌原發灶中20q擴增和PI3K信號通路基因突變可以很好地預測患者手術后發生肝轉移的風險[50]。與此觀點類似，新近有研究認為RAS基因突變能夠預測結直腸癌肺轉移的發生，但不能預測肝轉移，肝轉移患者中KRAS基因的突變頻率低于其在結直腸癌患者中普遍公認的頻率30%～40%，這從側面說明了KRAS突變與肝轉移的負相關性[51]。

5 表觀遺傳學指標

正如基因突變的發生，表觀遺傳學指標的改變也能推進結直腸癌病程的發展，在結直腸癌中研究得最為廣泛的是DNA的異常甲基化，約有20%的結直腸癌患者表現為CIMP表型[52]。結直腸癌進程中常見的甲基化基因已被歸納總結[53]。Ju等用焦磷酸測序方法在53例Ⅰ～Ⅲ期、25例Ⅳ期及62例肝轉移患者中發現，超過80%Ⅳ期及肝轉移患者攜帶MGMT甲基化，部分肝轉移患者攜帶TIMP3甲基化。CIMP陽性的患者出現復發及肝轉移的時間要早于CIMP陰性的患者，TIMP3甲基化在肝轉移組出現的頻率(15.5%)明顯高于Ⅰ～Ⅲ(3.8%)及Ⅳ期(0%)非肝轉移患者。接下來作者利用MCAM發現絕大多數基因在原發灶和肝轉移灶中甲基化狀態一致，而UPK3A只在轉移灶中表現為甲基化狀態，作者認為在原發灶及轉移灶表達不一致的基因才有可能在轉移過程中發揮作用，所以該基因很有可能參與了肝轉移的過程[54]。

綜上所述，結直腸癌的肝轉移是一個極為復雜的生物學過程，涉及到了多種遺傳學及表觀遺傳學特征的改變，迄今還沒有完善的評估指標。并且上述提及的預測模型只在西方患者中適用，國內尚無相關報道，但研究者們已經注意到了結直腸癌患者中染色體變異情況的普遍性，且20q的擴增是最常見的染色體變異之一[55- 57]。在結直腸癌肝轉移這個多維化的變化過程中， 我們希望從不同的角度、不同的分子水平來找到更多與此過程相關的信息，最終將這樣的信息轉化為臨床檢測手段，來為結直腸癌患者提供更多的治療指導。

[1] ZONG M Z，FENG M Z，LI J，et al.奧沙利鉑體外干預結直腸癌細胞株HT- 29的耐藥基因及相關蛋白的表達[J].現代醫學，2013,41(2)：71- 74.

[2] BEMARDS R，WEINBERG R A.Aprogression puzzle[J].Nature，2002，418(6900):823.

[3] VAN’T VEER L J，DAI H，van de VIJVER M J，et al.Gene expression profiling predicts clinical outcome of breast cancer[J].Nature，2002，415(6871):530- 536.

[4] CARVALHO B，POSTMA C，MONGERA S，et al.Multiple putative oncogenes at the chromosome 20q amplicon contribute to colorectal adenoma to carcinoma progression[J].Gut，2009，58(1):79- 89.

[5] YAMAMOTO S，MIDORIKAWA Y，MORIKAWA T，et al.Identification of chromosomal aberrations of metastatic potential in colorectal carcinoma[J].Genes，Chromosomes & Cancer，2010，49(5):487- 496.

[6] LENGAUER C，KINZLER K W，VOGELSTEIN B.Genetic instability in colorectal cancers[J].Nature，1997，386(6625):623- 627.

[7] CARDOSO J，BOER J，MORREAU H，et al.Expression and genomic profiling of colorectal cancer[J].Biochimica et Biophysica Acta，2007，1775(1):103- 137.

[8] DIEP C B，KLEIVI K，RIBEIRO F R，et al.The order of genetic events associated with colorectal cancer progression inferred from meta- analysis of copy number changes[J].Genes，Chromosomes & Cancer，2006，45(1):31- 41.

[9] BACOLOD M D，BARANY F.Molecular profiling of colon tumors:the search for clinically relevant biomarkers of progression，prognosis，therapeutics，and predisposition[J].Annals of Surgical Oncology，2011，18(13):3694- 3700.

[10] HERMSEN M，POSTMA C，BAAK J，et al.Colorectal adenoma to carcinoma progression follows multiple pathways of chromosomal instability[J].Gastroenterology，2002，123(4):1109- 1119.

[11] WEISS M M，KUIPERS E J，POSTMA C，et al.Genomic profiling of gastric cancer predicts lymph node status and survival[J].Oncogene，2003，22(12):1872- 1879.

[12] RAJAGOPALAN H，NOWAK M A，VOGELSTEIN B，et al.The significance of unstable chromosomes in colorectal cancer.Nature reviews[J].Cancer，2003，3(9):695- 701.

[13] SAYAGUES J M，FONTANILLO C，ABAD MDEL M，et al.Mapping of genetic abnormalities of primary tumours from metastatic CRC by high- resolution SNP arrays[J].PloS One，2010，5(10):e13752.

[14] BRUIN S C，KLIJN C，LIEFERS G J，et al.Specific genomic aberrations in primary colorectal cancer are associated with liver metastases[J].BMC Cancer，2010，10：662.

[15] NAKAO K，SHIBUSAWA M，ISHIHARA A，et al.Genetic changes in colorectal carcinoma tumors with liver metastases analyzed by comparative genomic hybridization and DNA ploidy[J].Cancer，2001，91(4):721- 726.

[16] HIDAKA S，YASUTAKE T，TAKESHITA H，et al.Differences in 20q13.2 copy number between colorectal cancers with and without liver metastasis[J].Clinical Cancer Research，2000，6(7):2712- 2717.

[17] COOK A，FERNANDEZ E，LINDNER D，et al.The structure of the nuclear export receptor Cse1 in its cytosolic state reveals a closed conformation incompatible with cargo binding[J].Molecular Cell，2005，18(3):355- 367.

[18] TAI C J，SU T C，JIANG M C，et al.Correlations between cytoplasmic CSE1L in neoplastic colorectal glands and depth of tumor penetration and cancer stage[J].Journal of Translational Medicine，2013，11:29.

[19] KASAHARA M，TAKAHASHI Y，NAGATA T，et al.Thymidylate synthase expression correlates closely with E2F1 expression in colon cancer[J].Clinical Cancer Research，2000，6(7):2707- 2711.

[20] IWAMOTO M，BANERJEE D，MENON L G，et al.Overexpression of E2F- 1 in lung and liver metastases of human colon cancer is associated with gene amplification[J].Cancer Biology & Therapy，2004，3(4):395- 399.

[21] HSU Y H，SHAW C K，CHUONG C M.Immunohistochemical localization of deleted- in- colon- cancer (DCC) protein in human epithelial，neural，and neuro- endocrine tissues in paraffin sections with antigen retrieval[J].The Kaohsiung Journal of Medical Sciences，2001，17(7):351- 357.

[22] MIYAKI M，SEKI M，OKAMOTO M，et al.Genetic changes and histopathological types in colorectal tumors from patients with familial adenomatous polyposis[J].Cancer Research，1990，50(22):7166- 7173.

[23] SAITO M，YAMAGUCHI A，GOI T，et al.Expression of DCC protein in colorectal tumors and its relationship to tumor progression and metastasis[J].Oncology，1999，56(2):134- 141.

[24] REYMOND M A，DWORAK O，REMKE S，et al.DCC protein as a predictor of distant metastases after curative surgery for rectal cancer[J].Diseases of the Colon and Rectum，1998，41(6):755- 760.

[25] HELDIN C H，MIYAZONO K，TEN DIJKE P.TGF- beta signalling from cell membrane to nucleus through SMAD proteins[J].Nature，1997，390(6659):465- 471.

[26] LOSI L，BOUZOURENE H，BENHATTAR J.Loss of Smad4 expression predicts liver metastasis in human colorectal cancer[J].Oncology Reports，2007，17(5):1095- 1099.

[27] AI X，WU Y，ZHANG W，et al.Targeting the ERK pathway reduces liver metastasis of Smad4- inactivated colorectal cancer[J].Cancer Biology & Therapy，2013，14(11):1059- 1067.

[28] ZENG Z S，SHU W P，COHEN A M，et al.Matrix metalloproteinase- 7 expression in colorectal cancer liver metastases:evidence for involvement of MMP- 7 activation in human cancer metastases[J].Clinical Cancer Research，2002，8(1):144- 148.

[29] OGAWA M，IKEUCHI K，WATANABE M，et al.Expression of matrix metalloproteinase 7，laminin and type IV collagen- associated liver metastasis in human colorectal cancer:immunohistochemical approach[J].Hepato- gastroenterology，2005，52(63):875- 880.

[30] PRYCZYNICZ A，GRYKO M，NIEWIAROWSKA K，et al.Immunohistochemical expression of MMP- 7 protein and its serum level in colorectal cancer[J].Folia Histochemica et Cytobiologica / Polish Academy of Sciences，Polish Histochemical and Cytochemical Society，2013，51(3):206- 212.

[31] SAHA S，BARDELLI A，BUCKHAULTS P，et al.A phosphatase associated with metastasis of colorectal cancer[J].Science，2001，294(5545):1343- 1346.

[32] BARDELLI A，SAHA S，SAGER J A，et al.PRL- 3 expression in metastatic cancers[J].Clinical Cancer Research，2003，9(15):5607- 5615.

[33] KATO H，SEMBA S，MISKAD U A，et al.High expression of PRL- 3 promotes cancer cell motility and liver metastasis in human colorectal cancer:a predictive molecular marker of metachronous liver and lung metastases[J].Clinical Cancer Research，2004，10(21):7318- 7328.

[34] GUO K，LI J，TANG J P，et al.Catalytic domain of PRL- 3 plays an essential role in tumor metastasis:formation of PRL- 3 tumors inside the blood vessels[J].Cancer Biology & Therapy，2004，3(10):945- 951.

[35] GUAN R J，FORD H L，FU Y，et al.Drg- 1 as a differentiation- related，putative metastatic suppressor gene in human colon cancer[J].Cancer Research，2000，60(3):749- 755.

[36] LI Q，CHEN H.Transcriptional silencing of N- Myc downstream- regulated gene 1 (NDRG1) in metastatic colon cancer cell line SW620[J].Clinical & Experimental Metastasis，2011，28(2):127- 135.

[37] PARK M，DEAN M，KAUL K，et al.Sequence of MET protooncogene cDNA has features characteristic of the tyrosine kinase family of growth- factor receptors[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1987，84(18):6379- 6383.

[38] MA P C，MAULIK G，CHRISTENSEN J，et al.c- Met:structure，functions and potential for therapeutic inhibition[J].Cancer Metastasis Reviews，2003，22(4):309- 325.

[39] TRUSOLINO L，COMOGLIO P M.Scatter- factor and semaphorin receptors:cell signalling for invasive growth.Nature reviews[J].Cancer，2002，2(4):289- 300.

[40] BIRCHMEIER C，BIRCHMEIER W，GHERARDI E，et al.Met，metastasis，motility and more.Nature reviews[J].Molecular Cell Biology，2003，4(12):915- 925.

[41] ZENG Z S，WEISER M R，KUNTZ E，et al.c- Met gene amplification is associated with advanced stage colorectal cancer and liver metastases[J].Cancer Letters，2008，265(2):258- 269.

[42] GHADJAR P，COUPLAND S E，NA I K，et al.Chemokine receptor CCR6 expression level and liver metastases in colorectal cancer[J].Journal of Clinical Oncology，2006，24(12):1910- 1916.

[43] BARTEL D P.MicroRNAs:genomics，biogenesis，mechanism，and function[J].Cell，2004，116(2):281- 297.

[44] ESQUELA- KERSCHER A，SLACK F J.Oncomirs- microRNAs with a role in cancer.Nature reviews[J].Cancer，2006，6(4):259- 269.

[45] CHENG H，ZHANG L，COGDELL D E，et al.Circulating plasma MiR- 141 is a novel biomarker for metastatic colon cancer and predicts poor prognosis[J].PloS One，2011，6(3):e17745.

[46] WANG L G，GU J.Serum microRNA- 29a is a promising novel marker for early detection of colorectal liver metastasis[J].Cancer Epidemiology，2012，36(1):e61- 67.

[47] VIOLETTE S，FESTOR E，PANDREA- VASILE I，et al.Reg Ⅳ，a new member of the regenerating gene family，is overexpressed in colorectal carcinomas [J].International Journal of Cancer,2003，103(2):185- 193.

[48] BISHNUPURI K S，LUO Q，KORZENIK J R，et al.Dysregulation of Reg gene expression occurs early in gastrointestinal tumorigenesis and regulates anti- apoptotic genes[J].Cancer Biology & Therapy，2006，5(12):1714- 1720.

[49] OUE N，KUNIYASU H，NOGUCHI T，et al.Serum concentration of Reg Ⅳ in patients with colorectal cancer:overexpression and high serum levels of Reg Ⅳ are associated with liver metastasis[J].Oncology，2007，72(5- 6):371- 380.

[50] BRUIN S C，HE Y，MIKOLAJEWSKA- HANCLICH I，et al.Molecular alterations associated with liver metastases development in colorectal cancer patients[J].British Journal of Cancer，2011，105(2):281- 287.

[51] VAUTHEY J N，ZIMMITTI G，KOPETZ S E，et al.RAS mutation status predicts survival and patterns of recurrence in patients undergoing hepatectomy for colorectal liver metastases[J].Annals of Surgery，2013，258(4):619- 626; discussion 626- 617.

[52] OGINO S，CANTOR M，KAWASAKI T，et al.CpG island methylator phenotype (CIMP) of colorectal cancer is best characterised by quantitative DNA methylation analysis and prospective cohort studies[J].Gut，2006，55(7):1000- 1006.

[53] LAO V V，GRADY W M.Epigenetics and colorectal cancer.Nature reviews[J].Gastroenterology & Hepatology，2011，8(12):686- 700.

[54] JU H X，AN B，OKAMOTO Y，et al.Distinct profiles of epigenetic evolution between colorectal cancers with and without metastasis[J].The American Journal of Pathology，2011，178(4):1835- 1846.

[55] XIAO X Y，ZHOU X Y，YAN G，et al.Chromosomal alteration in Chinese sporadic colorectal carcinomas detected by comparative genomic hybridization[J].Diagnostic molecular pathology:the American Journal of Surgical Pathology，Part B，2007，16(2):96- 103.

[56] CHEN Z，LIU Z，LI W，et al.Chromosomal copy number alterations are associated with tumor response to chemoradiation in locally advanced rectal cancer[J].Genes，Chromosomes & Cancer，2011，50(9):689- 699.

[57] HE Q J，ZENG W F，SHAM J S，et al.Recurrent genetic alterations in 26 colorectal carcinomas and 21 adenomas from Chinese patients[J].Cancer Genetics and Cytogenetics，2003，144(2):112- 118.