胰島素測(cè)定前標(biāo)本的處理方法比較

呂 萍

（遼寧省沈陽醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院輸血科，110002）

·特別提示·

胰島素測(cè)定前標(biāo)本的處理方法比較

呂 萍

（遼寧省沈陽醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院輸血科，110002）

目的 討論和評(píng)價(jià)在樣品從門診運(yùn)送到檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，如何維持血清和血漿中胰島素的穩(wěn)定性。方法 從20名體檢者抽取靜脈血，立即處理或室溫下儲(chǔ)存24 h。比較乙二胺四乙酸（EDTA）或氟化鈉（NaF）對(duì)胰島素測(cè)定結(jié)果的影響。結(jié)果 EDTA抗凝標(biāo)本的胰島素在室溫下24 h內(nèi)是穩(wěn)定的。如果樣品未使用添加劑或NaF，則胰島素濃度顯著降低。結(jié)論 如果從門診運(yùn)送到檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的待測(cè)胰島素樣品能在24 h內(nèi)處理，則不需要血漿的離心及凍存。

胰島素；乙二胺四乙酸；氟化鈉；測(cè)定

循環(huán)血胰島素測(cè)定通常適用于胰島素瘤的診斷（表現(xiàn)為低血糖時(shí)可測(cè)量的胰島素）、胰島素瘤患者的隨訪（包括術(shù)中監(jiān)測(cè)）、1型糖尿病剩余胰島素分泌的鑒定、胰腺移植手術(shù)后的監(jiān)測(cè)。胰島素測(cè)定作為一種研究工具，對(duì)于診斷以高胰島素血癥為特征的2型糖尿病和代謝綜合征具有極其重要的意義[1]。現(xiàn)在愈來愈多的證據(jù)表明，以空腹或耐糖測(cè)試后胰島素和血糖測(cè)定為基礎(chǔ)的胰島素耐受測(cè)定，有助于提高潛在的2型糖尿病或心血管疾病患者的診斷和治療[2]。在臨床實(shí)踐中，為了保持血液中胰島素的穩(wěn)定性，需要醫(yī)護(hù)人員立即將樣本離心，快速將凍結(jié)的血清或者血漿轉(zhuǎn)移至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。本研究旨在比較不同抗凝劑處理及不同時(shí)間對(duì)血液胰島素測(cè)定結(jié)果的影響。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取正常體檢者20例。其中，男12名例、女8例；年齡31～45歲。其中10名在注射75 g葡萄糖2 h后取樣。把每一個(gè)體的樣本分別放入6只采樣管：兩支為乙二胺四乙酸（EDTA）管（上海科華，容積2.0 mL，終濃度為1.5～2.0 mg K2-EDTA/mL全血）；兩支管為無添加劑的血清標(biāo)本（江蘇康健，容積4.5 mL)；兩支添加氟化鈉（NaF），作為糖酵解抑制因子和草酸鉀的抗凝劑（上海科華，容積2.7 mL，終濃度為2.0～3.0 mg NaF/mL全血）。

1.2 主要儀器及試劑 胰島素測(cè)定采用化學(xué)發(fā)光法，使用美國貝克曼公司生產(chǎn)的AccESS全自動(dòng)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑。血糖測(cè)定采用己糖激酶法，使用日本產(chǎn)HITACHI 7170S全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑。

1.3 血糖和胰島素測(cè)定 在每一樣本組中，針對(duì)每種采樣管，取其中一支管于10 min內(nèi)離心，取上清，并立即凍存；其余未被離心的樣本管（1支為EDTA，1支為血清，1支為NaF）在室溫下（22～24℃）貯存24 h后離心，分離血清或血漿，分析前貯存在-20℃下，所有的樣本在融化后分為兩批進(jìn)行胰島素和葡萄糖測(cè)定。分析需在取樣10 d內(nèi)進(jìn)行，所有樣本均做雙管測(cè)定，取平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 對(duì)于分析前處理獲得的不同類型的胰島素和葡萄糖樣品，采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，測(cè)定結(jié)果做配對(duì)秩和檢驗(yàn)，并進(jìn)行相關(guān)性分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

就先前確定的標(biāo)準(zhǔn)，在含EDTA樣本中，對(duì)室溫下貯存24 h的胰島素測(cè)定，結(jié)果沒有顯著性影響（P=0.35）。值得注意的是，在這種貯存條件下，添加了氟化鹽和沒有添加劑樣本的結(jié)果分析分別為P＜0.000 1 和P=0.000 9，見表1。 在胰島素測(cè)定的結(jié)果上，立即處理含EDTA的樣本和在室溫下貯存了24 h后的樣本具有相關(guān)性（r=0.998)。見圖1。依照相關(guān)回歸分析，結(jié)果對(duì)比顯示如下等式：貯存在室溫24 h的EDTA樣本=立即處理的EDTA樣本×0.96＋2.1 pmol/L（斜率95%可信區(qū)間：0.92～0.97；截距95%可信區(qū)間：2.8～6.3 pmol/L）。

貯存了24 h的無添加劑的樣本和僅含EDTA的樣本葡萄糖的濃度顯著下降。見表2。含氟化物的樣本葡萄糖的結(jié)果下降適中，但具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，貯存在室溫下24 h后大約下降了10%（P＜0.000 1），貯存了24 h含氟化物的樣本中可見明顯的溶血現(xiàn)象。

圖1 含EDTA樣本即刻處理與放置室溫24 h后處理的胰島素測(cè)定結(jié)果相關(guān)性（pmol/L）

3 討論

我們的研究顯示，EDTA作為檢測(cè)分析的穩(wěn)定物，已被普遍應(yīng)用在自動(dòng)化測(cè)試中，加入EDTA后內(nèi)源性胰島素實(shí)際在血液樣本中較穩(wěn)定。在胰島素測(cè)定的結(jié)果上，立即處理含EDTA的樣本和在室溫下貯存了24 h后的樣本是一致的。兩者間的變異性主要是分析方法不同的批間變異。沒有添加劑的樣品管中，在室溫下貯存了24 h的胰島素測(cè)定結(jié)果下降輕微但有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。紅細(xì)胞內(nèi)含有胰島素降解酶，EDTA能與IDE的輔基金屬離子生成穩(wěn)定的絡(luò)合物而影響胰島素降解酶的活性，使胰島素避免循環(huán)中不確定蛋白水解酶和依賴于鈣的胰島素酶的水解[3-4]。在含有氟化物的樣本中胰島素濃度顯著下降，可能是因?yàn)檫@些樣本中出現(xiàn)溶血而向血清中釋放了大量的紅細(xì)胞胰島素降解酶[5-6]。

由于近年來胰島素檢測(cè)大多采用發(fā)光免疫分析法，試劑、儀器成本較高，且胰島素測(cè)定非急診項(xiàng)目，故大多數(shù)醫(yī)院不是24 h開機(jī)檢測(cè)此項(xiàng)目。另外，實(shí)際工作中，常有各種原因需要保存標(biāo)本以備復(fù)查。因此，我們的研究結(jié)果對(duì)門診患者處置時(shí)尤其具有重要的實(shí)際意義。根據(jù)我們的結(jié)果，如果確信是在24 h內(nèi)取的樣品，現(xiàn)在似乎有充分的理由使用常規(guī)的運(yùn)輸系統(tǒng)運(yùn)送未經(jīng)處理的需測(cè)量胰島素的樣品。基于顏色改變測(cè)溫的不可逆溫度控制條帶可另外被用來排除運(yùn)送期間意外的熱損傷。盡管葡萄糖測(cè)量的樣品試管中包含氟化物鹽，我們發(fā)現(xiàn)對(duì)室溫24 h內(nèi)存儲(chǔ)的血清葡萄糖測(cè)定結(jié)果影響輕微，但有重要統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；這在解釋葡萄糖測(cè)定結(jié)果中被考慮并且強(qiáng)調(diào)血清或者毛細(xì)血管中葡萄糖濃度的現(xiàn)場即時(shí)分析有重要性。

迄今為止，已發(fā)表的數(shù)據(jù)表明胰島素測(cè)量對(duì)潛在的代謝綜合征和2型糖尿病患者有重要作用。肥胖和胰島素抵抗都是心血管疾病的強(qiáng)大的預(yù)測(cè)器，但是任何肥胖程度的胰島素抵抗又加重了冠心病和2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)。識(shí)別誰最有胰島素抵抗及誰最能受益于減肥可能是重要的。這些人可能是今后特異治療策略的目標(biāo)。以后更大領(lǐng)域和長期研究能最終闡明通過胰島素測(cè)定的不同設(shè)置來分析個(gè)體胰島素敏感度的實(shí)際意義。

[1] Isomaa B. A major health hazard: the metabolic syndrome[J]. Life Sci, 2003, 73(19): 2395-2411.

[2] Ferrannini E, Muscelli E, Stern MP, et al. Differential impact of insulin and obesity on cardiovascular risk factors in nondiabetic subjects[J]. Int J Obes Relat Metab Disord, 1996, 20(1): 7-14.

[3] 李偉雄，周靜．溶血對(duì)血清胰島素測(cè)定的影響及應(yīng)對(duì)措施[J]．中國熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6(8)：1475-1476．

[4] 池勝英，張文輝，陶志華．溶血對(duì)血清胰島素測(cè)定的影響[J]．現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，12(19)：2092-2093．

表1 室溫儲(chǔ)存24 h后樣品中胰島素測(cè)定濃度（pmol/L）

表2 室溫儲(chǔ)存24 h后樣品中葡萄糖測(cè)定濃度（mmol/L）

[5] 夏鳳城，汪寅章．氟化鈉對(duì)放免分析血漿胰島素的影響[J]．軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào)，1996，17(4)：274-276．

[6] 郭永鐵．不同濃度的EDTA-K3對(duì)胰島素測(cè)定干擾的實(shí)驗(yàn)研究[J]．醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2010，25(16)：20．

1672-7185（2014）12-0004-03

10.3969/j.issn.1672-7185.2014.12.003

2014-03-10）

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