宮頸癌組織P16、P15蛋白檢測的臨床價值研究

蔡麗梅，朱珍珍，虞如芬

宮頸癌組織P16、P15蛋白檢測的臨床價值研究

蔡麗梅，朱珍珍，虞如芬

目的研究P16、P15在宮頸癌組織中的表達與組織學分級和臨床分期的關系。方法選擇宮頸癌標本82份為宮頸癌組，并選擇50份正常宮頸組織為正常組，用免疫組化法檢測兩組組織P15和P16的表達，分析宮頸癌組P15和P16表達與病理組織學分級、臨床分期、有無淋巴結轉移和癌栓的關系。結果P15、P16在正常組和宮頸癌組中的陽性表達率分別為98.00%和50.00%、96.00%和51.22%，差異均有統計學意義（均P＜0.05）；腫瘤組織P15和P16蛋白的陽性表達率與組織學分級、臨床分期、有無淋巴結轉移、有無癌栓有關，其中組織學分級Ⅲ級＜Ⅱ級＜Ⅰ級（P＜0.05），有淋巴結轉移者＜無淋巴結轉移（P＜0.05），有癌栓者＜無癌栓者（P＜0.05）。結論P16、P15在宮頸癌組織中表達的陽性率明顯低于正常組織，缺失越嚴重其組織學分級和臨床分期越高、有淋巴結轉移和癌栓的可能性增大；因此宮頸癌組織進行P15、P16蛋白檢測對宮頸癌預后的判斷可能具有一定的臨床價值。

宮頸腫瘤；癌；蛋白

宮頸癌的發生發展是一個涉及多因素、多基因的復雜過程[1]。P16和P15缺失或突變導致P16和P15蛋白的表達降低，P16和P15抑癌功能喪失，造成細胞異常增殖[2]。目前，通過分子標志物檢測對腫瘤進行診斷是國際上熱門的課題，但關于P15、P16蛋白在宮頸癌組織中表達與病理分級、臨床分期間關系的臨床研究報道較少，2003年12月至2013年12月收集浙江省瑞安市人民醫院存檔的宮頸癌石蠟包埋病理標本82份（82例患者），用免疫組化法分析組織中P15、P16蛋白表達，并與50例子宮肌瘤手術切除的正常宮頸組織比較。現總結報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料82例患者術前未經放療、化療治療；年齡33～72歲，平均（51.2±11.3）歲；病理組織學分級按WHO（2006年出版）的分級標準，其中Ⅰ級28例，Ⅲ級35例，Ⅲ級19例；淋巴結轉移32例，無淋巴結轉移50例；脈管癌栓39例，無脈管癌栓43例。對照組50例，組織來源于本院同期子宮肌瘤手術切除的宮頸標本；所選組織均經過10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，常規HE切片，經二位中級職稱以上病理學專科醫生確診，連續4 m切片備用。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色用免疫組化SP法，P15、P16克隆抗體購自上海麥莎公司，SP試劑盒購于武漢博士德公司；免疫組織化學SP試劑盒購自福州邁新公司。入選組織標本均用10.0%甲醛固定，常規脫水，石蠟包埋備用；抗原修復用微波和抗原修復液，DAB顯色，蘇木精復染；以TBS緩沖液替代一抗作為陰性對照，已知的陽性組織作為陽性對照，所用的P15、P16單克隆抗體稀釋度為1∶100。

1.2.2 免疫組化染色結果判定標準

P16、P15蛋白分布于細胞核或細胞質，陽性結果呈黃色或棕黃色顆粒狀。切片在400倍油鏡下觀察，陽性細胞數＜5%為陰性（－）；＜25%為弱陽性（+）；25%～50%為明顯陽性（2+）；＞50%為強陽性（3+）[3]。1.3統計方法用SPSS13.0統計學軟件，計數資料采用X2檢驗分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 P16與P15在宮頸癌組織和正常組織中的表達比較P15、P16在正常組和宮頸癌組中的陽性表達率分別為98.00%和50.00%、96.00%和51.22%，兩組差異均有統計學意義（X2=32.987、 28.711，均P＜0.05）。見表1。

2.2 P15蛋白在宮頸癌組織中的表達與組織學特征及臨床分期的關系組織學分級越高，P15蛋白的表達越低（P＜0.05），臨床分Ⅲ期者明顯低于Ⅰ期+Ⅱ期（P＜0.05），有淋巴結轉移者低于無淋巴結轉移者（P＜0.05），有癌栓者低于無癌栓者（P＜0.05）。見表2。

2.3 P16蛋白在宮頸癌組織中的表達與組織學特征及臨床分期的關系組織學分級越高，P16蛋白的表達越低（P＜0.05），臨床分Ⅲ期者明顯低于Ⅰ期+Ⅱ期（P＜0.05），有淋巴結轉移者低于無淋巴結轉移者（P＜0.05），有癌栓者低于無癌栓者（P＜0.05）。見表3。

3 討論

P15、Pl6基因又稱細胞周期依賴性激酶抑制基因(CDKN2B)，是兩個高度同源的同一個家族的多腫瘤抑制基因(MTS)，可與cyclin D競爭性結合CDK 4/ CDK6，使細胞停止生長。細胞周期的調控異常與腫瘤的發生密切相關，細胞周期素依賴性蛋白激酶(CDK)抑制因子細胞周期引擎抑制劑分子(CDI)已經被確認[4]。本研究顯示P15、P16在正常組和宮頸癌組中的陽性表達率分別為98.00%和50.00%、96.00%和51.22%，兩者差異有統計意義（均P＜0.05）。由此可見P15、P16蛋白在正常宮頸組織中的

陽性表達率明顯高于宮頸癌組織，參與宮頸癌組織細胞生長周期的調控。

當P15基因發生突變或功能缺失，在腫瘤組織中表達異常時則有可能導致細胞周期調控紊亂，促進細胞無限增值和腫瘤發生、進展[5]。P15基因的失活機制主要有缺失、重排、突變和過度甲基化[6]。P15基因在轉錄啟動子區域5'-CpG島多位點過度甲基化，是P15基因失活的另一形式[7]。P15基因的異常與免疫功能的失調之間可能有某種聯系[8]。目前已公認Pl6缺失導致腫瘤的發生，但如果再有P15的缺失則更易導致腫瘤的發生[9]。Pl6基因作為一個重要的腫瘤抑制基因，參與腫瘤發生的周期調控，P16缺失可使細胞無限制由G1期進入S期，并在細胞未成熟時即開始分裂，最終導致細胞永生化[10]。本組資料發現宮頸癌組織中的P15、Pl6蛋白隨著腫瘤組織學分級、臨床分期的升高其陽性表達率逐漸下降（P＜0.05）,有淋巴結轉移者P15、Pl6蛋白陽性表達率低于無淋巴結轉移（P＜0.05），有癌栓者P15、Pl6蛋白陽性表達率低于無癌栓者（P＜0.05）。由此可見P15、Pl6蛋白參與宮頸癌組織細胞周期的負性調節因子，P15、Pl6蛋白表達缺失越嚴重，其組織學分級、臨床分期就越高，發生淋巴系統和血行轉移的可能性增大，并影響病情的進展。因此筆者認為對宮頸癌組織進行P15、P16蛋白檢測對宮頸癌不同階段診斷、生物學行、預后的判斷可能具有一定的臨床價值。

表1 P16和P15在宮頸癌組織和正常組織中的表達比較例（%）

表2 P15蛋白在宮頸癌組織中的表達與組織學特征及臨床分期的關系例（%）

表3 P16蛋白在宮頸癌組織中的表達與組織學特征及臨床分期的關系例（%）

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10.3969/j.issn.1671-0800.2014.06.025

R737.33

A

1671-0800(2014)06-0689-02

325200 浙江省瑞安，瑞安市人民醫院（蔡麗梅、虞如芬）；瑞安市中醫院（朱珍珍）

蔡麗梅，Email：992327395@ qq.com。