細胞塊免疫組化在惡性小細胞腫瘤胸腔轉移中的臨床病理分析

沈湘萍，陳艷，張小偉

細胞塊免疫組化在惡性小細胞腫瘤胸腔轉移中的臨床病理分析

沈湘萍，陳艷，張小偉

目的探討胸腔積液細胞塊技術結合免疫組化在惡性小細胞腫瘤中的診斷價值。方法應用常規細胞學涂片篩查疑似惡性胸腔積液20例，離心沉渣石蠟包埋切片后，應用免疫組織化學染色明確診斷及組織來源，篩選惡性小細胞腫瘤與間皮病變、淋巴造血系統腫瘤、鱗狀細胞癌及肺腺癌鑒別診斷相關的免疫標記組合。結果20份疑似惡性胸腔積液標本中發現惡性小細胞癌腫瘤5例，4例鱗狀細胞癌細胞，4例腺癌細胞，1例B細胞性惡性淋巴瘤細胞，1例惡性間皮瘤，余5例除外惡性腫瘤細胞。結論胸腔積液細胞塊對診斷惡性胸腔積液具有一定的價值，結合免疫組化選擇適當的抗體組合對惡性小細胞腫瘤的鑒別診斷具有重要意義。

細胞塊；免疫組化；惡性小細胞腫瘤

漿膜腔積液中惡性小細胞腫瘤的診斷是常規細胞涂片中的一個難點。應用胸腔積液細胞蠟塊結合免疫組化方法能補充常規細胞涂片的不足，提高對漿膜腔積液中惡性小細胞腫瘤診斷的陽性率，以免漏診或誤診。本研究旨在通過改進胸腔積液的診斷方法，探討惡性小細胞腫瘤和間皮病變、淋巴造血系統腫瘤、鱗狀細胞癌及肺腺癌鑒別診斷的有效途徑，進一步提高細胞病理在診斷惡性漿膜腔積液中的陽性率，為臨床診斷和治療提供科學依據。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2010年5月至2012年12月浙江省東陽市人民醫院細胞病理資料，納入標準：送檢標本均為胸腔積液350例，應用常規細胞學涂片篩查選擇疑似惡性胸腔積液20例，進行制作細胞塊。其中男12例，女8例；年齡45～77歲，中位年齡61歲。

1.2 方法

1.2.1 常規細胞涂片所有標本各取100m l，3000 r/m in，離心10m in，取部分離心沉渣制備HE涂片，由高年資細胞病理醫師進行形態學觀察，根據細胞形態、核不典型性和黏附性分為良性、疑似惡性。（1）良性：反應性增生間皮細胞(細胞彌散、形態溫和及無不典型性)；（2）惡性：轉移性小細胞腫瘤和與惡性間皮瘤、淋巴造血系統腫瘤、鱗狀細胞癌、肺腺癌(細胞成團、細胞形態及核具重度不典型性)。

1.2.2 細胞塊制作選擇常規細胞涂片疑似惡性胸腔積液標本20例，將固定后的標本離心(3 000 r/m in)，棄上液，瀝干離心管壁上的液體，將組織膠(Histogel)加熱融化后，適量滴入含有標本的離心管，搖勻，10℃左右放置20～30min。將凝固后形成錐形的細胞塊取出，常規脫水、透明、浸蠟后包埋，切片行HE染色。采用EnVision兩步法，所用抗體CK7、CD30、CD68、CD20、CD3、CD15、LCA、P16、P63、CEA、TTF-1、SYN、CGA、CD56、CK5/6、AE1/AE3、Calretinin、WT-1、HBME-1和VIM均為工作液，均購自上海基因科技有限公司，染色過程按說明書進行，用DAB顯色。

1.2.3 免疫組化判讀每批染色以PBS代替一抗設立空白對照，染色切片中采用已知陽性組織同時染色設立陽性對照。選擇支持小細胞腫瘤的免疫組化指標：SYN、CGA、CD56、P16、AE1/AE3；支持間皮細胞的免疫組化指標：CK5/6、calretinin、HBME-1、WT-1和VIM；支持肺腺癌的免疫組化指標：CK7、AE1/ AE3、CD15、CEA、TTF-1；支持淋巴造血系統腫瘤的免疫組化指標：LCA、CD15、 CD 30等；支持鱗狀細胞癌的免疫組化系統：CK5/6、P63，CD68陽性為組織細胞。結果判斷：TTF1、P63、P16、WT-1呈棕黃色細胞核染色且陽性細胞率≥10%視為陽性；CK7、CEA、CK5/6、AE1/AE3、VIM、Calretinin、HBME-1、SYN、CGA、CD 68呈棕黃色細胞質染色且陽性細胞率≥10%視為陽性；CD15、CD30、LCA、CD 56、CD 20、CD 3呈棕黃色細胞膜染色且陽性細胞率≥10%視為陽性。

2 結果

2.1 常規細胞涂片HE鏡下特點胸腔積液小細胞肺癌細胞涂片由小圓、橢圓或梭形細胞組成，其細胞大小約為正常間皮大小，約為成熟淋巴細胞2倍大小，細胞分布疏松、不規則，細胞之間相互擠壓、嵌套（封三彩圖4～5）。細胞核質比高，胞漿少，細胞核深染，可見核內有分布較為均勻的細小的染色質顆粒，無或僅有小的核仁，可見分裂象及壞死。因其細胞十分脆弱，故在涂片制作過程中易出現細胞被破壞而形成的“拉絲”現象。臨床工作中難以跟低分化鱗狀細胞癌、腺癌、間皮病變及淋巴造血系統鑒別。

2.2 免疫表型20份疑似惡性胸腔積液標本中5例小細胞腫瘤中對CK、CGA、CD56和SYN均有較高陽性表達率，4例低分化鱗狀細胞癌對CK 5/6和P63有較高陽性表達率，4例肺腺癌對CK 7、TTF1、CEA有較高陽性表達率，1

例間皮病變對Calretinin、WT-1、HBME-1和VIM有較高表達率，1例淋巴瘤對LCA等有較高表達率。

3 討論

雖然惡性小細胞腫瘤有一定的細胞學特點：如癌細胞小，小于2～3個小淋巴細胞，呈卵圓形或梭形，胞質少，幾乎為裸核細胞界限不清，核染色質細顆粒狀，分布均勻，不形成明顯染色質團塊，有時表現出經典的“鹽椒粉”狀特點，癌細胞成堆、成巢分布，互相鑲嵌，也可見單個癌細胞呈線性排列，有時形成的“拉絲”現象[1-2]。但臨床工作中仍然難以跟低分化鱗狀細胞癌、腺癌、惡性淋巴瘤及間皮病變等鑒別，且常規的細胞學涂片法所收集的細胞數量少，常有大量紅細胞、炎性滲出物及黏液混雜在一起，造成背景不清晰，同時細胞厚薄不均勻，細胞多層重疊較為嚴重，有些陽性細胞甚至被干擾物所覆蓋，并且結構不清，面積大而敏感度較低，常導致癌細胞的檢出出現假陰性。

細胞塊制作簡單且可避免常規細胞涂片的不足，蠟塊又可以像常規活檢組織塊一樣反復間斷切片，有利于多種抗體組合運用或對某一特定細胞的比較觀察，陽性顆粒為棕黃色或棕褐色，定位準確可靠、背景清晰，提高了陽性率，對惡性小細胞腫瘤胸腔轉移的診斷意義重大。

免疫組織化學標記物常包括CGA、SYN、CD56和CK等[3-4]，診斷惡性小細胞腫瘤時一般應具有上述列舉的3項標記物中的兩項呈陽性結果。另外TTF-1及P63在惡性小細胞腫瘤中也有較高表達。鑒別診斷：（1）低分化鱗狀細胞癌CK5/6、P63等組合；（2）惡性淋巴瘤LCA、CD20、CD3等組合[5]；（3）腺癌CEA、CK7、TTF1等組合[6]；（4）間皮病變Calretinin、WT-1、HBME-1和VIM等組合[7-8]。

惡性小細胞腫瘤是肺癌中惡性程度較高的一種，其有惡性程度高、進展迅速、容易發生轉移，特別是易轉移至胸膜腔至胸膜腔大量積液等預后差的特征。肺小細胞癌臨床癥狀明顯，以咳嗽和咳血痰為最常見的表現，因一部分患者以胸腔大量積液為首發癥狀且小細胞腫瘤患者目前多采用化療而非手術治療，故細胞學檢測對確診小細胞腫瘤有重要意義。

總之，本研究結果顯示在結合臨床的基礎上利用細胞塊技術HE染色觀察惡性小細胞腫瘤細胞形態結合免疫組織化學檢查可大大提高檢出率，且明確了組織來源，在惡性小細胞腫瘤胸腔轉移的診斷中作用顯著。在胸腔積液細胞學涂片診斷困難時，利用細胞塊結合免疫組化技術作為輔助方法，能有效提高惡性小細胞腫瘤的陽性檢出率，減少漏診及誤診的發生，值得臨床推廣。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2014.06.023

R446.6

A

1671-0800(2014)06-0686-02

322100 浙江省東陽，東陽市紅十字會醫院（沈湘萍）；東陽市紅十字會醫院（陳艷、張小偉）

沈湘萍，Email：zhangxiao 131456@163.com