高效氟苯尼考粉劑研究

劉懷珠，張建平，胡海英，趙清斌，張正全

（1.鄭州大學藥學院，河南 鄭州450001；2.上海邦森生物科技有限公司，上海 奉賢201422）

氟苯尼考（Florfenicol），是一種新型獸醫專用廣譜抗菌藥，具有抗菌后效應顯著、無潛在致再生障礙性貧血作用等特點。2010年版《中國獸藥典》已收載氟苯尼考粉劑、注射劑、溶液劑等。據報道，不同廠家的氟苯尼考產品在使用中也存在顯著差異，所以目前國內重點研究了氟苯尼考快速溶出制劑，如氟苯尼考包合物研究[1]、氟苯尼考納米乳研究[2]等。但其固體口服給藥療效仍差于國外同類產品，鑒于此，課題組已對氟苯尼考的溶解度行為、脂水分配系數[3]及其在體生物吸收行為進行了研究[4]，結果顯示、氟苯尼考溶解度低（1.2mg/mL)、脂水分布系數P在2.5左右，本應有利于藥物的吸收[5]，但藥物吸收速度卻較慢，2 h僅吸收17.875%[4]。因此，本試驗擬采用無定形技術和藥物吸收促進技術，提高氟苯尼考在水中的溶解度和通過生物膜的速度，以保證藥物能夠快速溶出和吸收。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 氟苯尼考原料藥（湖北龍翔藥業有限公司，含量99.9%，批號∶101152）、國外產品對照（批號：RKPB1575）、甲醇（色譜純）、吐溫-80（化學純）、淀粉（藥用），其余試劑均為分析純。

1.2 試驗儀器 Angilent-1200高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；AKasil C18色譜柱(Agela Tech?nologies)、RC-6溶出度測試儀（天津市光學儀器廠）；BUCHIB-290微型噴霧干燥器（瑞士，BUCHI公司）。

1.3 試驗動物 普通級昆明系小鼠，體重18～22 g，河南省實驗動物中心，合格證號：410118；清潔級健康大鼠，體重200±10 g，鄭州大學實驗動物中心，合格證號：SCXK(豫)2012-0002。

1.4 氟苯尼考含量測定方法[4]采用高效液相色譜法，在波長為224 nm處進行氟苯尼考的含量測定，結果應符合含量測定要求。

1.5 氟苯尼考高效粉劑處方優化試驗

1.5.1 氟苯尼考吸收促進劑的篩選 將適量氟苯尼考原藥用水溶解并稀釋成0.1mg/mL的氟苯尼考水溶液，分別加入吸收促進劑乙二胺四乙酸二鈉鹽、十二烷基硫酸鈉鹽、膽酸鹽、吐溫-80，制成含0.1%吸收促進劑的氟苯尼考溶液；另取對應量國外粉劑（陽性對照），用水溶出藥物，過濾并稀釋至相同濃度；同樣操作，以氟苯尼考水溶液為陰性對照。取試驗前禁食12 h不禁水大鼠18只，稱重并編號，隨機分6組，依照張建平[4]氟苯尼考大鼠腸吸收方法，分別給予大鼠上述6種不同氟苯尼考水溶液，進行大鼠腸循環試驗，平行操作，檢測氟苯尼考在體大鼠腸的吸收情況，以氟苯尼考的腸吸收百分率為評價指標。

1.5.2 氟苯尼考吸收促進劑的再優化 取適量氟苯尼考原藥用水溶解并稀釋成0.1mg/mL的氟苯尼考水溶液，同時加入吸收促進劑EDTA和SDS，制成含0.2%吸收促進劑的氟苯尼考溶液；另取對應量國外產品（陽性對照），用水溶出藥物，過濾，用水稀釋至相同濃度；同樣操作，以氟苯尼考原料藥為陰性對照。按照1.5.1項下方法操作。

1.5.3 氟苯尼考高效粉劑的制備[6]稱取氟苯尼考10 g，用丙酮60mL溶解，備用。另稱取多孔性微粉硅膠45 g、淀粉44.5 g，用水450mL分散，再加入EDTA 0.5 g，SDS 0.5 g溶解；將氟苯尼考的丙酮溶液加入到含有多孔性微粉硅膠和淀粉的混懸液中，快速攪拌、噴霧干燥，優化操作條件為：進風溫度150℃～180℃，出風溫度40℃～50℃，噴霧空氣流量30～45m3/h，噴霧壓力0.5～0.6Mpa，控制真空度在20～50mbar之間，收集產品再60℃～70℃干燥5 h，即得產品。

1.6 體外溶出試驗 按中華人民共和國獸藥典2010年版一部附錄97第二法(槳法)，以氟苯尼考原料藥對比考察優化后產品溶出·速率。溶出介質為脫氣的去離子水900mL，溫度37℃，轉速100 r/min，分別于0、5、10、15、20、30、45、60min處取樣5 mL，同時補等量同溫介質5 mL，經0.2μm微孔濾膜過濾，HPLC法測定藥物濃度，計算各時間點的累積溶出率。

1.7 生物利用度對比試驗 取優化后的氟苯尼考粉、氟苯尼考原料藥、國外產品適量分別用水溶解過濾，制得濃度為0.5mg/mL的氟苯尼考水溶液3份，備用。將小鼠稱重并編號，隨機分3組，每組36只，禁食12 h但不禁水，灌胃給藥50mg/kg體重，分別于給藥后0、0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、24 h眼球取血0.3mL于1%肝素化的離心管中5 000 r/min離心15min，取上層血漿，平行操作。HPLC法測定血藥濃度，繪制氟苯尼考藥時曲線。將試驗結果通過PKSolver藥動學處理軟件進行擬合；并用SPSS20.0統計軟件對數據進行方差分析，P＞0.05（雙側）表示差異無統計學意義，P＜0.05（雙側）表示差異具有統計學意義P＜0.01（雙側）為差異非常顯著。

2 結果

2.1 不同吸收促進劑對氟苯尼考吸收的影響 按照1.5.1項下方法，以國外產品為陽性對照、氟苯尼考原料藥為陰性對照，對吸收促進劑進行篩選，結果見圖1。

由圖1可見，各吸收促進劑對氟苯尼考腸吸收有不同程度的影響：EDTA可使藥物的腸吸收率達32%，產生最強的吸收促進作用（P＜0.01）、SDS次之（P＜0.01），膽酸鹽和吐溫-80對藥物的吸收沒有顯著（P＞0.05）促進效果。

依據上述試驗結果，按照2.2.2項下方法進行吸收促進劑混合使用，以進一步優化處方，結果見圖2。

由圖2可見，EDTA和SDS聯用后，氟苯尼考的腸吸收率升至40%，藥物的吸收速度顯著高于原溶液（P＜0.05），與國外產品相當（P＞0.05）。研究證明，聯用EDTA和SDS優選為氟苯尼考的吸收促進劑。

圖1 氟苯尼考在體大鼠腸吸收 （100μg/mL）

圖2 氟苯尼考在體大鼠吸收 （100μg/mL）

2.2 氟苯尼考高效粉體外溶出 按中華人民共和國獸藥典2010年版一部附錄97第二法(槳法)考察藥物溶出速率結果見圖3。

圖3 不同時間氟苯尼考累積溶出度

如圖3所示：體外溶出5min時，氟苯尼考無定形物（粉）的累積溶出已達85%以上，而氟苯尼考原料藥僅釋放5%左右，相差17倍。結果表明，氟苯尼考高效粉能顯著（P＜0.01）提高原料藥的溶出速率。

2.3 高效氟苯尼考粉劑生物利用度試驗 按照

2.4項下方法對高效氟苯尼考粉生物利用度進行考察，藥時曲線見圖4。

圖4 氟苯尼考小鼠灌胃給藥藥時曲線 (50mg/kg)

將實驗數據用PKSolver藥動學處理軟件進行擬合，結果見表4。

根據C-t曲線和藥動學參數可知：本制劑組水溶液小鼠灌胃后，能快速溶出吸收入血，達峰最快且血藥濃度最高，36min即達Cmax為54.08μg/mL，是原藥溶液的近1倍，與陽性對照55 min達Cmax49.8 6μg/mL相比，差異顯著（P＜0.05）；生物利用度是陽性對照的99.08%、是原藥溶液的124.4%。結果表明，本制劑組有效的提高了藥物的溶出和吸收速率，改善了藥物在體內的吸收和分布，顯著提高了藥物的生物利用度。

3 討論

在高效氟苯尼考粉的優化試驗中，鑒于吸收促進劑EDTA（螯合效應）和SDS（表面活性劑作用）促進吸收機理的差異和其對藥物在體腸吸收的顯著促進作用，試驗試將其合用，結果證明，EDTA和SDS聯用對藥物的吸收能產生正協同作用；試驗同時采用噴霧干燥法，利用多孔性微粉硅膠的多孔性及高比表面積特征，使藥物在其表面高度分散，呈現出一種高能狀態，進而達到使藥物快速溶出的目的。通過對其生物利用度的考察，本研究制劑達峰最快、時間最短，在體內MRT與國外產品相似，均能很快完全吸收；且由于氟苯尼考是一種濃度依耐型抗生素，劑量后效顯著，Cmax越大越有利抗菌素后效應的發揮、藥物療效就越好，所以本制劑最大的Cmax對克服細菌耐藥性的產生、提高藥物療效具有重要意義。

表1 小鼠灌胃相同劑量國外產品、高效氟苯尼考粉和原料液（50mg/kg）的藥動學參數（n=3）

4 結論

本試驗采用無定形（非晶型）技術和藥物吸收促進技術，成功制備了含有氟苯尼考10%、氟苯尼考無定形物吸附載體89.8%、十二烷基硫酸鈉鹽0.1%和乙二胺四乙酸二鈉鹽0.1%的高效氟苯尼考粉劑，其在體外能快速釋放，體內能快速吸收、血藥峰值濃度高、比國外同類產品有更好的治療效果，且因制備方法簡單、成本低，具有推進工業化大生產的前景。

[1]魏海濤，宋敏，李亮華，等.氟苯尼考-β-環糊精包合物的研制[J].華南農業大學學報，2009，30(4)：94-97.

[2]劉安剛，李引乾，孫嬌，等.氟苯尼考納米乳的制備及品質評價[J].西北農業學報，2011，20（6）：44-49.

[3]Jafvert C T，Kulkarni P P.Buckminster fullerene’s octanol-water partition coefficient and aqueous solubility[J].ENVIRONMEN?TAL SCIENCE＆TECHNOLOGY，2008，42(16)：5945-5950.

[4]張建平，胡海英，張正全.氟苯尼考在大鼠體腸吸收特征試驗[J].中國獸醫雜志，2013，49(6)：71-74.

[5]沙先誼，方曉玲.預測藥物小腸吸收的數學模型和細胞模型[J].中國藥學雜志，2003，38(12)：973-975.

[6]張正全，趙清斌，劉寒，等.高效氟苯尼考粉劑組合物及其制備方法[P].中國專利：201210411002.0.