丹東豬繁殖與呼吸綜合征的流行病學調查

侯洪烈，高慶田，羅永成，姜鳳華，馬海彬

（1.遼東學院農學院畜牧獸醫系，遼寧 丹東118003；2.遼寧省丹東市獸藥飼料監察所，遼寧 丹東118000；3.遼寧省丹東市動物疫病控制中心，遼寧 丹東118000）

豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)是目前引起母豬繁殖和仔豬呼吸道疾病的重要病原之一，很難清除和凈化。2012年12月，丹東市某豬場先后發生了以懷孕母豬流產、死胎，部分哺乳仔豬出現耳部發紺、神經癥狀甚至死亡為特征的疾病。該發病場PRRSV的RT-PCR檢測，檢出率為100%（5/5），確診為豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）。其他豬場也有個別類似病例出現，檢測鄰近8個規模場PRRSV抗體的血清陽性率，結果在64.0%～95.4%之間；PRRSV的RT-PCR檢測陽性率為5.4%（2/37）。結果表明，丹東地區存在PRRSV感染，應加強對豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）的免疫，采取綜合措施，有效控制該病。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 Beckman Allegra 64型高速冷凍離心機,UNO-II型核酸擴增儀(Biometra公司),電泳儀,Thermo MK3酶標儀，DS8000PC凝膠成像及分析系統(英國UVP公司)。

1.2 流行病學調查 對發病規模化養豬場的免疫情況、生產繁殖和發病情況進行了調查。

1.3 血清學檢測

1.3.1 發病豬場及其鄰近場血清采集 對發病豬場及其鄰近場的種豬、后備豬、肉用豬及仔豬分別隨機采樣。耳靜脈無菌采集豬全血2mL，37℃放置1 h，待全血凝固并析出血清后，8 000 r/min離心4min，取上清液，-20℃保存，待檢。共采待檢血清2 835份。

1.3.2 試劑及檢測方法 PRRSV的ELISA抗體檢測：PRRS的ELISA抗體檢測試劑盒（美國IDEXX公司生產），檢測方法按其操作說明書進行，S/P值≥0.4為陽性。S/P值＜0.4為陰性。比較不同豬場的血清陽性率。

1.3.3 病原學檢測 隨機剖檢發病豬場及鄰近豬場疑似病死豬，無菌采取每頭病死豬肺門淋巴結或脾臟，共42份。-20℃保存備用。

取1.5～2 g病料，加少量滅菌PBS(含青霉素、鏈霉素100 IU（ug）/mL)。無菌研磨至糊狀，取PBS按1∶4的體積比稀釋，分別在-20℃和37℃反復凍融3次，8 000 r/min（4℃）離心10min，取上清，-20℃保存，待檢。

試劑：TRIZol來自AutolabTech公司；DEPC來自Sigma公司；DL-2 000 DNA Marker來自Tiangen公司；AMV反轉錄酶、Rnase Inhibitor、r Taq DNA聚合酶、dNTPs等，均購自Clontech公司。

引物由Novagen公司合成，序列如下：（PF）5′-CTG AGA CCA TGAGGTGGGCAA CT-3′；（PR）5′-CAT CACTGGCGTGTAGGTAATAGA AAAC-3′，擴增產物預期大小為748 bp。

病毒總RNA提取：取-20℃保存的各病料上清液，按TRIZol LSReagent試劑盒（Invitrogen公司），按操作說明書提取病毒總RNA，15μLDEPC水溶解，-20℃保存待檢。

RT-PCR檢測：取10μLRNA，加1μL(20 pmoL/μL)下游引物、3.5μL dNTP(2.5mmoL/μL)、0.5μL Rnase Inhibitor(40 u/μL)、1μL LAMV、4μL 5×AMV Buffer，42℃水浴1～2 h，得cDNA模板，之后進行PCR檢測。PCR反應體系為：10×PCRBuffer5μL、dNTPs 4μL、上下游引物各1μL、rTaq 0.6μL、cDNA 4μL、加水至50μL，反應參數為95℃變性5min，94℃1min，58℃40 s，72℃50 s，共32個循環；最后72℃延伸10 min。反應結束后，取8μLPCR產物,1%瓊脂糖凝膠，100 V、30min電泳，觀察結果。

2結果

2.1 發病豬場流行病學調查結果 發病豬場及其鄰近8個規模化豬場都有防疫制度。發病豬場除因當時發生其他疫情，未免疫豬繁殖與呼吸綜合征滅活苗外，其他免疫程序均與其他豬場大致相同。種豬免疫接種豬瘟兔化弱毒疫苗、口蹄疫疫苗、偽狂犬病滅活苗、豬繁殖與呼吸綜合征滅活苗、豬傳染性胃腸炎與流行性腹瀉二聯苗和鏈球菌苗,細小病毒疫苗僅在后備母豬免疫1次。肉豬均接種豬瘟、口蹄疫、豬肺疫和鏈球菌疫苗。

發病豬場的繁殖障礙情況：調查86胎，發病24胎，發病率27.9%（24/86）；總產仔數1 067，病死仔數357，死亡率33.5%（357/1 067）。母豬產出活仔、死仔和木乃伊胎兒，胎膜污灰、腐臭。母豬產后發情周期紊亂，甚至屢配不孕，反情率80%（36/45）。初產仔豬出現弱仔、畸形胎兒和先天性震顫，個別腹瀉，常于生后1～3 d死亡。

病理剖檢變化：病死仔豬淋巴結腫大、充血和出血，淋巴濾泡出血和壞死。胸腔有大量清亮或渾濁積液,有的有纖維素狀滲出物。間質性肺炎，肺淤血，邊緣肝變。腎表面、實質、髓質針尖大出血斑點，腦水腫。組織學檢查：肺嗜中性粒細胞浸潤，腦干呈亞急性單核細胞性腦炎和血管周圍炎，小血管周圍“血管套”。

2.2 鄰近豬場PRRS血清學檢測 檢測鄰近8個豬場2 835份血清,陽性2 390份,PRRS抗體平均陽性率84.9%，各豬場的抗體陽性率在64.0%～95.4%之間，結果詳見表1。

表1 鄰近豬場PRRSV血清抗體檢測結果

不同豬場PRRSV血清抗體陽性率u檢驗結果見表2。由表2可見，甲、乙場與平均數差異極顯著（|u（uc）|≥2.58），即極顯著地低于平均數；丙、戊、庚場也與平均數差異極顯著（|u（uc）|≥2.58），即極顯著地高于平均數；丁、己、辛場與平均數差異不顯著（|u（uc）|＜1.96）。總之，這鄰近的8個豬場豬的PRRS免疫水平參差不齊。

表2 鄰近豬場PRRSV血清陽性率比較

2.3 發病及鄰近豬場RT-PCR檢測 發病場PRRSV的RT-PCR檢測陽性率為100%（5/5）；鄰近豬場疑似病死豬隨機采取的病料37份，檢出PRRSV核酸陽性2份,檢出率為5.4%（2/37），結果詳見表3。

表3 鄰近豬場PRRSV的RT-PCR檢測結果

3 小結和討論

3.1 采取綜合防制措施 由于PRRS屬免疫抑制病,并存在豬只長期隱性感染的可能,要控制該病必須采取綜合性防制措施。出現疫情后，立即封鎖發病豬場，淘汰陽性豬。及時清洗和消毒豬舍及環境，母豬流產的胎衣、死胎及病死豬嚴格做好無害化處理，產房徹底消毒。加強飼養管理，防止繼發感染。提高豬只的免疫力，對發病豬場周圍的豬群緊急接種PRRS滅活疫苗。

3.2 預防其他病原的感染 某些疾病的感染，如豬圓環病毒2型等免疫抑制性疾病，可引起PRRS的免疫失敗。雖然本次試驗沒對這類病原進行確診，但如何預防此類免疫抑制性疾病的感染，是有效提高PRRSV免疫效果的重要環節之一。

3.3 制定科學的免疫程序 結果證明，雖然檢測的豬場均進行過PRRS免疫，但是抗體滴度水平參差不齊，可能養殖場缺乏獸醫專業人員，自主免疫不到位等，造成了對PRRS免疫認識不足的漏免現象，最終導致臨床發病。所以，應在疫病監測結果基礎上制定科學的免疫程序，嚴格防疫。

3.4 病毒感染監測很必要 PRRSV具有廣泛的抗原變異能力，這種變異性不僅表現于不同基因型的PRRSV之間，而且表現于同一基因型的PRRSV不同分離株之間，不同毒株之間抗原的交叉保護是有限的，由于PRRSV各分離株之間存在著廣泛的抗原多樣性，根據某一PRRSV分離株制備的疫苗是不可能有效地保護豬群對抗具有抗原差異的PRRSV野毒株的感染[2]。而由于基因變異,PRRSV毒力明顯增強,會給生豬生產造成嚴重損失[3]。另外，目前使用的豬藍耳病免疫抗體檢測試劑盒不能區分野毒抗體和免疫抗體。所以，加強該病毒感染監測十分必要。

3.5 藥物預防 選擇對PRRS及其他病毒性疾病均有一定效果的某些藥物進行藥物預防。如中藥銀翹散：主要成分為金銀花、連翹、淡豆豉、薄荷、荊芥穗等，按每噸飼料添加2～3 kg連喂5～6 d。此外，PRRSV的一個重要生物學特征是主要攻擊宿主的單核巨噬系統，可導致免疫抑制甚至失敗，所以，可選擇黃芪多糖、氟苯尼考、替米考星、強力霉素等藥物以預防PRRS引起的并發或繼發感染。

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