黃巖紫山藥炭疽病病原菌培養條件

趙永彬，王嬌陽，陳偉強，唐興國

（浙江省臺州市農業科學研究院，浙江臨海 317000）

黃巖紫山藥炭疽病病原菌培養條件

趙永彬，王嬌陽，陳偉強，唐興國

（浙江省臺州市農業科學研究院，浙江臨海 317000）

對自主分離的黃巖紫山藥炭疽病病原菌開展培養條件研究。結果表明，PYA培養基在28℃、pH值4條件下病原菌菌落生長最好，直徑為8.46cm，而PJJ培養基（PDA+山藥煎汁+酵母膏培養基）在28℃、pH值5.6條件下，產孢量達到最高水平，為34.5×106個·mL-1。通過綜合考慮，以PJJ培養基為首選培養基。

紫山藥；炭疽病；病原菌；培養條件

炭疽病是山藥主要病害［1］。黃巖紫山藥又稱紫蒔藥，為山藥地方品種，其肉質深紫色，市場歡迎度高［2］。近年隨著生產面積不斷擴大，炭疽病已成為主產區產業發展的瓶頸。以從黃巖紫山藥中分離的炭疽病菌為研究對象，通過對其培養條件進行研究，為進一步開展紫山藥炭疽病防控奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

菌株從當地黃巖紫山藥中分離出來，經柯赫法則驗證，為炭疽病病原菌。

1.2 處理設計

將病原菌在PDA培養基上28℃暗培養6d后，用直徑5mm的打孔器在菌落邊緣打取菌餅接種。

培養基篩選試驗。培養基共設10種，分別為PJ（PDA+山藥煎汁）、查氏、GM、PYA、MM、燕麥、PJJ（PDA+山藥煎汁+酵母膏0.5g）、PCA、SJ（山藥煎汁加每升20g瓊脂）及PDA培養基，以清水瓊脂培養基為對照（CK）。

山藥煎汁。將新鮮山藥莖葉200g用蒸餾水煮沸30min后，定容至1000mL。其他涉及山藥煎汁的培養基，均用該溶液配制。

培養溫度篩選試驗，設4個溫度處理，分別為20℃，25℃，28℃，32℃。培養基采用前期試驗所篩選出的對菌落和孢子生長較好的培養基。

pH值試驗。設5個pH值梯度，分別為3，4， 7和9，以及原培養基pH值（即不作調整，pH值5.6）。

培養基種類同溫度試驗。培養條件為28℃暗培養。

接種后將培養皿密封倒置，于恒溫培養箱中暗培養，逐日觀察菌落生長情況。6d后測量菌落生長情況，用十字交叉法測量菌落直徑；10d時用血球計數板對孢子進行計數，方法參照王洪波等［3-6］，并稍作改動。每處理重復3次。

2 結果與分析

2.1 不同培養基對病原菌菌落生長和產孢的影響

檢測發現（表1），病原菌在PJJ培養基上生長最好，菌落直徑達8.4cm；其次是PYA培養基，而在燕麥培養基上生長最差（CK除外），且菌落最薄。而PJJ培養基在產孢方面也表現最好，為34.50×106個·mL-1。因此可考慮將PJJ做為該病原菌的生長和產孢培養基。結合各培養基成分與病原菌生長情況推斷，山藥莖葉中含某些有利于該病菌繁殖的成分，也是山藥易感染炭疽病的原因之一。

2.2 不同溫度對病原菌菌落生長和產孢的影響

從上述試驗中篩選出3種培養基，分別為PYA，PJJ，PDA培養基，以此進行溫度試驗。

表2顯示，病原菌接種到3種培養基上后，在4種溫度條件下，28℃表現最好，是該病原菌的最適生長溫度。

表1 不同培養基對菌絲生長和孢子形成的影響

表2 不同溫度對菌絲生長和孢子形成的影響

2.3 不同pH值對病原菌菌落生長和產孢的影響

表3表明，該菌在不同培養基上，隨pH值變化，有不同的表現。

表3 不同pH值對菌絲生長和孢子形成的影響

當pH值為3時，在PDA培養基上不能生長，在PYA和PJJ培養基上雖能生長，但不能產孢。當pH值為4時，菌落直徑以PYA表現最好，達8.46cm；但從產孢角度看，PJJ培養基在不對pH進行調整情況下，產孢量最好，達34.5×106· mL-1。綜合考慮，不進行pH值調整，即各培養基pH值5.3～5.6，均有利于菌落的生長及產孢。

3 小結和討論

通過對本地的幾個紫山藥種質資源調查發現，本地紫山藥中沒有抗病品種，均表現為感病，但抗病性與果肉顏色存在一定的關系，即隨著果肉顏色變深，抗病性越弱［4］。對從不同品種上分離的病原菌研究發現均屬于同一生理小種。

綜合試驗結果認為，菌落的生長及產孢量均以PJJ培養基表現最好，其最適溫度為28℃，pH值5.5左右。

另有研究表明，孢子萌發適溫為20～30℃［5］。而該病主要發于8月份左右，此時溫度正處于菌絲及孢子生長萌發適宜范圍。

由此可見，該病的實驗室生物學特性與其田間發生期的環境相一致。另外，部分作物炭疽病菌可產生有致病能力的外毒素可引起類似病原菌侵染形成的癥狀［6］。因此，進一步開展紫山藥炭疽病病原菌侵染機理研究，對選育抗病新品種具有重要意義。

［1］ 黃云，王洪波，李慶，等.山藥炭疽病研究［J］.西南農業大學學報，2004（2）：44-46.

［2］ 甘建平，李麗，羅君琴，等.保健功能蔬菜紫蒔藥利用價值分析及高產栽培技術［J］.現代園藝，2009（5）：17-18.

［3］ 王洪波.山藥炭疽病病原鑒定、生物學特性、病害循環及藥劑篩選研究［D］.雅安：四川農業大學，2003.

［4］ 趙永彬，盧秀友，江景勇.5個紫山藥地方品種比較試驗［J］.浙江農業科學，2013（11）：1544-1545.

［5］ 王洪波，黃云，李慶，等.山藥炭疽病研究：病原菌生物學特性［J］.西南農業大學學報，2004（6）：52-56.

［6］ 李延浩.開封地區桂花炭疽病菌的生物學特性及病菌毒素性質的研究［D］.開封：河南大學，2010.

（責任編輯：張瑞麟）

S436.3文獻標志碼：B文章編號：0528-9017（2014）07-1065-02

文獻著錄格式：趙永彬，王嬌陽，陳偉強，等.黃巖紫山藥炭疽病病原菌培養條件［J］.浙江農業科學，2014（7）：1065-1066.

2014-03-04

趙永彬（1978-），男，農藝師，從事蔬菜栽培及新品種選育工作。E-mail：zyb1305@126.com。