鳥巢蕨的組培快繁技術

潘曉韻，沈曉嵐，朱開元，劉慧春，鄒清成

（浙江省蕭山棉麻研究所，浙江蕭山 311202）

鳥巢蕨的組培快繁技術

潘曉韻，沈曉嵐，朱開元，劉慧春，鄒清成

（浙江省蕭山棉麻研究所，浙江蕭山 311202）

以背面帶有褐色孢子的鳥巢蕨葉片為外植體，通過孢子萌發途徑組培快繁鳥巢蕨。擴繁數量不大時，可全程采用1/2MS+AC1g·L-1培養基。在原葉體生長階段需要原葉體達到一定的數量和密集程度時配子間才有較大可能結合產生孢子體，一般原葉體層厚度需達0.5～1cm才有孢子體長出。孢子體增殖階段在MS培養基中加入6-BA能誘導植株產生GGB，通過GGB途徑進行增殖，GGB在不含或含有低濃度NAA，IBA的培養基上易分化成苗。

鳥巢蕨；組織培養；原葉體；孢子體；GGB

鳥巢蕨（Aspleniumnidus）為鐵角蕨科巢蕨屬植物，主要分布于亞洲、非洲和澳洲，為多年生常綠附生植物。葉叢生，向四周輻射狀排列，呈鳥巢狀。鳥巢蕨耐陰性強，較耐低溫，病蟲害少，管理簡便，可連續多年栽培，作室內觀葉布景及切葉栽培。近年來被用作高檔葉菜栽培，因栽培期間無需噴施農藥，嫩葉炒食質脆爽口，無苦澀味，頗受喜愛，成為道地的原生蔬菜。鳥巢蕨主要靠孢子繁殖，但繁殖要求條件高，自然條件下難以萌發。組織培養可以在短期內獲得大量種苗，進行規模化生產。

1 材料與方法

1.1 材料

以背面帶褐色孢子的鳥巢蕨葉為試材。

1.2 方法

1.2.1 無菌材料的獲得

葉片經流水沖洗1h后，用70%酒精浸泡20～30s，用無菌水沖洗后，在0.1%升汞中浸泡8～10min，再用無菌水沖洗并吸干水分后，切成0.5～1cm見方的小塊，接種于孢子萌發培養基上。

1.2.2 培養條件

培養溫度為20～25℃，光強2000lx，光照時間10h·d-1。

1.2.3 培養基

MS培養基加蔗糖30g·L-1，1/2MS和2/3MS培養基加蔗糖20g·L-1，瓊脂均為5g·L-1，pH為5.8，AC為活性炭（表1）。

表1 鳥巢蕨組培各階段培養基配方

1.2.4 其他處理

在原葉體生長階段的B1～B4各取6瓶加數滴無菌水，其中各取3瓶每周搖晃1次，持續2個月，另3瓶靜置。B1～B4各6瓶不加無菌水為對照。

將B2上1～1.5cm的鳥巢蕨小苗分別接入D1～D6培養基，每瓶4株，每種培養基8瓶，45d轉接1次，3個月后統計根數，測量每株最長4根的根長，計算平均值。

2 結果與分析

2.1 孢子的萌發

帶孢子葉在A1，A2培養基上經過1個月左右的培養，孢子萌發，可見許多綠色小點，即原葉體。無論葉面或葉背朝上，孢子均能萌發。

2.2 原葉體生長及孢子體形成

原葉體在不加6-BA的B1，B2培養基上生長快，顏色鮮綠；在培養基B3，B4上的則逐漸變黃，生出許多絨毛；在培養基B3上尚有緩慢生長，在B4中生長停滯，幾個月后變成內核堅硬的絨球。說明6-BA不利于原葉體的生長，濃度越高抑制越強［1-3］。NAA對原葉體生長無明顯促進作用。當B3，B4培養基上的原葉體轉入B1，B2培養基后，很快恢復生長。

在前7個月中，不論有無添加無菌水及是否晃動培養瓶，原葉體在4種培養基上都無孢子體產生。第8個月在B1，B2培養基中可見少量孢子體，培養基B3，B4上原葉體始終未見孢子體產生，轉入B1，B2培養基一段時間后才可見孢子體萌出。

培養前期的4種培養基，不論有無加入無菌水的培養瓶，定期晃動和靜置的都無孢子體萌出，說明在原葉體數量較少、分布分散的情況下，為擴大配子的活動范圍，促進配子間的結合，采取添加無菌水和晃動培養瓶的措施是無效的。

第8個月在B1，B2培養基上原葉體已長成0.5～1cm的厚層，而B3的原葉體尚未填滿接種塊間的空隙，且為黃色絨毛狀，B4上原葉體更是形成幾個孤立的絨球。當B3，B4上的原葉體轉到B1，B2培養一段時間后開始產生孢子體時，其顏色、數量和擁擠程度與第8個月B1，B2上的原葉體相仿。這說明只有原葉體達到一定的數量和密集程度時配子間才有較大可能結合產生孢子體。B1，B2上后續產生的孢子體越來越多也證明了這一點。

2.3 孢子體增殖

孢子體接入C1～C5培養基初期表現出不同程度的生長停滯，6-BA濃度越高停滯越明顯，2～3個月后孢子體中央可觀察到成團GGB（綠色球狀體）的產生。其中C1，C2產生的GGB數量少，單個體積大，GGB團塊顯得較大（圖1）。C3，C4，C5產生的GGB多而小，數量隨6-BA濃度增加而增加，體積隨6-BA濃度增加而變小，孢子體變厚變硬、葉卷曲皺縮。總體表現與先前他人［2，4］的試驗結果類似。在C1～C5培養基上，GGB都能不斷增殖。但GGB在C1，C2上能長出孢子體植株，在C3～C5上則長期以GGB的形態存在。

圖1 孢子體誘導產生GGB和壯苗促根

2.4 孢子體壯苗和促根

GGB轉入D1～D6培養基后迅速長成孢子體植株（圖1）。在D1～D6接入大小一致的鳥巢蕨已生根小苗進行生根培養基試驗，結果見表2。

表2 不同培養基對鳥巢蕨生根的影響

不同生根培養基處理間的鳥巢蕨根數無顯著差異。根長D6顯著長于D3，極顯著長于D5，D2，D4，D1顯著長于D4，說明活性炭、NAA、IBA主要影響鳥巢蕨根的長度，對根的數量無顯著影響。隨著IBA，NAA濃度增加，根長度也增加，活性炭對根的伸長也有較好的促進作用。

2.5 出瓶移栽

在春秋季將鳥巢狀3～4cm高的小苗從培養瓶取出，清洗掉培養基，盡量避免傷根，以800倍多菌靈或1000倍的甲基托布津蘸根和基部，移植到進口泥炭為基質的穴盤中，放入大棚，遮陰保濕約1個月，可每周噴施低濃度葉面肥，待小苗落黃的葉色重新轉鮮綠，新根長出，可逐步增加光照，降低濕度。2個月后調查，成活率可達90%。

3 小結與討論

鳥巢蕨作為1種蕨類植物，有孢子體和配子體2個世代。在配子體世代，不加植物生長調節劑的培養基更適合其孢子萌發和原葉體生長增殖，此結果與劉洋［1］、秦廷豪等［2］一致。產生的原葉體量較少造成培養時間偏長，可能與0.1%升汞滅菌時間超過8min而影響孢子活力有關［3］。鳥巢蕨孢子體的產生要求培養瓶內有一定數量和密集程度的原葉體，以利于配子間的融合，此現象和張善信等［3］通過振蕩培養獲得孢子體植株原理相同，所以原葉體在固體培養基上的轉接不能像一般的繼代轉接那樣保持間距，留出生長空間，而要有一定的密集程度，不能太稀疏。

如果要求組培的鳥巢蕨數量不大，而原葉體已擴繁至一定數量，則可以不進行孢子體增殖階段培養，僅通過原葉體產生的配子間結合自然長出鳥巢蕨小植株，組培全程可采用同1種培養基MS+AC 1.0g·L-1。如果要求數量較大，則采用孢子體增殖培養，培養基6-BA濃度不宜過高，建議不超過1mg·L-1，以免雖GGB增殖數量多但個體微小，從而延長后續培養時間。添加低濃度的NAA或IBA能夠促進GGB成苗。

生根壯苗階段，NAA，IBA和活性炭的作用主要是增加根的長度而非數量。但考慮到鳥巢蕨的根在出瓶種植時易斷，不同生根培養基間差異對后續生長的影響沒有出瓶時那么明顯。

由于種植時大部分根系受到損傷，鳥巢蕨組培苗的煉苗時間比一般草本植物組培苗要長，至新根長出約需1個月，與他人［5-7］的試驗結果類似。但只要苗高達3～4cm，植株生長健壯，煉苗階段保持適宜的溫度和濕度，無根苗也能有較高的成活率。

［1］ 劉洋.蕨組培快繁技術研究［J］.湖北農業科學，2013，52（5）：1188-1189.

［2］ 秦廷豪，鄒宗蘭.鳥巢蕨的組織培養［J］.植物生理學通訊，2004，40（3）：349.

［3］ 張善信，范俊強，鄭貴朝，等.鳥巢蕨孢子繁殖技術研究［J］.亞熱帶植物科學，2012，41（4）：48-50.

［4］ 尹鐵龍，孫平平.蕨類植物組織培養研究進展［J］.園藝與種苗，2012（3）：59-61.

［5］ 王宏航，李朝森，劉慧琴.觀賞蕨類植物組培快繁及其移栽技術［J］.江西農業學報，2006，18（5）：125-126.

［6］ 陳金典.鳥巢蕨組織培養育苗技術研究［J］.福建農業科技，2010（2）：44-46.

［7］ 李楊，余蓉培，李慧，等.觀賞蕨類植物組織培養研究進展［J］.園藝學報，2012，39（9）：1839-1848.

（責任編輯：張瑞麟）

S682.35文獻標志碼：B文章編號：0528-9017（2014）07-1049-02

文獻著錄格式：潘曉韻，沈曉嵐，朱開元，等.鳥巢蕨的組培快繁技術［J］.浙江農業科學，2014（7）：1049-1050，1053.

2014-02-28

潘曉韻（1967-），女，浙江蕭山人，助理研究員，從事花卉組培與育種研究工作。E-mail：panxy06@163.com。