超氧化物歧化酶檢測在中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病診斷中的意義

鐘 敏，劉曉力，劉曉加，杜慶鋒，許 娜，劉 志，林 榕，夏立平

（1．海南醫(yī)學院附屬醫(yī)院血液科，海口570102；2．南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院血液科，廣州510515）

目前早期診斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病（certral nervous system leukemia，CNSL）的方法很多，但臨床上尚無特異度和敏感度兼顧的方法。雖然常規(guī)的腦脊液細胞學檢查對CNSL早期診斷有重要價值，但只有在白血病細胞浸潤腦膜時呈陽性，而早期浸潤實質(zhì)和周圍神經(jīng)的腦脊液改變不明顯，甚至陰性，單純依靠腦脊液細胞學檢查早期診斷CNSL較困難。因此尋找CNSL新的早期診斷方法對預防和治療CNSL，提高患者的生存率和治愈率具有重要的臨床意義。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是機體內(nèi)重要的抗氧化物酶之一，目前大多數(shù)實驗研究表明腦腫瘤患者血清中SOD活性增高［1］，本研究采用黃嘌呤氧化酶法對30例CNSL患者及25例無中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害的急性白血病患者的腦脊液進行SOD活性檢測，以探討SOD活性變化在CNSL診斷中的意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選擇2008年1月到2009年1月南方醫(yī)科大學南方醫(yī)院血液科30例CNSL患者作為研究組（CNSL組），其中男21例，女9例；中位年齡為35．0歲，＜45歲19例，≥45歲11例。25例無中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害的急性白血病患者作為對照組，其中男13例，女12例，中位年齡為28．5歲。CNSL診斷標準參照血液病診斷及療效標準［2］。

1．2 方法

1．2．1 腰椎穿刺術(shù) 無菌收集腦脊液2～3 mL，其中2 mL送該院檢驗科進行常規(guī)、生化檢查，其余部分進行SOD活性測定。鞘內(nèi)化療方法：甲氨蝶呤10 mg＋地塞米松5 mg，阿糖胞苷50 mg，生理鹽水稀釋后鞘內(nèi)注射，每周2次。

1．2．2 腦脊液SOD活性測定 黃嘌呤氧化酶法測定SOD酶活性。采用高55 mm，內(nèi)徑10 mm的無色透明硬質(zhì)玻璃管為測定管。注入10μL待測腦脊液樣品，對照管以等體積0．05 mol／L、p H 7．8的磷酸鉀緩沖液代替。注入1 mg／mL黃嘌呤氧化酶50μL。加入940μL發(fā)光液啟動反應(yīng)，開動紀錄儀。紀錄發(fā)光峰值讀數(shù)。以對照管的發(fā)光峰值讀數(shù)為100%，根據(jù)樣品管測得的發(fā)光峰值讀數(shù)，計算樣品管中SOD對發(fā)光峰值的抑制程度，并由酶活力單位定義計算出樣品中的酶活力。活性單位定義：在規(guī)定測定條件下，25℃抑制50%發(fā)光所需要的SOD量為1個活性單位。所用數(shù)據(jù)由南京建成生物工程研究所提供。

1．3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13．0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以±s表示，結(jié)果采用t檢驗、單向方差分析、多重比較的LSD-q檢驗及雙變量相關(guān)分析方法進行分析，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2．1 患者腦脊液常規(guī)、生化檢查結(jié)果 CNSL組與對照組腦脊液中白細胞數(shù)量和蛋白含量比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）；兩組中的腦脊液壓力、葡萄糖、氯比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。見表1。

表1 兩組腦脊液常規(guī)、生化檢查結(jié)果（±s）

表1 兩組腦脊液常規(guī)、生化檢查結(jié)果（±s）

腦脊液 CNSL（n＝30）對照組（n＝25）t P壓力（mm H 2 O）145．67±65．26 128．20±19．20-1．291 0．202白細胞（×10 6個／L）13．70±7．03 0．24±0．52-9．539 0．000蛋白（g／L） 1．02±1．80 0．29±0．07-2．023 0．048葡萄糖（mmol／L） 3．26±0．72 3．32±0．81 0．290 0．773氯（mmol／L）121．77±4．42 123．00±3．37 1．144 0．258

2．2 患者腦脊液SOD活性檢查結(jié)果 CNSL組患者腦脊液SOD活性為（999．42±461．57），對照組為（662．17±354．38），兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（t＝-2．990，P＜0．05）。

2．3 患者腦脊液白細胞數(shù)量、蛋白含量與腦脊液SOD活性相關(guān)性分析 相關(guān)分析結(jié)果顯示，腦脊液白細胞數(shù)量和蛋白量含量均與SOD活性呈正相關(guān)（r＝0．871，P＝0．000；r＝0．518，P＝0．003）。

2．4 患者鞘內(nèi)化療前后患者腦脊液SOD活性檢查結(jié)果 鞘內(nèi)化療前患者SOD活性為（999．42±461．），鞘內(nèi)化療后患者腦脊液SOD活性為（675．34±326．81），兩者比較差異有統(tǒng)計學意義（t＝-3．252，P＝0．003）。

2．5 不同年齡組SOD活性比較 不同年齡組（＜45歲、≥45歲）腦脊液SOD活性檢測結(jié)果分別為（755．64±345．77）、（1 420．493±307．69），差異有統(tǒng)計學意義（t＝-5．275，P＝0．000）。

3 討 論

隨著新的化療藥物的不斷開發(fā)及化療方案的完善，急性白血病患者的緩解率、生存率得到提高，但由于大多數(shù)藥物未能通過血腦屏障，使得急性白血病患者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)成為白血病細胞逃避化療藥物的庇護所，有5%～10%的患者發(fā)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)浸潤，導致疾病復發(fā)［3-6］。尸檢證實CNSL發(fā)病率達88%，而臨床上出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀與體征卻不足50%［7］，臨床診斷遠比尸體解剖發(fā)現(xiàn)者少，主要原因是由于早期CNSL可無臨床表現(xiàn)，腦脊液常規(guī)檢查也可無明顯異常。因此，尋找CNSL早期診斷方法有著重要的意義。目前對于CNSL的診斷方法較為單一，主要是從腦脊液中尋找白血病細胞，這種方法靈敏度較低，治療上主要是反復鞘內(nèi)注射化療藥物配合全身化療，加行全顱脊髓放療，這樣有一定的風險性，患者也感到痛苦。臨床上需要我們探索新的具有靈敏度及特異度的診斷指標，使CNSL早期診斷及時治療，從而避免長期鞘內(nèi)注藥及放療引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。有文獻報道，腦脊液細胞學、β2微球蛋白和鐵蛋白對CNSL的早期診斷有一定價值［8］。作者主張多種標記物聯(lián)合檢測以便提高CNSL的診斷率。

近年來，氧自由基與腫瘤的關(guān)系日益受到人們的重視，機體在正常生理情況下存在著氧自由基的產(chǎn)生與酶的清除系統(tǒng)，他們在體內(nèi)保持著動態(tài)平衡，一旦這種平衡被打破，就可導致疾病的發(fā)生，而SOD是體內(nèi)重要的抗氧化物酶。Wozniak等［9］測定9例成膠質(zhì)細胞瘤患者和15例星型腦膜瘤患者紅細胞SOD活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)腦腫瘤患者紅細胞SOD活性較正常對照組高；Li等［10］通過對星型細胞瘤患者和12例腦膜瘤患者血清含錳SOD（MnSOD）活性測定發(fā)現(xiàn)，星形細胞瘤患者血清Mn-SOD活性低于腦膜瘤及健康對照組，且惡性程度越高對Mn-SOD防御體系破壞越嚴重，MnSOD活性下降越明顯；而腦膜瘤患者與健康對照組間MnSOD活性差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05），可能是由于顱內(nèi)良性腫瘤生長緩慢，SOD與體內(nèi)自由基代謝處于動態(tài)平衡所致。Xu等［11］報道了胃非黏液性癌胃區(qū)域淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移與自由基代謝狀況密切相關(guān)，胃壁中抗氧化能力降低，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強，促進了癌組織向胃區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，這進一步說明了自由基在惡性腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生中起重要的作用。對于白血病與自由基關(guān)系的研究已有較多的報道［12-14］，而這方面的報道多限于在血清和紅細胞中探討SOD與疾病的關(guān)系，在腦脊液中探討相對少，且目前尚未見對CNSL患者腦脊液自由基水平變化的報道。白血病細胞具有對組織的侵襲性、破壞性，自由基可通過氧化和交聯(lián)作用破壞DNA大分子，使其更易發(fā)生斷裂，基因組不穩(wěn)定性增加，多次、反復DNA損傷及修復過程可導致篩選出具有更強的增殖性和侵襲性的惡性克隆，這是克隆演進的過程。由于自由基的作用，CNSL的發(fā)生更容易。

本組研究結(jié)果顯示，CNSL組患者腦脊液中白細胞數(shù)量、蛋白質(zhì)含量明顯較對照組高，而兩組腦脊液壓力、葡萄糖和氯差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。表明腦脊液中白細胞數(shù)量和蛋白含量的改變對中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病診斷有肯定的意義，葡萄糖和氯對于CNSL的診斷可能非特異，本研究中CNSL組與對照組患者腦脊液壓力差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05），可能與本組研究觀察例數(shù)少，存在一定的局限性有關(guān)。在腦脊液SOD活性方面，本組研究結(jié)果顯示，CNSL組患者腦脊液的SOD活性明顯高于對照組患者，且腦脊液中白細胞數(shù)量和蛋白含量分別與SOD活性呈正相關(guān)關(guān)系，而白細胞數(shù)量和蛋白含量對CNSL的診斷有重要的意義，提示SOD活性的改變可能與CNSL發(fā)病有關(guān)。CNSL是白血病細胞對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的直接浸潤，CNSL可以發(fā)生于急性白血病的任何時期，本研究對27例CNSL患者進行了鞘內(nèi)化療，化療后隨著患者癥狀緩解，白血病細胞轉(zhuǎn)陰，腦脊液中SOD活性下降，化療前后SOD活性比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．05），與文獻［15］報道一致。說明SOD在CNSL的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用，其機制可能是化療藥物作用于白血病細胞，白血病細胞減少或消失，使有活性的SOD成分減少所致［16］，提示適度的進行預防治療會提高患者長期生存的機會［17］。因此，對于具有發(fā)生CNSL危險因素的白血病患者應(yīng)重視預防性鞘內(nèi)注射治療以求盡量降低CNSL的發(fā)生率，延長患者長期生存時間。另外，在本組研究中，“＜45歲”年齡組與“≥45歲”年齡組腦脊液SOD活性比較差異有統(tǒng)計學意義，提示腦脊液SOD活性的變化可能與年齡有關(guān)。由于在這方面的參考文獻較少，有待今后進一步增加樣本量繼續(xù)進行觀察。SOD活性的檢測可能作為新的輔助診斷指標用于CNSL的診斷，同時可作為動態(tài)觀察指標用于CNSL患者的治療過程中監(jiān)測，對CNSL的早期診斷及療效評估具有重要的價值。

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