p53在乳腺癌中的表達及其臨床意義＊

陳茂山，袁 杰，成 宏，楊光倫

（重慶醫科大學附屬第一醫院內分泌乳腺外科 400016）

乳腺癌發病率逐年上升，其病死率有下降趨勢，得益于診治手段的不斷提高。但臨床發現，分期或病理類型相同的患者，接受同一治療方案，其治療敏感性和預后存在明顯差異。乳腺癌是一類在分子水平上呈高度異質性的疾病，即使是組織形態學相同，其分子遺傳學改變也可能不盡相同，從而導致腫瘤治療和預后的差別［1］。故了解腫瘤細胞分子水平上的差異及其與臨床特征的關系有著重要價值。p53是迄今發現與人類腫瘤相關性最高的抑癌基因之一，與乳腺癌的發生、發展密切相關。本研究通過收集本科收治的214例乳腺癌患者，檢測并分析乳腺癌組織中p53蛋白表達與臨床病理特征的關系，旨在為乳腺癌個體化治療與預后評估提供參考依據。

1 資料與方法

1．1 一般資料 收集2010年10月至2012年4月在本科病理確診為乳腺浸潤性導管癌的患者214例，臨床病理資料完整，未行新輔助化療。患者均為女性，年齡29～73歲，中位年齡50歲；按美國癌癥聯合會2010年TNM分期標準，Ⅰ期27例，Ⅱ期105例，Ⅲ期59例，Ⅳ期23例。

1．2 方法 214例乳腺癌標本經免疫組織化學SP法檢測癌組織中雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長因子受體-2（HER-2）、p53、Ki-67的表達情況，單克隆抗體和免疫組織化學試劑盒均購自北京中杉生物技術有限公司，操作步驟嚴格按說明書進行。用已知陽性組織作對照，磷酸鹽緩沖液代替一抗做陰性對照。

1．3 判斷標準 p53、ER、PR免疫組化檢測以細胞核內著棕黃色為陽性細胞，判定陽性細胞計數百分比小于10%為陰性，≥10%為陽性。HER-2以細胞質和（或）胞膜著棕黃色為陽性（＋～＋＋＋）細胞，判定陽性細胞計數百分比小于25%為＋，25%～75%為＋＋，≥75%為＋＋＋，無顯棕黃色為陰性（-）。以-／＋為HER-2無擴增，＋＋＋為HER-2有擴增，＋＋則加做FISH確定HER-2是否擴增。

1．4 統計學處理 采用SPSS17．0統計軟件進行統計分析。計數資料以率表示，p53蛋白陽性率與臨床病理特征參數關系采用χ2檢驗，與參數間相關性采用Spear man相關分析，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結 果

免疫組織化學法檢測本組乳腺癌標本中p53蛋白的陽性表達率為52．3%。p53表達情況與患病年齡、病灶大小間差異無統計學意義（P＞0．05）；與淋巴結轉移狀態呈正相關（r＝0．396，P＝0．000）。據WHO腫瘤組織學分級標準將乳腺癌分為1、2、3級，p53表達率依次增高，與組織學分級呈正相關（r＝0．309，P＝0．000）。據St．Gallen共識（2011年）［1］將乳腺癌分為Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達型及三陰型，Lu minal A型組與余分子亞型組間p53表達差異有統計學意義（P＜0．05），后3個亞型間p53表達差異無統計學意義（P＞0．05）；而非三陰型患者p53陽性率為47．90%，與三陰型患者間差異有統計學意義（r＝0．167，P＜0．05）。本組病理標本中，免疫組織化學法檢測ER、PR、HER-2、Ki67的陽性率分別為59．35%、46．26%、24．77%、60．75%，p53與ER（r＝-0．561，P＝0．000）、PR（r＝-0．315，P＝0．000）的表達呈負相關，與HER-2（r＝0．374，P＝0．000）、Ki67（r＝0．153，P＝0．026）呈正相關，見表1。

表1 p53表達情況與乳腺癌臨床病理特征的關系

3 討 論

p53基因是人類惡性腫瘤中突變率最高的抑癌基因之一，定位于17p13．1，分為野生型p53（wt p53）和突變型p53（mt p53）。wt p53通過下游p21、bcl2、bax等信號通路介導阻滯細胞周期、促進細胞凋亡、維持基因穩定性，防止癌變［2］。wt p53可通過基因突變、缺失或基因的甲基化等方式轉變為mt p53，mt p53失去了抑制細胞生長、促進凋亡的功能，而具有誘導某些異常的基因表達，引起細胞的轉化和癌變，促進腫瘤的發生［3-4］。wt p53基因編碼的p53蛋白因半衰期短（約20 min），常規免疫組織化學法難以檢測，而mt p53基因編碼的p53蛋白半衰期長（2～12 h），免疫組織化學法檢測到的p53蛋白均為突變型。多項研究表明，mt p53蛋白在乳腺癌發生、發展及預后評估中起重要作用，檢測其表達情況可作為乳腺癌重要的預后標記物和預測因子［5-7］。

研究發現約50%的人類腫瘤都存在p53基因突變，乳腺癌mt p53表達率為20%～60%［8］，Auriemma等［9］研究報道乳腺癌p53蛋白表達率為23%～52%，本組乳腺癌p53蛋白的表達率52．3%，與以上報道基本一致。由表1可知，p53蛋白陽性表達與患者年齡、病灶大小間差異無統計學意義（P＞0．05），與仇加高［10］報道的一致。淋巴結轉移、乳腺癌組織學分級和分子分型都與乳癌患者預后有密切關系。淋巴結轉移是乳腺癌臨床分期和腫瘤浸潤性的評估指標，是乳腺癌獨立的負性預后因素；乳腺癌組織學分級越高、分化越差、預后越差；分子分型中Luminal A、Luminal B型可從內分泌治療中獲益，其預后較好，而三陰型乳腺癌侵襲性強、預后差。淦錦等［11］研究報道p53蛋白表達是乳腺癌患者復發轉移的相關因素之一。本研究發現p53表達情況與淋巴結轉移狀態（r＝0．396，P＝0．000）、組織學分級（r＝0．309，P＝0．000）和三陰型與否（r＝0．167，P＝0．014）均呈正相關，與Dooker等［12］的研究結果基本一致。表明p53基因在乳腺癌的進展、浸潤、侵襲轉移過程中發揮一定作用，p53高表達率提示乳腺癌預后不良。

Iwase等［13］研究發現ER陽性表達的乳腺癌術后5年生存率明顯高于陰性者，術后復發和遠處轉移較少，對PR在乳腺癌中的研究也有類似的報道。HER-2被認為是與乳腺癌發生發展密切相關的原癌基因，該基因擴增提示腫瘤惡性度高，預后差［14］。Ki-67與細胞增殖密切相關，其表達率反映腫瘤細胞群體增殖活性。de Azambuja等［15］行Meta分析發現Ki-67陽性表達的腫瘤細胞惡性程度高、增殖活躍，腫瘤生長速度快、侵襲及轉移率高，預后差。本研究通過Spear man相關性分析發現p53表達率與ER、PR呈負相關性，與HER-2、Ki-67呈正相關性。有文獻報道，p53、HER-2陽性腫瘤對環磷酰、氨甲喋呤、氟尿嘧啶聯合化療有一定抵抗性，但對含蒽環類藥的聯合化療敏感［16-17］，腫瘤化學敏感性可能與p53-bax介導的細胞凋亡有關［14］。廖海濤等［18］發現p53基因與GST-π、TopoⅡ存在協同表達的關系，p53過表達可增強GST-πP、TopoⅡ表達，從而使乳腺癌細胞獲得多藥耐藥表型，可能是p53高表達患者對化療不敏感的重要機制之一。Knappskog［19］對p53與蒽環類耐藥機制綜述認為，干擾p53信號通路可能是乳腺癌化療耐藥的關鍵因素。有研究認為通過腺病毒介導p53基因的靶向治療可逆轉乳腺癌細胞對阿霉素耐藥［20］。但也有報道認為wt p53活化阻礙化療反應，p53在腫瘤治療中的預測價值需再評估［21］。

綜上所述，p53蛋白可能通過其凋亡抑制作用，參與乳腺癌細胞生物學行為相關細胞因子的調控，促進腫瘤細胞存活，與乳腺癌治療敏感性與耐藥密切相關，但尚存一些爭議。深入研究P53在乳腺癌發生、進展中及與ER、HER-2等生物分子間的作用機制，可為乳腺癌個體化治療、療效及預后評估提供重要參考信息。

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