2650例育齡期婦女地中海貧血的篩查結(jié)果分析

田玉玲，雷力民，黃 偉

（廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院檢驗(yàn)科，南寧530011）

地中海貧血（簡(jiǎn)稱(chēng)地貧）又稱(chēng)珠蛋白生成障礙性貧血，是合成血紅蛋白（Hb）的珠蛋白肽鏈減少或缺失導(dǎo)致Hb 結(jié)構(gòu)異常，導(dǎo)致的慢性溶血性貧血。此疾患因?yàn)樵谑澜缟系母甙l(fā)率和臨床表現(xiàn)的嚴(yán)重性，已成為影響人類(lèi)健康的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問(wèn)題，被WHO 列為危害人類(lèi)健康的6種常見(jiàn)病之一。在我國(guó)主要分布在廣西、廣東、海南、福建等省份，其中廣西人群中地貧基因的攜帶率為12.22%～23.02%，由于此病的治療費(fèi)用高、難度大，對(duì)人民的身心健康構(gòu)成了很大的威脅［1-2］。為了解廣西地區(qū)人群的地貧發(fā)生率、攜帶率及基因類(lèi)型，為衛(wèi)生部門(mén)制訂相應(yīng)的干預(yù)措施提供重要的參考數(shù)據(jù)，筆者對(duì)來(lái)本院進(jìn)行婚前、孕前檢查的育齡期婦女進(jìn)行地貧的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，篩查為陽(yáng)性者再做進(jìn)一步的基因分析，并收集相關(guān)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010年1月至2013年8月在本院門(mén)診進(jìn)行婚前、孕前檢查的育齡期婦女2 650例，年齡21～43歲；另選本院體檢中心體檢的健康女性100例（對(duì)照組），年齡20～42歲，血常規(guī)、血清鐵蛋白（SF）及Hb電泳的各項(xiàng)指標(biāo)均在正常范圍。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)項(xiàng)目 每位受檢者于清晨抽取靜脈血3管，其中兩管各2mL加入 乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝管，分別做血常規(guī)、Hb電泳和地貧基因分析，第3管3mL 加入無(wú)抗凝生化管做SF測(cè)定。紅細(xì)胞（RBC）5項(xiàng)參數(shù)測(cè)定：RBC、Hb、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（MCH）、網(wǎng)織紅細(xì)胞（RET），用Sysmex XE-2100全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)。Hb電泳：用法國(guó)Sebia全自動(dòng)電泳分析儀做瓊脂糖凝膠電泳，試劑為原裝配套試劑。SF測(cè)定：用Cobase 601免疫化學(xué)發(fā)光分析儀及配套試劑。基因診斷：南寧金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所檢驗(yàn)，3種常見(jiàn)缺失型α地貧基因分析用Gap-PCR 技術(shù)檢測(cè)，3種點(diǎn)突變?chǔ)恋刎毣蚝?7種β地貧基因分析用反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)檢測(cè)。

表1 病例組血液參數(shù)檢查結(jié)果（±s）

表1 病例組血液參數(shù)檢查結(jié)果（±s）

組別 n RBC（×1012個(gè)／L） Hb（g／L） MCV（fL） MCH （pg） RET（%） SF（μg／L）病例組 536 4.88±0.69 101.6±10.1 69.1±6.6 23.0±2.2 2.5±0.9 132.0±2.2對(duì)照組 100 4.13±0.50 126.3±10.9 84.4±2.5 31.2±1.9 1.8±0.5 126.0±2.1 t 2.036 2.143 2.688 2.853 2.292 1.342 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.05 ＞0.05

1.2.2 正常參考區(qū)間 血常規(guī)：MCV 為82.6～99.1fL，MCH 為26.9～33.3pg［3］；Hb電泳：成人HbA2 為2.0%～3.5%，Hb F＜2.0%，沒(méi)有出現(xiàn)異常血紅蛋白帶［4］；SF：4.63～204.00μg／L［5］。若MCV＜79fL，MCH ＜27 pg，HbA2≤2.0%，出現(xiàn)異常血紅蛋白帶（HbH、Hb Bart′s），判為α地貧表型陽(yáng)性；若MCV＜79fL，MCH ＜27pg，HbA2＞3.5%或HbF＞2.0%，則判為β地貧表型陽(yáng)性［4］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血液參數(shù)檢查結(jié)果（初篩） 在2 650例受檢人員中，篩查出MCV＜79fL、MCH＜27pg、SF正常的有536例，疑為地貧患者（或基因攜帶者）及其他異常Hb病（病例組）。病例組RBC、RET 明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）；Hb明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）；MCV 和MCH 顯著低于對(duì)照組（P＜0.01）；病例組與對(duì)照組之間SF 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

2.2 Hb電泳結(jié)果 對(duì)初篩的536例病例組進(jìn)行Hb電泳檢測(cè)，檢出512例結(jié)果異常者（占95.52%），包括：α地貧表型陽(yáng)性68例，陽(yáng)性率12.69%（68／536），占總受檢人數(shù)的2.56%，其中HbH ＋HbBart′s 63 例；HbH 5 例；HbA2 為1.2%～2.0%，平均（1.60±0.35）%。β地貧表型陽(yáng)性438例，陽(yáng)性率81.71%（438／536），占總受檢人數(shù)的16.53%，其中HbA2＞3.5%277 例，HbA2＞3.5%合 并HbF＞2.0%者161 例；HbA2為3.5%～6.2%，平均（5.3±0.65）%。其他異常Hb 6例，陽(yáng)性率1.12%（6／536），占總受檢人數(shù)的0.23%，其中HbE 4例，HbG 1例，HbD 1例。

2.3 基因分析結(jié)果 對(duì)68例Hb電泳檢測(cè)的α地貧表型陽(yáng)性標(biāo)本再進(jìn)行α 地貧基因分析，確診為α 地貧，其中包括：--SEA／αα（39例），-α4.2／αα（6 例），-α3.7／αα（7 例），αCSα／αα（8例），αWSα／αα（2 例），--SEA／αCSα（2 例），--SEA／-α3.7（3 例），-SEA／-α4.2（1例）；對(duì)438例Hb電泳檢測(cè)的β地貧表型陽(yáng)性標(biāo)本再進(jìn)行β地貧基因分析，確診為β地貧，其中包括：CD41-42（188例），CD17（101例），CD71-72（51例），CD28（49 例），TVS-Ⅱ-654（32例），IVS-Ⅰ-1（11例），CD43（5例），CD29（1例）。

2.4 不同基因型地貧血液學(xué)參數(shù)比較 輕型α地貧和β地貧患者的RBC、Hb、MCV、MCH、RET 結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而隨基因受損數(shù)目增多的中間型地貧患者的Hb、MCV 和MCH 值偏低，和靜止型、輕型α地貧和β地貧患者的紅細(xì)胞參數(shù)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；鏡下RBC 形態(tài)觀察，因貧血輕重程度不同，RBC 的大小和中心淡染區(qū)有不等的擴(kuò)大，有異形、靶形、碎片RBC，且隨貧血程度的輕重不等，細(xì)胞的異形性也不同，以--SEA／αCSα、--SEA／-α3.7、--SEA／-α4.2、CD41-42、CD17、CD71-72、CD43型的變化更明顯。

3 討 論

地貧按受累基因的種類(lèi)分成不同的類(lèi)型，α地貧和β地貧是常見(jiàn)且較重的兩種。α地貧是由于基因中DNA 發(fā)生不同程度的缺失和缺陷，累及α基因，發(fā)生不同程度和類(lèi)型的貧血，如果4 個(gè)α基因僅缺失1 個(gè)為靜止型，缺失2 個(gè)為標(biāo)準(zhǔn)型（輕型），缺失3個(gè)為HbH （β4）病（中間型），4個(gè)全部缺失則α鏈絕對(duì)缺乏，為α0地中海貧血（重型），在臨床上表現(xiàn)為極嚴(yán)重的胎兒水腫綜合征，胎兒多在妊娠末期或產(chǎn)下30min內(nèi)死亡。β地貧是常染色體隱性遺傳，β鏈合成減少或缺乏的直接原因是β鏈的信使RNA（mRNA）的缺乏或沒(méi)有活性。如果父母雙方均為β地貧雜合子，子女的1／4從雙親均遺傳到β地貧基因，表現(xiàn)為純合子β0（重型），1／2從父母一方遺傳到β地貧基因，表現(xiàn)為雜合子（輕型）。重型β地貧的患兒發(fā)育不良，出生幾個(gè)月開(kāi)始出現(xiàn)中度到重度貧血，需要依靠長(zhǎng)期輸血維持生命，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。為此，若夫妻雙方都帶有同類(lèi)型地貧基因，即為地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦，胎兒必須接受產(chǎn)前診斷，及時(shí)采取有效措施，這是目前預(yù)防本病行之有效的方法。

本研究通過(guò)對(duì)2 650例婚前、孕前育齡期婦女的實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析，初步篩查出地貧疑似陽(yáng)性的病例組536例，表現(xiàn)為RBC、RET 增高，Hb降低，MCV 和MCH 顯著降低，病例組SF與對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。由于地貧患者RBC 體積小，Hb含量少，且RBC 中β4、γ4、HbF 的 含量相對(duì)增高，這類(lèi)物質(zhì)和氧的親和力高，使RBC在組織中不宜釋放出氧氣使機(jī)體缺氧，在RBC 胞膜上包涵體作用下細(xì)胞破壞加速，造成慢性進(jìn)行性溶血性貧血，缺氧和貧血刺激紅細(xì)胞生成素的分泌量增加，促使骨髓增加造血，RBC 和RET 數(shù)増高，又因Hb組分的改變使單位體積Hb含量和MCH 減少。SF的測(cè)定，排除了在血液學(xué)、形態(tài)學(xué)及臨床表現(xiàn)上同是小細(xì)胞低色素的缺鐵性貧血。由于靜止型α地貧與健康人群的血液學(xué)參數(shù)重疊區(qū)較大，在血液 學(xué)篩 查地貧 中，-α3.7／αα、-α4.2／αα、-αCS／αα有較高的漏診，使得α地貧的檢出率偏低。在檢出并確診的α地貧和β地貧患者的血液學(xué)參數(shù)中，隨基因受損數(shù)目增多，Hb、MCV 和MCH 值越低，細(xì)胞形態(tài)的異形性更明顯。

Hb電泳能將Hb 中各組分定量檢測(cè)出HbA、HbF、HbA2、HbH、HbE、HbG、HbD 等的含量，能對(duì)異常Hb疾病進(jìn)行初步分類(lèi)，將地貧初步分為α地貧或β地貧，為臨床診斷和進(jìn)一步的基因確診、遺傳咨詢(xún)提供了基礎(chǔ)［6］。本研究中對(duì)初篩的536例病例組進(jìn)行Hb電泳檢測(cè)，篩查出512 例結(jié)果異常者，占初篩病例組的95.52%。余24 例用常規(guī)電泳方法無(wú)法測(cè)出，是因其結(jié)構(gòu)的異常不引起電荷變化（中性氨基酸取代中性氨基酸）的潛隱性異常Hb。

目前，國(guó)內(nèi)外用于明確診斷地貧的是PCR 技術(shù)，結(jié)合其他分子生物學(xué)手段來(lái)檢測(cè)α、β地貧的基因［7-8］。本研究中α和β地貧表型陽(yáng)性的標(biāo)本，經(jīng)基因分析：確診為α、β地貧共計(jì)506例（68例＋438例），占總受檢人數(shù)的19.09%，檢出率與文獻(xiàn)報(bào)道相符［1-2］。顯示出本地區(qū)常見(jiàn)的α地貧基因型為東南亞缺失型雜合子（-SEA／αα）、右缺失型雜合子（-α3.7／αα）、左缺失型雜合子（-α4.2／αα）、Hb Constant Spring（-αCS／αα）點(diǎn)突變等，β地貧基因型為CD41-42雜合子、CD17 雜合子、CD71-72雜合子、CD28雜合子等。α地貧檢出率偏低，除靜止型α地貧血液學(xué)指標(biāo)多在正常范圍內(nèi)，在實(shí)驗(yàn)室中還沒(méi)有理想的篩查靜止型α地海貧血的方法（除外基因檢測(cè)），造成較高的漏診。目前，已發(fā)現(xiàn)的α地貧基因突變型有81種，在中國(guó)人中發(fā)現(xiàn)了7種缺失（3種α＋地中海貧血和4種α0地中海貧血），本實(shí)驗(yàn)室只能檢測(cè)3種缺失（-α3.7、-α4.2、-SEA）及3種點(diǎn)突變（CS、QS、WS），β地中海貧血基因突變類(lèi)型有186種，在我國(guó)已報(bào)道27種點(diǎn)突變［9-12］。本實(shí)驗(yàn)室能檢測(cè)常見(jiàn)的17種點(diǎn)突變，所以存在著缺失及突變的漏檢。

廣西是地貧高發(fā)區(qū)，在人群中進(jìn)行地貧檢查、篩查顯得尤為重要。雖然地貧基因攜帶者、靜止型和輕型患者無(wú)明顯自覺(jué)癥狀，對(duì)健康也未能造成大的危害，但中、重型地貧是嚴(yán)重的致死、致殘性血紅蛋白病，目前沒(méi)有很好的治療手段和根治辦法，只能依靠規(guī)律輸血和除鐵維持生命。在育齡期婦女中開(kāi)展婚前、孕前篩查，指導(dǎo)合理的聯(lián)姻、妊娠，并通過(guò)人群干預(yù)來(lái)預(yù)防常見(jiàn)的人類(lèi)單基因致死、致殘性遺傳病，對(duì)促進(jìn)優(yōu)生優(yōu)育、提高人口素質(zhì)有重要意義。

［1］ 鄧俊耀，龍安翼，李惠.桂林市城鎮(zhèn)育齡人群地中海貧血現(xiàn)況調(diào)查［J］.中華流行病學(xué)雜志，2009，30（2）：156-158.

［2］ 呂福通，謝丹尼，陳一君，等.廣西區(qū)計(jì)劃生育服務(wù)網(wǎng)絡(luò)開(kāi)展地中海貧血干預(yù)經(jīng)驗(yàn)［J］.中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志，2009，4（4）：241-242.

［3］ 叢玉隆，金大鳴，王鴻利，等.中國(guó)人群成人靜脈血細(xì)胞分析參考范圍調(diào)查［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志，2003，83（14）：1201-1205.

［4］ 張之南，沈悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)［M］.3版.北京：科學(xué)出版社，2007：29-35.

［5］ 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜，等.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.3版，南京：東南大學(xué)出版社，2006：392-393.

［6］ 張玲，胡朝暉，吳鵬，等.4種方法篩查血紅蛋白病的探討［J］.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2009，4（1）：15-17.

［7］ 陳萍.α地中海貧血分子基礎(chǔ)與臨床研究現(xiàn)狀［J］.廣西醫(yī)學(xué)，2004，26（5）：619-621.

［8］ 李林海.β-地中海貧血的分子雜交診斷技術(shù)及其進(jìn)展［J］.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2001，9（5）：113.

［9］ 莫宗平，喻長(zhǎng)順，胡朝暉，等.α-地中海貧血的基因診斷方法［J］.中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2012，6（3）：682-684.

［10］ Bank A.Regulation of human fetal hemoglobin：new players，new conplexities［J］.Blood，2006，107（2）：435-443.

［11］ 張俊武，龍桂芳.血紅蛋白與血紅蛋白病［M］.南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2003：204-234.

［12］ 李巍，何蘊(yùn)韶.遺傳咨詢(xún)［M］.鄭州：鄭州大學(xué)出版社，2003：405-419.