血硫化氫與腸缺血-再灌注損傷大鼠凝血功能相關(guān)性研究

斯偉宏 盧根林 黃驚鴻 吳愛(ài)兵

1浙江省義烏市中心醫(yī)院普通外一科 義烏 322000 2廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤中心

硫化氫（H2S）是繼NO和CO之后的第三氣體信號(hào)分子，由胱硫醚-β-合成酶（CBS）、胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）催化L-半胱氨酸代謝產(chǎn)生[1-3]。H2S能保護(hù)腸缺血-再灌注損傷大鼠小腸黏膜屏障、肝臟功能[4-5]。本研究探討硫化氫對(duì)腸缺血-再灌注損傷大鼠凝血功能的影響，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材 料 雄性Wistar大鼠（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供，清潔級(jí)，動(dòng)物合格證號(hào)：201001018）。敏感硫電極和PXS-270離子計(jì)購(gòu)于上海雷磁儀器廠。Sysmex CA-1500購(gòu)于Sysmex CA-1500公司。硫氫化鈉（NaHS）購(gòu)于上海第一生化藥業(yè)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型及分組 雄性Wistar大鼠24只，6周齡，體質(zhì)量 190～230g，平均（210±15）g，隨機(jī)分為 S（假手術(shù)）組、I（缺血-再灌注）組，N（缺血-再灌注+NaHS）組，每組8只。S組僅行剖腹及游離腸系膜上動(dòng)脈（SMA）術(shù)，I和N組剖腹、游離及鉗夾SMA 60min和再灌注120min，建立大鼠腸缺血-再灌注損傷模型。N組在灌注前10min時(shí)靜脈注射N(xiāo)aHS 100μmol/kg后按1mg/（kg·h）輸注直到再灌注2h，S和I組靜脈注射相同體積的生理鹽水，作用時(shí)間和持續(xù)時(shí)間均同N組[4-5]。處死大鼠，取血離心分離血漿。

1.2.2 血漿H2S濃度與凝血指標(biāo)檢測(cè) 敏感硫電極法[6]測(cè)定血漿H2S濃度，Sysmex CA-1500凝血分析儀測(cè)定凝血指標(biāo)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s） 表示，多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，多樣本均數(shù)間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，相關(guān)性采用直線相關(guān)分析。

2 結(jié)果

與 S 組比較，I組 APTT、PT、TT、D-二聚體增加，F(xiàn)IB、H2S減低（P＜0.01），表現(xiàn)為凝血功能障礙。N 組PT、APTT、TT、D-二聚體低于 I組、高于 S 組（P＜0.01），F(xiàn)IB、H2S 低于 S組、高于 I組（P＜0.01），凝血功能障礙得以改善，見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠凝血指標(biāo)、H2S濃度比較（x±s）

相關(guān)性分析顯示，H2S與FIB呈正相關(guān)（r=0.758，P＜0.01），與 PT、APTT、TT、D-二聚體呈負(fù)相關(guān)（r=-0.715、-0.721、-0.689、-0.748，P＜0.01）。

3 討 論

腸缺血-再灌注損傷時(shí)，由于氧自由基、炎癥介質(zhì)（包括細(xì)胞因子）大量釋放，內(nèi)源性H2S產(chǎn)生減少等多種因素作用，大鼠小腸黏膜屏障功能受損，表現(xiàn)為小腸黏膜通透性增加、腸源性細(xì)菌移位和內(nèi)毒素血癥等。

凝血過(guò)程包括凝血酶原酶復(fù)合物（也稱(chēng)為凝血酶原激活復(fù)合物）的形成、凝血酶原的激活和纖維蛋白的生成三個(gè)基本步驟。PT主要反映外源性凝血系統(tǒng)功能，APTT是內(nèi)源性凝血因子缺乏最可靠的篩選指標(biāo)，纖維蛋白原一種由肝臟合成的具有凝血功能的蛋白質(zhì)，纖維蛋白是在凝血過(guò)程中，凝血酶切除血纖蛋白原中的血纖肽A和B而生成的單體蛋白質(zhì)。D-二聚體是纖維蛋白單體經(jīng)活化因子X(jué)III交聯(lián)后，再經(jīng)纖溶酶水解所產(chǎn)生的一種特異性降解產(chǎn)物，是一個(gè)特異性的纖溶過(guò)程標(biāo)記物，來(lái)源于纖溶酶溶解的交聯(lián)纖維蛋白凝塊。本研究發(fā)現(xiàn)，大鼠缺血-再灌注后，APTT、PT、TT、D-二聚體值均增加，F(xiàn)IB 減低，表現(xiàn)為凝血功能障礙。而給予NaHS后PT、APTT、TT、D-二聚體等均降低，F(xiàn)IB增加，與缺血-再灌注組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），即凝血功能障礙得以改善。H2S 與 FIB 呈正相關(guān)，與 PT、APTT、TT、D-二聚體呈負(fù)相關(guān)。提示H2S與腸缺血-再灌注損傷大鼠凝血功能改善相關(guān)。但吳之浩等[7]研究表明，內(nèi)源性的H2S上調(diào)對(duì)急性出血壞死性胰腺炎患者TNF-α表達(dá)起促炎作用,并上調(diào)PAR-1、TF表達(dá)，致凝血功能障礙。提示硫化氫對(duì)凝血功能的影響可能有疾病的特異性，其具體作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

［1］Kang K，Zhao MY，Jiang HC，et al.Role of Hydrogen Sulfide in Hepatic Ischemia-Reperfusion-Induced Injury In Rats［J］.Liver Transpl，2009，15（10）：1306-1314.

［2］ Sodha NR，Clements RT，F(xiàn)eng J，et al.The effects of therapeutic sulfide on myocardial apoptos-is in response to ischemia-reperfusion injury［J］.Eur JCardiothorac Surg，2008，33（5）：906-913.

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［4］盧根林，閆興軍，鄧勇，等.硫化氫在腸缺血-再灌注損傷大鼠肝臟功能障礙中的作用［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2010，27（7）：907-910.

［5］閆興軍，盧根林，鄧勇，等.硫化氫在腸缺血-再灌注損傷大鼠腸粘膜屏障功能障礙中的作用［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2010，27（1）：71-74.

［6］耿彬，杜軍保，唐朝樞.敏感硫電極法在測(cè)定心血管組織細(xì)胞及血漿胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氫的應(yīng)用［J］.北京大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2005，37（5）：545-548.

［7］吳之浩，盧根林，鄧勇.硫化氫對(duì)急性出血壞死性胰腺炎患者凝血功能的影響［J］.中國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)藥，2012，19（15）：52-53.