血必凈輔助治療對于重度AECOPD患者血中TNF－α水平的影響和對HIF－1α活化的調節作用＊

付志彬，鐘 山，朱 濤

（1．成都軍區機關醫院急診科，四川 成都610000；2．四川大學華西醫院呼吸病學研究室／呼吸內科，四川 成都610041）

目前慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）在人類所有疾病中發病率位列第4位，并具有病程長、發病率高和致殘致死率高等特點［1～3］。導致COPD發生與發展的根本原因和基本病因是吸煙等有害煙霧和顆粒導致的以慢性持續性氣道炎癥為中心的全身系統性炎癥反應。血必凈主要成分為紅花、赤芍、川芎、丹參和當歸的提取物，紅花黃色素A是其主要成分［4］。有研究發現，血必凈具有較強的炎癥抑制作用，已廣泛應用于膿毒血癥、急性呼吸窘迫綜合癥、膿毒性休克和支氣管哮喘等疾病的治療。本研究目的是進一步探討血必凈在慢性阻塞性肺疾病急性發作期（AECOPD）治療中的價值和其潛在的藥理機制，擬為進一步臨床研究奠定基礎。

1 資料與方法

1．1 一般資料 按照2010版慢性阻塞性肺疾病全球倡議（global initiative for chronic obstructive lung disease，GOLD）標準［1］，將我院2012年5月～2013年12月收治的80例D級AECOPD患者，隨機分為干預組（血必凈＋常規治療組）和對照組（常規治療組）各40例。干預組中男19例，女21例，年齡70．2～86．2歲；對照組中男22例，女18例，年齡69．4～86．3歲。COPD病史皆大于15年。兩組患者年齡、病程和病情等差異無統計學意義（P＞0．05）。

1．2 治療方法 兩組患者均給予抗感染、抗炎、吸氧及平喘藥等常規治療。干預組在常規治療的基礎上再使用血必凈注射液（國藥準字Z20040033，天津紅日藥業股份有限公司）50ml加0．9%生理鹽水100ml靜脈滴注，1h／次，一天2次。

1．3 觀察指標及檢測方法 ①血氣分析：包括pH、PO2和PCO2。②時間肺活量：在吸入沙丁胺醇200μg 15min后測定FEV1占預計值%。③血中低氧誘導因子－1α（TNF－α）水平：取患者治療0天與10天時清晨空腹靜脈血，按ELISA試劑盒（R＆D Systems，USA）說明書方法檢測血中TNF－α水平。④血細胞中 HIF－1α活性：患者治療0天和10天時用western blot法檢測血細胞中HIF－1α蛋白的表達水平。按試劑盒操作要求，先提取血液中總蛋白，并進行聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS－PAGE），然后轉移至硝酸纖維素濾膜上，用脫脂奶粉封閉1小時，分別加入兔抗人單克隆抗體anti－HIF－1α（1∶600）和anti－β－actin（1∶1200），4℃孵育過夜，洗膜后加入相應的辣根過氧化物酶標記的二抗（1∶1000），用ECL進行顯色，凝膠成像分析系統進行掃描，用 HIF－1α／β－actin條帶灰度比值作為HIF－1α蛋白的相對表達量。

1．4 統計學分析 應用SPSS 11．0軟件進行分析，有效率比較用t檢驗，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 血氣分析和肺功能測定 治療10天后兩組患者的動脈血氣（ABG）參數（pH、PO2和PCO2），以及FEV1占預計值%均有明顯改善，差異有統計學意義（均P＜0．05）；且干預組患者 ABG參數（pH、PO2和PCO2），以及FEV1占預計值%改善水平較對照組更加明顯，差異均有統計學意義（均P＜0．05），見表1。

2．2 血漿中TNF－α水平測定 兩組患者治療10天后血中TNF－α水平較治療前均有顯著降低，且干預組患者血中TNF－α水平較對照組下降更加明顯，差異均有統計學意義（均P＜0．05），見表2。

表1 血氣分析和FEV1 比較（±s，n＝40）Table 1 Arterial gas analysis（ABG）and lung function analysis

表1 血氣分析和FEV1 比較（±s，n＝40）Table 1 Arterial gas analysis（ABG）and lung function analysis

注：與治療前比較，①P＜0．05；與對照組比較，②P＜0．05

組別 pH PO2（mmHg） PCO2（mmHg）FEV1占預計值%對照組7．11±2．2 42．2±11．4 86．7±8．5 26．4±10．5 7．25±1．8① 61．3±9．2① 49．3±5．7① 53．2±16．7①干預組 7．12±1．9 43．9±12．5 85．6±10．9 25．1±11．6 7．35±1．3①② 66．5±8．1①② 42．5±3．6①② 64．9±9．8①②

2．3 血細胞HIF－1α蛋白表達水平 兩組患者治療10天后血細胞中HIF－1α蛋白表達水平較治療前均有顯著降低，且干預組患者血細胞HIF－1α蛋白表達水較對照組下降更明顯，差異均有統計學意義（均P＜0．05），見表2、圖1。

表2 血漿TNF－α水平和HIF－1α蛋白表達水平變化（±s，n＝40）Table 2 The serum level of TNF－αand the protein expression of HIF－1α

表2 血漿TNF－α水平和HIF－1α蛋白表達水平變化（±s，n＝40）Table 2 The serum level of TNF－αand the protein expression of HIF－1α

注：與治療前比較，①P＜0．05；與對照組比較，②P＜0．05

分組 TNF－α（ng／ml） HIF－1α／β－actin 比值對照組2．67±0．58 0．92±0．08 1．89±0．31① 0．65±0．11①干預組 2．72±0．64 0．94±0．07 1．52±0．27①② 0．43±0．06①②

圖1 HIF－1α蛋白的表達western blot結果Figure 1 The Western blot results of HIF－1αin each group

3 討論

COPD是臨床最常見的呼吸系統疾病，也是導致人類死亡的4大疾病之一［1～3］。目前認為COPD的發生、發展是由于有害氣體和顆粒導致的慢性持續性以中小氣道為中心的全身性炎癥反應［4］。反復炎癥反應和組織修復致肺泡組織不可逆損傷是導致COPD通氣功能下降的基礎。目前發現COPD相關的氣道和全身炎癥反應與該病的臨床癥狀和肺功能下降等有顯著的相關性［1～3，4］。COPD的治療除控制戒煙和遠離污染環境等觸發因素外，大體可分為抗炎治療和舒張支氣管兩個方面，其中炎癥調節治療是COPD治療的核心。COPD急性發作期（AECOPD）是指在原有的維持治療基礎上患者臨床癥狀出現加重，包括咳嗽、咳痰、發熱和呼吸困難等癥狀的出現和或較前更加明顯。抑制炎癥反應是AECOPD治療的關鍵。

血必凈注射液的主要成分為紅花、赤芍、丹參、當歸和川芎5味中藥，紅花黃色素A、川芎嗪、丹參素、阿魏酸和芍藥苷是其主要的藥理成份［4］。基礎和臨床研究證實，血必凈可有效抑制多種致炎因子誘導的炎癥反應。改善重癥肺炎患者血中IL－6和IL－10水平和臨床指標，抑制支氣管哮喘患者的氣道炎癥水平，目前已廣泛地應用于膿毒血癥、ARDS、膿毒性休克和支氣管哮喘等炎癥性疾病的臨床治療［5～8］。本研究發現，對重度AECOPD患者給予積極地抗感染、抗炎、吸氧及平喘藥等10天治療后，患者臨床癥狀、ABG參數（pH、PO2和PCO2），以及FEV1占預計值%均有明顯改善（均P＜0．05）。進一步分析發現，在常規治療基礎上加用血必凈治療的患者ABG指標（pH、PO2和PCO2）和FEV1占預計值百分比較干預組改善更明顯（均P＜0．05），提示血必凈具有改善AECOPD患者臨床癥狀和肺功能的作用。

TNF－α 是 重 要 的 促 炎 介 質 （pro－inflammatory mediator），主要由巨噬細胞和淋巴細胞等炎癥細胞合成分泌［9］。TNF－α作為炎癥介質可通過與相應組織細胞表明的TNFR1和TNFR2兩種受體結合發揮多種生物學效應，包括直接誘導組織細胞損傷、激活細胞凋亡信號通路、誘導自噬的發生和刺激其他炎癥細胞的活化和增殖等。臨床研究也證實，血和氣道分泌物中TNF－α濃度與COPD患者氣道和全身系統性炎癥反應的嚴重程度有顯著的相關性，可用于COPD的病情評價和藥物反應性評價［2，3，10］。我們的研究也發現，患者在給予積極治療10天后血中TNF－α水平較治療前有顯著降低，同時干預組患者血中TNF－α水平較對照組下降更加明顯。表明血必凈可有效抑制AECOPD患者的炎癥反應水平。

HIF－1α是重要的核轉錄因子，在炎癥和缺氧狀態下對多種組織細胞的基因表達均有廣泛的調節作用。有研究證實，HIF－1α的活化和表達與COPD炎癥程度及COPD相關的肺動脈高壓的發生發展密切相關。我們用western blot法對HIF－1α蛋白表達進行檢測分析后發現，血必凈可有效抑制AECOPD患者血細胞中HIF－1α表達水平，且有可能是通過下調HIF－1α表達水平進而改善AECOPD的炎癥反應。同時在臨床研究過程中未發現與血必凈治療相關的嚴重不良反應。

4 結論

我們的研究結果表明，血必凈注射液可能是通過下調HIF－1α的表達抑制AECOPD相關的炎癥反應，改善患者的臨床癥狀和肺功能，對AECOPD具有輔助治療價值，可在臨床推廣應用。

［1］ GOLD Executive Committee．Global strategy for the diagnosis，management，and prevention of chronic obstructive pulmonary disease （Revised 2011）［EB／OL］．［2012－01－11］．http：／／www．goldcopd．com．

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