牛病毒性腹瀉/黏膜病的診斷流行病學調查及防控

王淑娟，王 華，宋曉暉，孫成友，徐天剛，劉春菊，張永強，趙永剛，劉海生，王志亮

（1.中國動物衛生與流行病學中心，山東 青島 266032；2.國家奶牛產業技術體系，北京 海淀 100093；3.中國動物疫病預防控制中心，北京 朝陽 100125；4.青島農業大學，山東 青島 266109）

牛病毒性腹瀉/黏膜病（BVD/MD）是由黃病毒科、瘟病毒屬的牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）引起的主要侵害牛、羊、鹿、牦牛等反芻動物及豬的一種重要傳染病。臨床上以發熱、腹瀉、黏膜糜爛、肺炎、蹄葉炎、流產或產畸型胎兒為主要特征。病毒引起的急性疾病稱為牛病毒性腹瀉，引起的慢性持續性感染稱為黏膜病。該病于1946年由Olafson[1]等在紐約首次發現。目前已在世界各國普遍存在，尤其養牛業發達的地區，廣泛存在于歐美等許多養牛發達國家，給世界各國的畜牧業造成了嚴重的經濟損失，每年死于此病感染的牛不少于500萬頭，由于其持續感染等造成的間接損失，也嚴重阻礙了畜牧業的發展。1980年以來，我國從西德、美國、加拿大、新西蘭等10多個國家引進奶牛和種牛，因處理不當造成陸續在20多個省市自治區檢出此病[2]。本文從牛病毒性腹瀉/黏膜病的診斷、流行病學調查、防制措施等幾方面進行了概述，希望能為該病的防控提供一些依據。

1 牛病毒性腹瀉/黏膜病的診斷

牛病毒性腹瀉/黏膜病根據臨床表現主要分為以下3種類型。黏膜病型是BVDV感染引起的一種最嚴重的臨床類型，發病率低，死亡率高。該病的潛伏期為7～9 d，主要特征為腹瀉、脫水、白細胞減少及出現臨床癥狀后幾天發生死亡。主要侵害犢牛和青年牛，發病突然，病牛體溫升高，當病程進一步發展時，鼻鏡干燥，表皮剝落，病后幾天鼻鏡、舌、齒齦、腭、口腔黏膜充血并有潰瘍；腹瀉持續數周，糞便呈黃色水樣，瓦灰色，惡臭，內含大量黏液和氣泡，惡臭，病牛多因脫水死亡；腹瀉型表現為間歇性腹瀉，進行性消瘦，可發生跛行、球節部皮膚發紅腫脹，腹瀉初呈水樣，后內含血液和黏液，并常見排出成片的腸黏膜；胎兒感染型表現為懷孕母牛感染后，發生流產、死胎、木乃伊或胎兒發生小腦發育不全、眼睛失明等先天性缺陷。如果病牛出現以上某種臨床癥狀，剖檢之后食道黏膜糜爛。鼻鏡、鼻孔、齒齦、上顎、舌面兩側及頰黏膜有糜爛及淺潰瘍，食道黏膜、胃黏膜、十二指腸黏膜等有出血條紋，空腸和回腸有點狀或斑狀出血，黏膜呈片狀脫落，全身淋巴結黑灰色，可以做出初步診斷，但確診需作病原鑒定和血清學檢測。

1.1 病原鑒定 可采取病畜的血液、骨髓、脾、淋巴結及呼吸道、眼、鼻分泌物等進行病毒分離，或通過電鏡檢查、核酸雜交、RT-PCR、基因芯片技術、免疫組化等方法進行病原鑒定。

1.2 血清學檢測 用于牛病毒性腹瀉／黏膜病診斷的血清學方法有病毒中和試驗、補體結合試驗、瓊脂擴散試驗、免疫熒光試驗、ELISA等。常用檢測方法有病毒中和試驗和ELISA，與病毒中和試驗相比，ELISA檢測方法極大的縮短了檢測時間，且具有敏感、簡便、易于標準化等優點，是進行血清流行病學調查的良好方法[3-4]。

2 流行病學調查

牛病毒性腹瀉／黏膜病的危害之一是由突然發病死亡、腹瀉、繼發感染、流產、早產或死胎等造成的直接經濟損失；危害之二是除導致動物疾病造成的直接損失外，對生物制品的污染造成的損失也不可輕視。因為生物制品常用到動物源的生物活性材料，如牛血清廣泛用于細胞培養，也是病毒性疫苗生產所使用的重要生物材料之一，細胞培養物中污染BVDV，會污染疫苗、干擾素等生物制品[5]；危害之三是持續性感染，懷孕牛感染BVDV時，如果不發生流產、死胎等，其胎兒出生后將呈持續性感染，對BVDV免疫耐受的犢牛體內無BVDV抗體，不易被檢出，但一直帶毒，并通過分泌物向體外排毒，成為同群牛和胎兒感染的重要傳染源。奶牛場一旦發生該病，將很難根除。鑒于此病的危害嚴重，且分布較廣，因此對我國該病的發生與流行情況進行調查十分必要。本研究對來自北京、天津、陜西、山西、山東、新疆、河南、河北等地的996份血清進行了BVDV抗體檢測，希望這些數據能讓奶牛場對該病引起足夠重視。

2.1 材料與方法

2.1.1 血清 被檢牛血清樣品996份，分別采自北京、天津、陜西、山西、山東、新疆、河南、河北等地的l1個奶牛場。

2.1.2 ELISA檢測試劑盒 牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測試劑盒（INGEZIMBVD）為西班牙Ingenasa公司產品

2.1.3 主要儀器 恒溫培養箱、不同量程微量移液器、酶標儀等。

2.1.4 檢測方法 所有的試劑盒組分在使用之前都必須恢復到室溫。然后嚴格按照西班牙Inge?nasa公司的牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測試劑盒的說明書進行操作。

2.1.5 結果判定 按試劑盒說明書所示進行結果判定。

2.2 結果 通過對來自北京、天津、陜西、山西、山東、新疆、河南、河北等地l1個奶牛場的996份血清樣品進行BVDV抗體檢測，共檢出陽性血清688份，檢出的群陽性率為100%，結果顯示，這些牛場中都不同程度的存在BVDV的感染，最高陽性率達95.2%，最低陽性率為28.8%，平均陽性率為69.1%，抗體陽性率50%以上的牛場占了72.7%。結果見表1。

3 討論

據報道[6]，當已感染的牛免疫機制受到抑制時，無論其體內是否存在病毒或抗體，都會向外界排毒，病牛康復后長期帶毒就成為長期的潛在傳染源。因此可以認為，在非免疫牛的血清中檢測出BVDV抗體，就可確認牛體中有BVDV的存在，并有排毒的可能性[7-8]。牛病毒性腹瀉/黏膜病在世界范圍內廣泛分布，尤其是養牛業發達國家，根據各國血清學的調查，牛群中有高度的感染率。本病常年均可發生，通常發生于冬末和春季。新疫區急性病例多，不論放牧牛或舍飼牛，大牛或小牛均可感染發病，發病率通常不高，約為5%，但病死率為90%～100%，發病牛以6-18個月齡居多；老疫區則急性病例很少，發病率和病死率很低，而隱性感染率在50%以上。我國從1980年首次報道也存在該病。楊得勝[9]等2006年對福建省9個地區大型牛場和散養戶牛進行血清學調查，總陽性率達92.5%，王文[5]等通過對采自新疆10個地區(牛群）的875份牛血清進行BVDV抗體檢測，結果顯示，這些地區牛群中都不同程度的存在BVDV的感染，最高陽性率達100%，最低陽性率為55%，平均陽性率為86.7%。調查結果表明，我國不同地區廣泛存在該病的發生。近年中國規模化奶牛和肉牛養殖業得到發展，牛病毒性腹瀉/黏膜病應該引起政府和科研工作者的足夠重視。BVDV的宿主不僅局限于牛羊等反芻動物，豬同樣也是BVDV的宿主，所以對該病的控制也是發展養豬業所面臨的問題。

表1 牛血清樣品分布及BVDV抗體檢測

4 防制措施

由于BVD廣泛流行，而且致病機理復雜，給該病的防控帶來很大困難，綜合國內外的成功經驗，可采用檢疫預防、淘汰持續性感染動物，進行疫苗接種、對癥治療、提高飼養管理水平等綜合防制措施。

4.1 檢疫 嚴禁從病區購進牛只。對進口牛應嚴格檢疫，學國內及省內調運種牛也要嚴格檢疫，防止疫牛引進，特別是防止引進持續性感染的種牛。國內在進行牛只調運或交易時，要加強檢疫，防止本病的擴大或蔓延。平時做好檢疫工作，一旦查出陽性牛立即處理。在有條件情況下，發現病牛撲殺、無害化處理是較理想的辦法。

4.2 免疫接種 目前國外已選育出弱毒株并制成疫苗，接種后免疫持續時間較長，但有接種反應，孕畜不宜使用。應用弱毒疫苗對斷奶前后數周內牛只進行預防接種。對受威脅較大的牛群應每隔3—5年接種1次，育成母牛和種公牛于配種前再接種1次，多數牛可獲得終生免疫。也有報道[10]，根據BVDV與豬瘟病毒的交叉免疫性原理，采用豬瘟兔化組織苗預防黏膜病安全有效，并不斷用于生產實踐。若應用滅活疫苗，可在配種前給牛免疫接種2次。

4.3 治療 本病目前尚無有效療法，只能在加強監護、飼養以增強牛機體抵抗力的基礎上，進行對癥治療。應用收斂劑和補液療法可縮短恢復期，減少損失。用抗生素和磺胺類藥物，可減少繼發性細菌感染。有文獻報道[11]，用2%漂白粉消毒圈舍，清潔場地；0.3%高錳酸鉀溶液清洗口腔和鼻黏膜，更換牛鼻繩；鼻黏膜、口腔及舌糜爛處涂擦碘甘油，3～4次/d，連用5 d；緊急免疫接種豬瘟脾淋苗20～30頭份/頭；肌肉注射黃芪多糖10～20mL，控制繼發感染；對癥狀嚴重者靜脈滴注葡萄糖生理鹽水、ATP、輔酶A、葡萄糖酸鈣、碳酸氫鈉、維生素C、維生素B、頭孢噻呋鈉等，另加清瘟敗毒散煎水灌服，3次／d，連用5 d。經采取以上措施后，發病牛場的病情得到控制，病牛體溫逐漸恢復正常。

4.4 日常管理 提高飼養管理水平，保證奶牛的健康，增強奶牛的體質和提高奶牛的抗病力。定期對飼養工具及其環境消毒。限制外來人員進入牛場，減少應激作用特別是斷奶及轉群時。發病牛群要做好隔離消毒工作，防止疫情擴散。

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