甘草等五味中藥對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的抗菌活性試驗(yàn)

王春華，王宏軍

（遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧 錦州 121001）

20世紀(jì)50年代至今越來越多的醫(yī)藥工作者發(fā)現(xiàn)了很多具有抗菌作用的中藥和其主要的抗菌成分，成為許多學(xué)者們研究的熱點(diǎn)。由于甘草、黃連、秦皮、黃柏、金銀花的提取物對(duì)豬鏈球菌均有一定的藥理活性[1]，故本試驗(yàn)對(duì)這5味中藥用微量肉湯稀釋法進(jìn)行MIC的測(cè)定，以得出不同的提取方法對(duì)豬鏈球菌II型的抑制效果。

1 材料與方法

材料

1.1.1 中藥 甘草、黃連、秦皮、黃柏、金銀花，購(gòu)自錦州大藥房。

1.1.2 菌種 豬鏈球菌Ⅱ型由遼寧醫(yī)學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)教研室動(dòng)物傳染病實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.3 試劑 葡萄糖營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，購(gòu)自金華東南化工儀器有限公司；瓊脂粉，購(gòu)自廣州市迪景微生物科技有限公司。

方法

1.2.1 培養(yǎng)基的制備 （1）葡萄糖營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：15 g營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基加入500 mL蒸餾水，121℃高壓滅菌15min，冷藏備用；（2）葡萄糖營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：15 g營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基加入500mL蒸餾水，121℃高壓滅菌15min。放入超凈臺(tái)，當(dāng)營(yíng)養(yǎng)瓊脂降到50℃～55℃左右時(shí)澆平板。待平板內(nèi)瓊脂凝固后，冷藏備用。

1.2.2 試驗(yàn)用藥液的制備 （1）醇提取： 先將甘草、黃連、秦皮、金銀花、黃柏粉碎，用電子天平分別準(zhǔn)確稱取10 g，放入燒杯內(nèi)，再加入70%的乙醇100mL，用超聲波提取3次，每次30min，然后將提取物加熱濃縮后放入恒溫干燥箱中干燥成藥膏，再用蒸餾水配成1g/mL的藥液，4℃冰箱保存?zhèn)溆肹2]；（2）水提取：將甘草、黃連、秦皮、金銀花、黃柏粉碎，用電子天平分別準(zhǔn)確稱取10 g，放入錐形瓶中，再加入適量的蒸餾水浸泡2～3 h，用超聲波作用30min，然后用水煎20min，每種藥煎2～3次后濃縮成藥膏，用蒸餾水稀釋到1 g/mL的藥液，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 MIC的測(cè)定 （1）試驗(yàn)用菌液的配制：取100μL豬鏈球菌Ⅱ型菌種接種在900μL營(yíng)養(yǎng)肉湯中，放在恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)18～24 h，得原菌液。取試管分別對(duì)原菌液用生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋并標(biāo)記，用移液槍從8號(hào)管中取20μL菌液注入平板上，并用L棒將其涂勻（重復(fù)做3個(gè)平板），培養(yǎng)18～24 h后查菌落數(shù)，得出原菌液的細(xì)菌濃度。再將原菌液或稀釋后的菌液用生理鹽水稀釋到所需濃度豬鏈球菌Ⅱ型106CFU/mL[3]，4℃冰箱保存?zhèn)溆茫唬?）MIC的測(cè)定：采用微管-平板法。每種藥物12支EP管，每個(gè)EP管內(nèi)先加入250μL的肉湯，再向第1支EP管里加入250μL的藥液，混勻后從中吸取250μL加入第2支EP試管，依次類推，直至第11支試管，棄去250μL。1～12號(hào)EP管內(nèi)加入20μL菌液，12號(hào)EP管不加做陰性對(duì)照。37℃培養(yǎng)18～24 h后，將其分別接種到平板上，37℃再培養(yǎng)18～24 h后，得試驗(yàn)藥物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析 運(yùn)用t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法對(duì)每種藥物的醇提物和水提物豬鏈球菌Ⅱ型的MIC進(jìn)行分析，找出對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型較敏感的提取物。

2 結(jié)果與分析

甘草、黃連、秦皮、金銀花、黃柏5種藥物的不同提取物同一濃度5次重復(fù)后對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型最小抑菌濃度（MIC）各不相同。

2.1 表1甘草水提物MIC為40.62±20.96mg/mL，甘草醇提物MIC為4.13±1.02mg/mL，表明甘草的醇提物比其水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型效果顯著(P＜0.05)。

2.2 表2黃連水提物MIC為87.50±34.23mg/mL，黃連醇提物MIC為28.12±6.99mg/mL，表明黃連的醇提物比水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型效果顯著(P＜0.05)。

表1 甘草不同提取物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC （mg/mL）

表2 黃連不同提取物對(duì)豬豬鏈球菌Ⅱ型的MIC （mg/mL）

表3 秦皮不同提取物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC （mg/mL）

2.3 表3秦皮水提物MIC為68.75±34.23mg/mL，秦皮醇提物MIC為175.0±68.47mg/mL，表明秦皮的水提物比其醇提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型效果顯著(P＜0.05)。

2.4 表4金銀花水提物MIC為125.00±76.54mg/mL，金銀花醇提物MIC為175.0±41.93mg/mL，表明金銀花的醇提物和水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型效果差異不顯著(P＞0.05)。

表4 金銀花不同提取物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC（mg/mL）

2.5 表5黃柏水提物MIC為62.50±38.27 mg/mL，黃柏醇提物MIC為68.75±34.23mg/mL，表明黃柏的醇提物和水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型效果差異不顯著(P＞0.05)。

表5 黃柏不同提取物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC （mg/mL）

3 討論

此試驗(yàn)采用了水提取和醇提取兩種方法藥物，從試驗(yàn)結(jié)果得出不同的提取溶媒對(duì)藥物的抑菌活性有一定的影響，由表1至表5可看出不同的藥物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC有一定的差別，同一種藥物不同的提取方法對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC也不盡相同。從表1可看出，甘草醇提物的效果最理想為4.13mg/mL，而水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC為40.63mg/mL，表明甘草的醇提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的體外抑菌效果比其水提物顯著(P＜0.01或P＜0.05)。黃連醇提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC為28.13mg/mL，顯著低于水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC，為87.50mg/mL(P＜0.01或P＜0.05)。秦皮水提物MIC為68.75mg/mL，秦皮醇提物MIC為175.0mg/mL，表明秦皮的水提物比其醇提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型效果顯著(P＜0.05)。黃柏、金銀花的不同提取物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的抑制作用差異性不顯著(P＞0.05)。

4 結(jié)論

4.1 甘草水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的抑制作用明顯。對(duì)本研究的結(jié)果進(jìn)行歸納總結(jié)，得出了甘草的水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC為40.63±20.96 mg/mL，黃連水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC為87.50±34.23 mg/mL，秦皮水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC為68.75±34.23mg/mL，金銀花水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC為125.0±76.54mg/mL，黃柏水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC為62.50±38.27mg/mL，說明甘草水提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的抑制作用明顯。

4.2 甘草醇提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的抑制作用明顯。對(duì)本研究結(jié)果進(jìn)行歸納分析，得出甘草的醇提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC為4.13±1.02mg/mL，黃連醇提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC為28.13±6.99mg/mL，秦皮醇提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC為175.0±68.47mg/mL，金銀花醇提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC為175.0±41.93 mg/mL，黃柏醇提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的MIC為68.75±34.23mg/mL，說明甘草醇提物對(duì)豬鏈球菌Ⅱ型的抑制作用明顯。

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