Sema3F及其受體在子宮內膜異位癥發生發展機制中的初步研究

莊翡翠

廣東省汕頭市潮南區人民醫院婦產科,廣東汕頭 515141

臨床上，子宮內膜異位癥是導致慢性盆腔痛和不孕的重要病因之一，目前其發病機制雖尚未明確，但眾多研究傾向于認為異位子宮內膜細胞的生物學行為（如細胞的生長、增殖、粘附、遷移等）與腫瘤細胞相似[1]。而軸突導向分子（Sema 3F）及其受體（NRP2、Plexin A1）可影響腫瘤細胞的上述生物學行為，由此推斷，Sema 3F 及其受體在子宮內膜異位癥中也可能通過一系列信號轉導通路影響異位內膜細胞的生物學行為，從而參與了內異癥的發生發展[2]。本文以我院收治的子宮內膜異位癥患者為研究對象，探討Sema 3F 及其受體在子宮內膜異位癥發生、發展機制中的作用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年1月—2013年6月期間在我院行腹腔鏡治療的20例腹膜子宮內膜異位癥患者、20例深部浸潤型子宮內膜異位癥患者及20例卵巢巧克力囊腫患者作為實驗組，所有患者均為女性，年齡32～65歲，平均年齡（46.5±5.5）歲。

另選擇于我院行宮腹腔鏡聯合治療的20例非子宮內膜異位癥（如不孕或子宮肌瘤）的患者作為對照組，所有患者均為女性，年齡33～68歲，平均年齡（47.2±4.3）歲。2組患者均經病理檢查證實，均簽署倫理學知情同意書。同時，2組患者在性別、年齡比較上差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑和儀器Sema 3F 單抗（上海信然實業有限公司生產），Neuropilin 2 單抗（上海研晶生物科技有限公司生產），Plexin A1單抗（上海信然實業有限公司生產），PBC 緩沖液（北京西門子醫療診斷設備有限公司生產），DAB 顯色劑（上海科興商貿有限公司生產），蘇木素（天津市賽瑞達生物工程有限公司生產）。

1.2.2 原位PCR 免疫組織化學實驗 首先，行實驗組和對照組組織切片，大小約為5 μm，室溫下切片脫蠟水化，PBS 沖洗。微波進行抗原修復程序（高能量3 min，低能量7 min，浸潤在0.01M 的檸檬酸鹽緩沖液中），用去離子水洗滌2 次后用TBS（Tris buffered saline）/Tween 漂洗5 min。然后，滴加一抗，60 min，PBS 洗；滴加二抗，10 min，PBS 洗；滴加鏈霉菌抗生物素蛋白―過氧化酶溶液，10 min，PBS洗。最后，滴加DAB 顯色液，5 min，水洗；蘇木素復染，3 min，水洗；中性樹膠封片。用已知上述3 種抗原的陽性片作為陽性對照，用PBS 代替一抗作為陰性對照[3]。

1.2.3 原位PCR 將組織細胞固定于預先用四氟乙烯包被的玻片上，用多聚甲醛處理，再滅活除去細胞內源性過氧化物酶；用60 μg/mL 的蛋白酶K 處理組織細胞片；在組織細胞片上，加PCR反應液，進行PCR 循環擴增，標記的寡核苷酸探針進行原位雜交。待內源性DNA 和RNA 經過核酶充分消化后，行原位PCR 擴增，擴增產物經原位核酸雜交，以雜交信號指示待測抗原。

1.2.4 免疫組織化學檢測結果判斷 由2 個病理學專家分別對各個標本的染色結果進行盲法評定。每個標本隨意選取觀察和計數3 張切片，每張切片隨意選取5 個視野，采用半定量方法，將陽性細胞百分數和細胞染色強度分為4 級并分別記0～3 分：無陽性細胞為0 分，陽性細胞＜10%為1 分，10%～50%為2 分，>50%為3分；無顯色為0 分，淺黃色為1 分，桔黃色為2 分，棕黃色為3 分。將兩項計分相加后除以2 得出最后評分，將0 分定為陰性（-），0.5或1 分為弱陽性（+），1.5 或2 分為陽性（++），2.5 或3 分為強陽性（+++）[4]。

1.2.5 統計學方法 應用SPSS for Windows 11.0 統計軟件包。采用χ2檢驗分析不同組之間蛋白表達強度的關系；Kruskal-Wallis 和Mann-Whitney 檢驗分析各組之間的基因表達水平；Spearman 檢驗分析各個蛋白之間的關系。以P＜0.05 視為差異有統計學差異。

2 結果

2.1 實驗組和對照組患者組織的Sema 3F 蛋白表達

見表1。

從上表可以看出，實驗組患者組織Sema 3F 蛋白陽性表達率為15%，對照組為90%，實驗組患者組織Sema 3F 蛋白陽性表達率明顯低于對照組（P＜0.05）。同時，實驗組3 亞組中，患者組織的Sema 3F 蛋白陽性表達率排列順序為：卵巢巧克力囊腫＜浸潤型內異癥＜腹膜內異癥。提示：隨著子宮內異癥病情的加重，Sema 3F的陽性表達率逐漸降低。

表1 實驗組和對照組患者組織的Sema 3F 蛋白表達水平對比分析[n（%）]

表2 實驗組和對照組患者組織的Sema 3F 受體NRP2 蛋白表達水平對比分析[n（%）]

表3 實驗組和對照組患者組織的Sema 3F 受體NRP2 蛋白表達水平對比分析[n（%）]

2.2 實驗組和對照組患者組織的Sema 3F 受體NRP2 蛋白表達

見表2。

從上表可以看出，實驗組患者組織NRP2 蛋白陽性表達率為55%，對照組為5%，實驗組患者組織NRP2 蛋白陽性表達率明顯高于對照組（P＜0.05）。同時，實驗組3 亞組中，患者組織的NRP2蛋白陽性表達率排列順序為：卵巢巧克力囊腫>浸潤型內異癥>腹膜內異癥。提示：隨著子宮內異癥病情的加強，NRP2 的陽性表達率逐漸升高。

2.3 實驗組和對照組患者組織的Sema 3F 受體Plexin A1 蛋白表達

見表3。

從上表可以看出，實驗組患者組織Plexin A1 蛋白陽性表達率為53.33%，對照組為0，實驗組患者組織Plexin A1 蛋白陽性表達率明顯高于對照組（P＜0.05）。同時，實驗組3 亞組中，患者組織的Plexin A1 蛋白陽性表達率排列順序為：卵巢巧克力囊腫>浸潤型內異癥>腹膜內異癥。提示：隨著子宮內異癥病情的加重，Plexin 陽性表達率逐漸升高。

3 討論

子宮內膜異位癥主要指具有生長功能的子宮內膜組織生長在子宮腔被覆黏膜以外的身體其他部位的癥狀，其發病率約為1%～15%，30～40歲的婦女為該病的高危人群[5]。Sema3F 作為的潛在的腫瘤抑制因子，通過對Sema 3F 及其受體在子宮內膜異位癥發生發展機制中的研究明確Sema 3F 及其受體與子宮內膜異位癥的關系，可進一步揭示子宮內膜異位癥的發生發展機制，為臨床尋找新的治療靶點提供重要依據[6]。本研究中，通過對實驗組和對照組對象組織的Sema 3F 及其受體NRP2、PlexinA1 的表達水平的檢測，結果顯示實驗組患者組織Sema 3F 蛋白陽性表達率明顯低于對照組，且隨著子宮內異癥病情的進展，Sema 3F 表達水平逐漸降低。楊景等[3]等指出Sema 3F 蛋白表達在腫瘤的發生、發展及預后中發揮重要的作用，通過調節瘤細胞及內皮細胞的增殖、凋亡、黏附、遷移來影響腫瘤的生長與脈管生成。王春紅等[4]采用免疫組織化學檢測34例異位癥患者在位內膜、異位內膜(內異癥組)及34例正常內膜(對照組)組織中Sema 3F 及其受蛋白的定位及表達。結果強調Sema 3F 低表達或表達缺失可能是子宮內異癥發生的機制之一。與本研究結論相一致。

同時，實驗組患者組織NRP2、Plexin A1 蛋白陽性表達率明顯高于對照組，且隨著子宮內異癥病情的進展，NRP2、Plexin A1 表達水平逐漸升高。仝進毅等[6]指出NRP2、Plexin A1 的表達通過增強淋巴管內皮細胞增殖、遷移、趨化和小管形成的能力可顯著地促進子宮內異癥生成。因此，Sema3F 作為的潛在的腫瘤抑制因子，其在子宮內膜異位癥的發生、發展中可通過受體NRP2、Plexin A1抑制子宮內膜異位癥的發生及病情發展。

[1]王冰冰,孔紅霞,陳雁南,等.SEMA3A 和NRP-1 在宮頸癌發生發展中的作用[J].中國婦幼保健，2013，9(5)：172-173.

[2]葉春福,臧傳蘭,魏艾,等.SEMA3B 在胃癌中的表達和臨床意義[J].中國實驗診斷學，2013，7(1)：228-230.

[3]楊景,吳峰,卞修武,等.SEMA3F 在腫瘤中的作用及其機制研究進展[J].臨床與實驗病理學雜志，2012，12(12)：335-337.

[4]王春紅,魏靜波,曲銀娥,等.血管內皮生長因子及其受體在子宮內膜異位癥中的表達和意義[J].中國免疫學雜志，2013，5(6)：221-223.

[5]劉威,高文霞.子宮內膜異位癥患者血清VEGF 及其受體的變化研究[J].中國藥物經濟學，2013，8(7)：223-225.

[6]仝進毅,張信美,林俊.神經生長因子及其受體與子宮內膜異位癥疼痛機制[J].國際生殖健康/計劃生育雜志，2010，7(1)：302-304.