微波法萃取田基黃中總黃酮

郝志云，楊新周，林惠昆，羅 雯

（1.德宏師范高等專科學校，理工系；云南 德宏 678400；

2.云南民族大學化學與生物技術學院；云南 昆明 650031）

微波法萃取田基黃中總黃酮

郝志云1，楊新周1，林惠昆1，羅 雯2

（1.德宏師范高等專科學校，理工系；云南 德宏 678400；

2.云南民族大學化學與生物技術學院；云南 昆明 650031）

以田基黃為原料，對微波法提取田基黃中總黃酮的工藝進行了研究，確定了最優工藝參數：微波提取時間5 min，提取次數1，提取溫度50℃，提取溶劑為60%乙醇，料液比為1∶35／（g／mL）。最佳條件下，田基黃中的總黃酮提取率為14.24%。

微波萃取法；黃酮；田基黃

目前國內外提取中草藥黃酮類物質的方法已有許多報道，主要有索氏提取法［1］、超聲波提取法［2］、回流法［3］、微波法［4］等。其中微波法節省溶劑、加熱時間短、快速、高效。中草藥中黃酮類化合物有著很多的藥理學作用［5］，本文以微波提取法提取田基黃中總黃酮，并測定其含量，為田基黃藥材質量控制和進一步研究提供參考。

1 材料與儀器

田基黃（采購于騰沖）；蘆丁標準品（中國藥品生物制品檢定所）；無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉，均為分析純；實驗用水為超純水。

WFZ UV－2000型紫外分光光度計（上海尤尼柯儀器有限公司）；EXCEL微波快速消解儀（上海屹堯儀器科技發展有限公司）；WL－200高速中藥粉碎機（瑞安市威力制藥機械廠）；EPED－20TH實驗超純水器（南京易普易達科技有限公司）。

1.2 樣品預處理

樣品用自來水洗凈，蒸餾水洗2～3次，再用超純水洗凈，置于烘箱中60～65℃烘干，取出后粉碎，過100目（0.150 mm）篩，將篩好的粉末置于密封袋中備用。

2 試驗方法

2.1 總黃酮的測定方法

采用NaNO2－Al（NO3）3－NaOH法測定總黃酮。取適量的樣品液于25 mL的容量瓶中，加30%的乙醇10.00 mL及5%的NaNO2溶液1.00 mL搖勻，靜置6 min，加10%的Al（NO3）3溶液1.00 mL搖勻，靜置6 min，加1 mol／L的NaOH溶液10.00 mL搖勻，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min，以試劑為空白，于最大吸收波長處進行測定［6］。

2.2 標準曲線的繪制

2.2.1 標準液的制備

準確稱取120℃干燥恒重的蘆丁0.05 g（精確至0.0001 g）用60%微熱乙醇定容至50 mL搖勻，得質量濃度為1.00 mg／mL的標準液。

2.2.2 最大吸收波長的確定

準確取1.00 mL蘆丁標準液，用“2.1”的方法測定其在400～600 nm波長范圍內的吸光度，得蘆丁儲備液在500 nm處有最大吸收，即確定最大吸收波長為500 nm。以下試驗均在500 nm波長處進行。

2.2.3 蘆丁標準曲線的繪制

分別準確取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40、1.60 mL蘆丁標準儲備液于9個25 mL的容量瓶中（質量濃度分別為0、8、16、24、32、48、56、64 μg／mL），用“2.1”的方法于500 nm波長處測定吸光度。以蘆丁質量濃度（μg／mL）為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。曲線方程為A＝0.012 5C＋0.003 2（式中：A為吸光度；C為蘆丁標準液的質量濃度（μg／mL）），相關系數r＝0.999 9。

2.3 總黃酮含量的測定

準確稱取0.200 0 g田基黃樣品于萃取罐中，加入適量的乙醇后置于微波消解儀中按預定的條件萃取，萃取結束用0.45 μm濾膜過濾，定容至50 mL，得樣品液。準確移取2.00 mL樣品液于25 mL的容量瓶中，用“2.1”的方法測定其吸光度。根據線性回歸方程計算可得提取液總黃酮質量濃度（μg／mL），然后按下式計算得總黃酮提取率（%）。

總黃酮提取率／%＝（C×稀釋倍數×V／W）×100%

C為根據測得的吸光度值帶入線性回歸方程所得的提取液總黃酮質量濃度，μg／mL；V為抽濾樣品后的定容體積，mL；W為稱取樣品的質量，g。

3 結果與討論

3.1 微波提取次數對總黃酮提取率的影響

稱取0.2 g田基黃樣品于萃取罐中，設定微波提取溫度為50℃，乙醇體積分數30%，微波萃取7 min，料液比1∶30，分別提取1、2、3次，測定黃酮的提取率，實驗結果如表1。

表1 微波提取次數對總黃酮提取率的影響Table 1 Influence of microwave extraction times on extraction rate of flavonoids

從表1看出，單獨提取1次的提取率為11.07%，連續提取2次的提取率為13.27%，連續提取3次的提取率為13.87%。連續提取對總黃酮提取率的提高影響不大。因此以下試驗均提取1次。

3.2 料液比對田基黃總黃酮提取率的影響

稱取0.2 g田基黃樣品于萃取罐中，加入一定體積的30%乙醇溶液，分別使料液比為1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40 g／mL，設定微波提取溫度為50℃，微波萃取7 min，提取1次，測定黃酮的提取率。實驗結果如圖1。

從圖1中看出，當料液比為1∶35時黃酮的提取率最高，所以選擇最佳料液比為1∶35。

圖1 料液比對黃酮提取率的影響Figure 1 Impact of solid－liquid ratio on the extraction rate of flavonoids

3.3 乙醇體積分數對田基黃總黃酮提取率的影響

稱取0.2 g田基黃樣品于萃取罐中，按照料液比為1∶35，分別加入體積分數為30%、40%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液，微波提取溫度為50℃，萃取7 min，測定黃酮的提取率。實驗結果見圖2。

圖2 乙醇體積分數對黃酮提取率的影響Figure 2 The effect of ethanol volume fraction on the extraction rate of flavonoids

從圖2中看出，當乙醇體積分數為60%時，黃酮的提取率最大，所以選擇提取溶劑為60%的乙醇。

3.4 微波提取時間對田基黃總黃酮提取率的影響

設定提取溫度50℃，料液比1∶35，乙醇體積分數60%，分別提取2、5、7、10、12 min，然后測定黃酮含量。實驗結果如圖3。

圖3 微波時間對黃酮提取率的影響Figure 3 The effect of microwave time on the extraction rate of flavonoids

從圖3中看出，微波提取時間在2～5 min之間提取率升高，當微波時間提取大于5 min時，提取率下降，所以選擇微波提取時間為5 min。

3.5 溫度對田基黃總黃酮提取率的影響

選擇料液比1∶35，乙醇體積分數60%，按照提取溫度40、50、60、65、70、75、80℃進行提取，測定黃酮含量。實驗結果如圖4。

從圖4中可以看出，當提取溫度在40～60℃時提取率逐漸升高，當溫度在60～80℃時，提取率逐漸減小，且當提取溫度為60℃，黃酮提取率達到最大，所以選擇提取溫度為60℃。

3.6 驗證實驗

準確平行稱取0.200 0 g田基黃樣品3份，按照試驗最優條件，測定田基黃的總黃酮含量并計算提取率，3次測定結果提取率分別為14.24%、14.29%、14.31%，田基黃黃酮平均提取率為14.28%。

圖4 溫度對黃酮提取率的影響Figure 4 The effect of temeperature on the extraction rate of flavonoids

4 結論

微波提取田基黃中總黃酮含量并計算其提取率。最佳提取工藝為料液比1∶35 g／mL，溶劑乙醇的體積分數為60%，萃取時間5 min，萃取溫度60℃，提取1次。田基黃黃酮平均提取率為14.28%。

［1］劉金娜，溫春秀，楊太新，等.瓜蔞子黃酮提取方法和參數優化的研究［J］.時珍國醫國藥，2013，24（9）：2088－2090.

［2］林娜，尹禮國，董媛媛.硬頭黃竹葉黃酮提取工藝優化［J］.江蘇農業科學，2012，40（1）：240－241.

［3］李光，余霜，鄧銀，等.金蕎麥中黃酮提取技術研究［J］.江蘇農業科學，2013，41（7）：264－266.

［4］張艷軍，彭重威，徐淑慶，等.銀葉樹樹葉中總黃酮提取工藝優化［J］.中藥材，2012，35（4）：638－640.

［5］萬明，宋永鋼，楊菠.黃酮類化合物的藥理作用及其在食品工業中的應用［J］.江西食品工業，2007（3）：47－49.

［6］鐘佳，馬金晶，羅雯，等.大葉羊蹄甲總黃酮的提取及其對羥自由基的清除作用研究［J］.中國農學通報，2012，28（16）：215－218.

Extracting of Total Flavonoids from Grangea maderaspatana Using the Technique of Microwave

HAO Zhi－yun1，YANG Xin－zhou1，LIN Hui－kun1，LUO Wen2

（1.Dehong Teachers college，Science and Engineering Department，Dehong 678400，China；2.School of Chemistry and Biotechnology，Yunnan Nationalities University，Kunming 650031，China）

The method of microwave extraction technology of Total Flavonoids in Grangea maderaspatana was researched.The optimum technology parameters are as follows：extraction time was 9 min，ethanol concentration was 60%，extraction temperature was 50℃，extracted 1 times，and the liquid and solids ratio was 1∶35（g／mL）.Under the optimum extraction conditions determination of total flavonoids from Grangea maderaspatana.The results showed that total flavonoids of Grangea maderaspatana were 142.38 mg／g.Microwave extraction technology is an efficient，rapid and environmental method for extracting total flavonoids from the Chinese Medicinal Herbs.

microwave extraction；total flavonoids content；Grange maderaspatans

O657.3

A

1004-275X（2014）05-0008-03

12.3969／j.issn.1004-275X.2014.05.003

收稿：2014-04-18

德宏師范高等專科學校校級科學研究課題（編號：DSK201303）。

郝志云（1962-），男，副教授，主要研究方向：分析化學及化學教育。