兩種稀釋液在高精子密度精液分析中的比較應用

謝杏儀，方健源，何琨儀，何思華，陳順儀

(廣州市番禺區中心醫院檢驗科，廣東廣州511400)

兩種稀釋液在高精子密度精液分析中的比較應用

謝杏儀，方健源，何琨儀，何思華，陳順儀

(廣州市番禺區中心醫院檢驗科，廣東廣州511400)

目的探討原裝稀釋液和生理鹽水作為精子稀釋液在高精子密度精液常規分析中的比較應用。方法對88例高密度精液(不液化標本12例，液化密標本76例)標本先取原液粗略估計精子密度，再根據密度大小決定其稀釋倍數，分別用生理鹽水及原裝稀釋液對同份精液標本進行稀釋后用計算機輔助分析(CASA)系統分析其密度、活力。結果原液的密度、活力明顯低于生理鹽水(P＜0.05)和原裝稀釋液(P＜0.05)的密度與活力，兩種稀釋液的密度和活力相近(P＞0.05)；對不液化精液標本未加糜蛋白酶的原液精子密度和活力明顯低于加糜蛋白酶后用生理鹽水和原裝稀釋液稀釋的精子密度和活力(P＜0.05)，而加糜蛋白酶后用兩種稀釋液的精子密度和活力則較為相近(P＞0.05)。結論做精液常規分析時，高密度的精液可用生理鹽水代替原裝稀釋液應用于檢測。

原裝稀釋液；生理鹽水；精液常規分析

精液常規分析是男性生育能力最常用、最基本的檢查方法，精子計數是常規檢查的要素之一。人工分析由于其分析效率低，易受檢查者技術熟練程度和主觀因素的影響，已普遍被計算機輔助分析(computer-aided sperm analysis，CASA)取代。CASA盡管具有檢測簡單快捷、客觀精確、能提供精子動力學的量化數據等優點而得以廣泛應用，但當精子密度高時，如直接用CASA分析精液原液，可能會因為精子間或精子與非精子物質間的碰撞頻率增加[1]，系統不易識別精子與非精子及精子的活動級別，導致產生與被檢者精液質量不相符的檢驗結果。本實驗用生理鹽水稀釋液與原裝稀釋液分別對高密度精液進行稀釋后檢測，比較兩種稀釋液的稀釋效果，決定生理鹽水是否能取代原裝稀釋液作為一種新的精子稀釋液。

1 材料與方法

1.1 標本來源2012年6月至2012年11月于番禺區中心醫院進行精液常規檢查的8例門診病人，所有標本均符合要求，即病人禁欲2～5d用手淫法將一次射出的全部精液收入干凈的容器內立即送檢[2]，放于37oC恒溫臺保溫，觀察其液化情況。

1.2 儀器和試劑西班牙SCA精子質量分析系統、顯微鏡(Olympus CX21)，加樣槍、恒溫臺(YOUNING-2000 SCA型)、精液分析標準玻片、原裝稀釋液、生理鹽水、精液采集器(美國Falcon)、5ml滴管、玻片、糜蛋白酶(上海第一生化)。

1.3 方法(1)每天收取4例符合要求的高密度精液標本(密度＞50×106/ml)，輕輕震搖精液，立即置于恒溫臺上保溫，記錄其一般性狀(外觀、總量、pH、液化時間、黏稠度、凝集程度、有無白細胞及紅細胞)。(2)待精液完全液化后(1h不完全液化的標本可加入糜蛋白酶使其液化)，混勻，用5ml滴管取少量于干凈玻片上，蓋上蓋玻片鏡檢，粗略估算精子密度以決定其稀釋倍數。先用精子質量分析儀直接對原液充池進行分析，記錄其密度、活力及活率。再分別用原裝稀釋液和生理鹽水對同一份標本稀釋同等比例后進行分析其密度、活力及活率。每份標本重復分析兩次，取平均值。

1.4 統計學處理采用SPSS 17.0軟件對數據進行配對t檢驗分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 高密度精液標本通過CASA分析，原液的密度、活力明顯低于生理鹽水(P＜0.05)和原裝稀釋液(P＜0.05)的密度與活力，差異有統計學意義；生理鹽水與原裝稀釋液的密度與活力較相近，(P＞0.05)。結果見表1。

表1 CASA分析高密度精液原液、生理鹽水、原裝稀釋液的密度(x±s,×106/ml)、活力(x±s,%)

2.2 不液化精液標本分析結果見表2，可見未加糜蛋白酶的原液精子密度和活力明顯低于加糜蛋白酶后用生理鹽水和原裝稀釋液稀釋的精子密度和活力(P＜0.05)，而加糜蛋白酶后用兩種稀釋液的精子密度和活力則較為相近(P>0.05)。

表2 CASA分析不液化精液原液、生理鹽水、原裝稀釋液的密度(x±s,×106/ml)、活力(x±s,%)

3 討論

傳統使用顯微鏡直接目測精子密度和精子活動率，此種方法分析結果相差大，重復性差，且對精子運動能力的判斷缺少嚴格的量化指標[2]。CASA系統分析是將精液標本通過測定精子運動的吸光度變化，精子形態圖像和運動圖像放大后被攝像送入圖像分析系統，經計算機適時動態分析處理，自動得到精子密度、活力、活率，并能對精子的運動軌跡特征進行分析和分類統計[3]?，F今，在運用CASA系統分析精液常規時，對高密度精子予以稀釋后再分析已普遍被各實驗室應用，但就何種稀釋液最能得出于患者精子質量相符的檢查結果，尚無統一定論[4]。WHO曾推薦用Dulbecco磷酸鹽-葡萄糖-牛血清白蛋白溶液作為稀釋液，但有文獻報道，用培養液作為稀釋液稀釋后的精子活力遠遠好于用患者自體精漿作為稀釋液稀釋后的精子活力[5]。

現我院使用的原裝稀釋液為CASA系統公司提供的一種原裝配套稀釋液，此種稀釋液稀釋效果佳，但費用昂貴，且不易保存，很容易滋生細菌污染造成浪費，考慮及此，我們嘗試用生理鹽水作為精子稀釋液來探討其在高密度精液分析中的應用。從試驗結果表明：原液的密度明顯低于生理鹽水稀釋液及原裝稀釋液的密度，差異有統計學意義，可能為精子密度高時，精子間互相擠壓重疊而影響計數，這與文獻報道的不一致[4]，故在對高密度精子進行分析時，需對精液進行稀釋后再行檢測；生理鹽水稀釋液的密度及原裝稀釋液的密度相近，差異無統計學意義。本試驗結果也顯示，原液的活力均低于原裝稀釋液和生理鹽水稀釋后的活力，而用原裝稀釋液的活力則較生理鹽水的活力稍高，可能與原裝稀釋液的營養較高，能為精子提供能量有關，但兩者無統計學差異。對于液化異常(60min液化不完全)的精液標本可用糜蛋白酶加速其液化后，有助于提高精子計數的準確性。試驗結果表明，經糜蛋白酶處理后的精液用兩種稀釋液稀釋后的密度與活力均有所提高，兩者無統計學差異。文獻報道[6]該類標本中由于缺少糜蛋白樣酶導致精液液化異常，學者潘天明等也主張用糜蛋白酶稀釋高密度精液[7]。

綜上所述，用CASA分析高密度精液時，生理鹽水可代替原裝稀釋液，且因其穩定、廉價易得等優點，可廣泛應用于臨床。

[1]世界衛生組織.人類精液及精子-宮頸黏液相互作用實驗室檢驗手冊[M].第4版.北京:人民衛生出版社,2001:82.

[2]熊立凡,劉成玉.臨床檢驗基礎[M].第4版.北京:人民衛生出版社，2007:239.

[3]姜建平,鄭為平,馬錦洪.計算機輔助精液分析系統與人工檢測精液結果比較[J].中國男科學雜志，2004,10(8):634-635.

[4]葉明桃,曹云霞.兩種稀釋液在精液常規分析中的比較應用[J].中國優生與遺傳雜志,2008,16(2):110-113.

[5]Farrell PB,Foote RH,McArdle MM,et al.Media and dilution procedures tested to minimize handing effects on human,rabit and bull sperm for computer-assisted sperm analysis(CASA)[J].J Androl,1996,17:293-300.

[6]徐福松,高鴻程.男性病治療[M].南京:江蘇科學技術出版社,199: 141-144.

[7]潘天明,朱積川,李江源.男科實驗室診斷技術[M].北京:人民軍醫出版社,2006:44-82.

R446.19

A

1674-1129(2014)04-0438-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.026

2014-06-03；

2014-06-30)