金銀花中綠原酸和木犀草苷的薄層色譜鑒別方法分析

金蘭蘭

金銀花中綠原酸和木犀草苷的薄層色譜鑒別方法分析

金蘭蘭

目的探討金銀花中綠原酸和木犀草苷的薄層色譜（TLC）鑒別方法。方法根據《中國藥典》TLC法，配置供試品樣品，選擇合適展開劑，并分析其顯色方法。結果用水作溶劑經熱回流提取后配置試驗樣品，乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7.0:3.0:1.0:1.2）作展開劑，分別噴上5%三氯化鋁乙醇溶液，經紫外光燈（365nm）照射鑒別木犀草苷。噴1%三氯化鐵試液與1%鐵氰化鉀試液（1:1）混合溶液的上清液，使其顯色觀察綠原酸。結論應用可行性薄層色譜鑒別法，具有較高重現性好，對金銀花中綠原酸和木犀草苷予以有效鑒定。

金銀花；木犀草苷；綠原酸；薄層色譜法

金銀花屬于忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或帶初開的花，也被稱為銀花、金花、忍冬花、金藤花等。味甘，性寒，能清熱解毒、疏散風熱，臨床常在肺炎、急性痢疾、宮頸糜爛等疾病治療中得到應用。金銀花含有揮發油、黃酮類、有機酸等物質，主要活性成分有綠原酸、木犀草苷。臨床中對綠原酸和木犀草苷進行鑒定時所采用的方法主要為高效液相色譜（HPLC），此方法工作量加大，色譜峰分開不明顯，分離度差。本文應用薄層色譜法同時鑒定綠原酸和木犀草苷，效果明顯，現報告如下。

1 儀器與方法

1.1 儀器與藥物 應用瑞士 Precisa電子天平、超聲波清洗器、ZF-Ⅰ型三用紫外分析儀；金銀花規格1kg/包，選取合適綠原酸和木犀草苷對照品；三氯化鐵、鐵氰化鉀、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿屬于分析純。

1.2 方法 依據《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB試驗TLC法，對供試品樣品的制備、展開劑選擇、顯色方法進行觀察。

1.2.1 制備對照品溶液 精密稱取綠原酸對照品以甲醇制備1mg/mL對照品備用溶液。稱取木犀草苷對照品以70%乙醇制備含木犀草苷40μg/mL的對照品備用溶液。

1.2.2 供試品配置 應用回流法和超聲提取法分別進行對比。

1.2.3 回流法 合理應用金銀花藥材，放置于30℃烘箱進行2h干燥，經粉碎后過2號篩。稱量取2.0g粉末分別放入 50mL水、70%乙醇、50%甲醇、乙酸乙酯溶劑進行1h加熱回流后提取、過濾。水提取液需加入鹽酸配置為酸性，濾過，應用乙酸乙酯在振搖后進行3次萃取，每次應用25mL，混合乙酸乙酯溶液，蒸干，將2mL甲醇加入到殘渣內，溶解，配置成供試品溶液。其它類型溶劑提取液可將其蒸干，殘渣加入甲醇2mL后溶解，成為供試品溶液。依據《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B試驗TLC法，取出綠原酸對照品、木犀草苷對照品和供試品溶液2、4、1μL，分別放置于硅膠G薄層板面上。

1.2.4 超聲法[1]選用合適金銀花藥材，將其放置于30℃烘箱內持續干燥2h，將其粉碎通過2號篩。稱出2.0g粉末分別置入50mL水、70%乙醇、50%甲醇、乙酸乙酯溶劑超聲提取 40min，其余步驟與回流法相同。

1.2.5 展開劑的選擇 根據臨床應用，分別選取乙酸乙酯-丁酮-甲酸（10:7:1）、甲苯（水飽和）-乙酸乙酯-甲酸（5.0:4.5:0.5）、甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（6:3:1:3）上層溶液、乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7.0:3.0:1.0:1.2）、氯仿-甲醇-甲酸（4.0:1.0:0.5）。

1.2.6 顯色方法選擇 噴上5%三氯化鋁乙醇溶液，經紫外光燈（365nm）照射，分析所呈現熒光斑點，噴上l%三氯化鐵試液與1%鐵氰化鉀試液（1:1）混合液上清液，顯色，應用數碼相機進行拍照。

2 結果

應用薄層色譜法對鑒定金銀花中所含綠原酸和木犀草苷進行鑒定，在配置供試品溶液時將水作溶劑，加熱回流持續1h、加入鹽酸使之呈現酸性，應用乙酸乙酯進行萃取，效果明顯；展開劑應用乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7.0:3.0:1.0:1.2）具有較好效果；顯色劑應用 5%的三氯化鋁乙醇溶液，在紫外光燈（365nm）下對木犀草苷予以鑒定。將硅膠板噴以1%三氯化鐵試液和1%鐵氰化鉀試液（1:1）混合溶液上清液，使其顯色，對綠原酸予以鑒定。供試品溶液色譜中，與對照品溶液色譜對應處顯現同種顏色斑點。

3 討論

分析忍冬的化學成分可知，其有效成分主要是木犀草苷，其它種類含此成分的很少，而且大部分主要含有綠原酸，成分具有明顯差異。金銀花與山銀花均有綠原酸成分，但金銀花含有木犀草苷相對要高，而山銀花較少含有。目前，忍冬基本是金銀花的唯一植物來源，其余種類通常均被并入山銀花中?！吨袊幍洹酚涊d，綠原酸和木犀草苷是金銀花的重要標志性成分，是否存在木犀草苷成分是正品金銀花和其它山銀花進行有效區分的重要化學指標，而且是否存在木犀草苷成分一般也決定了正品金銀花在治療效果上與山銀花等同科植物具有較大的差異性。所以，尋求一種有效方法能同時鑒定金銀花中含有綠原酸和木犀草苷成分顯得尤為重要[2]。

經本文研究發現，乙酸乙酯萃取后點樣的提取方法效果最為明顯，超聲法和回流法均可將金銀花中的綠原酸和木犀草苷快速提取，但應用70%乙醇、50%甲醇、乙酸乙酯進行提取后所配置的樣品具有較多雜質，無法得到準確的樣品成點性，而經乙酸乙酯萃取可明顯排除大量雜質，降低雜質影響率。

以不同展開劑將木犀草苷和綠原酸進行分離過程中，并無法使分離效果達到良好狀態，究其原因一般認為是木犀草苷和綠原酸并無較大極性區別。所以本文選取兩種專屬性較強的顯色法對木犀草苷和綠原酸進行鑒定，金銀花中綠原酸與木犀草苷含量具有較為明顯的差異性，點樣量大時，木犀草苷斑點易被綠原酸斑點所掩蓋；點樣量小時，木犀草苷無法得到足夠含量，導致斑點不明顯[3]。

總之，應用合適的薄層色譜方法能有效鑒別金銀花中綠原酸和木犀草苷，應用價值高。

[1] 陳秋竹,林瑞超,王鋼力,等.金銀花提取物化學成分研究[J].中藥材,2010,33(6):920-922.

[2] 中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京:化學工業出版社,2005:21,152.

[3] 王永慧,孫榮進,葉方,等.金銀花中綠原酸和木犀草苷的薄層色譜鑒別方法研究[J].中國醫藥導報,2012,9(11):136-137.

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1673-5846(2014)02-0022-02

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