非酒精性脂肪性肝病患者血清增食欲素A水平變化及其與胰島素抵抗的關(guān)系

高建峰 謝中華 章海華 汪鐵軍 鄭元秀 杭州市余杭區(qū)第二人民醫(yī)院 杭州 311121

非酒精性脂肪性肝病患者血清增食欲素A水平變化及其與胰島素抵抗的關(guān)系

高建峰 謝中華 章海華 汪鐵軍 鄭元秀 杭州市余杭區(qū)第二人民醫(yī)院 杭州 311121

目的 觀察非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者血清增食欲素A（Orexin A）水平變化及其與胰島素抵抗的關(guān)系。方法 測(cè)定103例非酒精性脂肪性肝病患者及99名健康體檢者的體質(zhì)指數(shù)（BMI）及腰臀比（WHR），采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)其血清增食欲素A、血脂、空腹胰島素及空腹血糖值，計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)，分析血清增食欲素A水平與胰島素抵抗的關(guān)系。結(jié)果 與健康對(duì)照組比較，NAFLD患者BMI、WHR、HOMA-IR及血清TC、TG、FFA水平均明顯增高（P＜0.05，P＜0.01）；血清HDL-C及Orexin A水平則顯著降低（P＜0.05）；Orexin A與BMI、WHR、TG、FFA、HOMAIR均呈明顯負(fù)相關(guān)（r分別為-0.689、-0.741、-0.438、-0.377、-0.611，P＜0.01）；與TC無(wú)明顯相關(guān)性；Orexin A與HDL-C呈明顯正相關(guān)（r＝0.832，P＜0.01）。結(jié)論 非酒精性脂肪性肝病患者存在脂代謝異常及胰島素抵抗，Orexin A可能通過(guò)調(diào)控胰島素抵抗參與NAFLD的發(fā)生發(fā)展。

非酒精性脂肪性肝病；增食欲素A；胰島素抵抗

近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變，肥胖、糖脂代謝紊亂相關(guān)的非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）發(fā)病率不斷升高，且有年輕化的趨勢(shì)[1]。NAFLD與胰島素抵抗（insulin resistance，IR）、肥胖、脂代謝紊亂、糖尿病等代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）密切相關(guān)，被認(rèn)為是MS在肝臟的表現(xiàn)[2]，其發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制尚不完全清楚，IR是其形成的核心環(huán)節(jié)[3]。增食欲素A（Orexin A）是由下丘腦組織中合成并分泌的一種神經(jīng)肽，通過(guò)其受體調(diào)節(jié)攝食、應(yīng)激等多種生理過(guò)程。近年來(lái)，越來(lái)越多的基礎(chǔ)與臨床研究[4-6]發(fā)現(xiàn)，Orexin A可通過(guò)促進(jìn)IR參與肥胖、2型糖尿病等形成，而其在NAFLD中的作用尚不清楚。本研究通過(guò)檢測(cè)NAFLD患者外周Orexin A水平，分析其與IR的關(guān)系，初步探討其在NAFLD中的作用，以期為NAFLD的防治提供新思路。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2010年4月—2012年2月本院門診和住院患者103例為觀察組，男56例，女47例，平均年齡（43.17±10.23）歲，均符合：①中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病分會(huì)脂肪肝酒精肝學(xué)組制定的NAFLD診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；②年齡18～70歲，就診前1個(gè)月未用過(guò)氧化物酶增殖體激活受體（PPAR）-γ激動(dòng)劑、降脂藥。③排除病毒性肝炎、藥物性肝炎、自身免疫性肝病、糖尿病、營(yíng)養(yǎng)不良、甲狀腺功能異常、腫瘤及自身免疫性疾病、妊娠哺乳期婦女、患有精神系統(tǒng)疾病，無(wú)法與醫(yī)生進(jìn)行正常交流的患者。對(duì)照組選自我院99名健康體檢者（體質(zhì)指數(shù)均在正常范圍），男53例，女46例，平均年齡（42.66±13.12）歲，均無(wú)嚴(yán)重心腦腎疾病、病毒性肝炎、脂肪肝及其他肝臟疾病、腫瘤、精神疾病、糖尿病和長(zhǎng)期服藥史等。兩組性別、年齡分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 觀察指標(biāo)及方法 所有受試者均禁食8h以上，于次日清晨空腹采肘靜脈血，用于相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定。

1.2.1 體質(zhì)指數(shù)（BMI）及腰臀比（WHR） 要求全部入選對(duì)象脫鞋、免冠、僅穿內(nèi)衣，由專人測(cè)量身高、體質(zhì)量、腰圍、臀圍，分別以kg、cm為單位記錄，精確到0.1cm、0.1kg，BMI＝體質(zhì)量（kg）/身高（m）2，WHR＝腰圍/臀圍。

1.2.2 血清Orexin A水平測(cè)定 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（enzyme linked immuno-sorbent assay，ELISA）進(jìn)行。試劑盒由美國(guó)DSL公司提供，批號(hào)：M64608。用Bio-Tek酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下讀取各孔吸光度（A）值，并根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出相對(duì)應(yīng)的濃度。

1.2.3 胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR） 采用HITACHI 7600-110大型生化分析儀檢測(cè)空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）水平，放射免疫法檢測(cè)空腹胰島素（fasting blood insulin，F(xiàn)BIn）水平，根據(jù)空腹血糖、胰島素值計(jì)算胰島素抵抗程度（采用穩(wěn)態(tài)模型評(píng)價(jià)法（homeostatic model assessment，HOMA），公式如下：胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）＝（FBG×FBIn）/22.5。空腹胰島素放射免疫分析藥盒為濰坊三維生物工程集團(tuán)有限公司提供，批號(hào)：3V-20120102。

1.2.4 游離脂肪酸（free fatty acids，F(xiàn)FA）測(cè)定 采用改良比色法測(cè)定，試劑盒由北京普利萊基因技術(shù)有限公司提供，批號(hào)：20120116。

1.2.5 血脂指標(biāo)測(cè)定 采用HITACHI7600-110大型生化分析儀檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，性別比采用χ2檢驗(yàn)，其余數(shù)據(jù)行描述性分析﹑正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)，在描述性分析中,對(duì)于正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，正態(tài)分布數(shù)據(jù)經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)后采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用sperman檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組BMI及WHR比較 觀察組BMI及WHR均較健康對(duì)照組明顯升高（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組BMI及WHR比較（±s）

表1 兩組BMI及WHR比較（±s）

注：與健康對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別健康對(duì)照組觀察組n/例99 103 BMI/（kg/m2）22.15±2.56 27.26±2.23* WHR 0.68±0.03 0.88±0.11*

2.2 兩組生化指標(biāo)比較 觀察組血清TC、TG、FFA水平及HOMA-IR均明顯高于健康對(duì)照組（P＜0.05），血清HDL-C及Orexin A水平則顯著低于健康對(duì)照組（P＜0.01，P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩組生化指標(biāo)比較（±s）

表2 兩組生化指標(biāo)比較（±s）

注：與健康對(duì)照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01

組別健康對(duì)照組觀察組n/例99 103 TC/（mmol/L）4.04±0.38 5.75±0.77* TG/（mmol/L）1.18±0.38 2.42±1.47* HDL-C/（mmol/L）1.52±0.32 1.04±0.27* FFA/（umol/L）440.69±95.31 756.63±101.38** Orexin A/（ng/mL）0.69±0.11 0.31±0.07* HOMA-IR 2.69±0.79 7.63±1.38*

2.3 相關(guān)性分析 sperman相關(guān)性分析表明，Orexin A與BMI、WHR、TG、FFA、HOMA-IR均呈明顯負(fù)相關(guān)（r分別為-0.689、-0.741、-0.438、-0.377、-0.611，P＜0.01）；與TC無(wú)明顯相關(guān)性；Orexin A與HDL-C呈明顯正相關(guān)（r＝0.832，P＜0.01）。

3 討論

NAFLD的發(fā)病機(jī)制是近些年學(xué)術(shù)界研究熱點(diǎn)之一，盡管其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，但目前廣泛接受的是Day和James在1998年提出的“二次打擊”學(xué)說(shuō)[3]，即指從單純性脂肪肝進(jìn)展至非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）甚至肝纖維化、肝硬化來(lái)源于二次打擊。肝內(nèi)脂質(zhì)蓄積是NASH發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的第一次打擊，而脂肪變性的肝細(xì)胞對(duì)損害因素非常敏感；第二次打擊來(lái)自氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過(guò)氧化、炎癥、免疫攻擊因素與防御因素不平衡。近年來(lái)對(duì)NAFLD發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展主要集中在IR，因?yàn)镮R是大多數(shù)患者潛在的異常因素，IR是NAFLD形成的始動(dòng)及核心環(huán)節(jié)，并可能貫穿于NAFLD的全過(guò)程[8]。因此，研究IR的分子機(jī)制對(duì)于NAFLD的防治具有重要意義。

導(dǎo)致IR形成的分子機(jī)制極其復(fù)雜，涉及多種生物因子及信號(hào)通路。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究[4-6]發(fā)現(xiàn)，增食欲素A（Orexin A）可通過(guò)調(diào)節(jié)IR參與肥胖、脂代謝紊亂等代謝綜合征的發(fā)生發(fā)展。Orexin是1998年發(fā)現(xiàn)的一種由大鼠下丘腦外側(cè)區(qū)（lateral ypothalamic area，LHA）合成并分泌的小分子神經(jīng)肽[9]，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)外均廣泛分布，除經(jīng)典的調(diào)節(jié)攝食和睡眠/覺(jué)醒狀態(tài)之外，還參與多種內(nèi)分泌代謝的調(diào)控。Orexin系統(tǒng)包括Orexin A、Orexin B和Orexin 1/2受體（OX1R，OX2R），其中Orexin A可以劑量依賴方式增加攝食[10]，是機(jī)體能量平衡調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中的重要物質(zhì)，因此受到了廣泛關(guān)注。Switońska等[11]研究顯示，Orexin A對(duì)胰島素的刺激呈劑量依賴性，且Orexin A和胰島素的作用存在時(shí)相上的差異。國(guó)內(nèi)趙玉紅等[6]發(fā)現(xiàn)在脂代謝異常狀態(tài)下，Orexin A是IR及肥胖發(fā)生的重要標(biāo)志。

目前，在NAFLD中，Orexin A是否與IR有關(guān)尚不清楚。已知Orexin A能自由擴(kuò)散通過(guò)血腦屏障[12]，因此，血清Orexin A的水平至少部分反映了下丘腦Orexin A的產(chǎn)生情況。本研究結(jié)果顯示，NAFLD患者血清Orexin A水平較健康體檢者明顯減少，NAFLD患者肥胖度的各項(xiàng)指標(biāo)（BMI及WHR）及血脂指標(biāo)TG、FFA、TC較健康體檢者顯著升高，HDL-C水平明顯降低，且NAFLD患者較健康體檢者有更為明顯的胰島素抵抗，提示NAFLD患者存在一定程度的肥胖、脂代謝異常及IR。相關(guān)性分析表明，血清Orexin A水平與BMI、WHR、TG、FFA、HOMA-IR均呈明顯負(fù)相關(guān)，與HDL-C呈明顯正相關(guān)，提示在NAFLD中，Orexin A水平的減少與脂代謝異常及IR密切相關(guān)。脂質(zhì)代謝異常作為IR的一項(xiàng)重要標(biāo)志是如何參與Orexin A的調(diào)控目前尚不清楚。Beck等[13]報(bào)道，Orexin的表達(dá)與TG負(fù)相關(guān)，本組結(jié)果也支持這一結(jié)論。高脂血癥可通過(guò)誘導(dǎo)胰島B細(xì)胞凋亡[14]等多種途徑引起胰島素介導(dǎo)的葡萄糖攝取和利用減少，以及肝臟葡萄糖輸出增加，導(dǎo)致IR的形成。Orexin系統(tǒng)可能是參與調(diào)節(jié)脂肪-胰島軸的重要因素。

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The Changes of Serum Orexin A in Nonalcoholic Fatty Liver Disease Patients and the Relationship between Orexin A and Insulin resistance

GAO Jianfeng，XIE Zhonghua，ZHANG Haihua，WANG Tiejun，ZHENG Yuanxiu.Yuhang District Second People's Hospital of Hangzhou,Hangzhou(311121),China

ObjectiveTo investigate the changes of the level of serum orexin A in nonalcoholic fatty liver disease（NAFLD）patients and the relationship between orexin A and insulin resistance.MethodsBody mass index（BMI）and waist-hip ratio（WHR）of 103 patients with NAFLD and of 99 individuals having general physical examination were measured.Fast blood glucose（FBG）and fast insulin（FINS）were determined for calculating the insulin resistance index（HOMA-IR）.The level of serum orexin A was detected by ELISA.The relationship of serum orexin A with insulin resistance was statistically analyzed.ResultsCompared with healthy control group,the BMI,WHR, HOMA-IR,and the levels of serum total cholesterol,triacylglycerol,free fatty acid were significantly higher（P＜0.05）,but the levels of serum high density lipoprotein cholesterol（HDL-C）and orexin A were significantly decreased（P＜0.01,P＜0.05）.The level of serum orexin A was negatively correlated with BMI,WHR,triacylglcerol,free fatty acid,and HOMA-IR（r＝-0.689,-0.741,-0.438,-0.377,-0.611;P＜0.01）,but the level of serum orexin A was posi tively correlated with HDL-C（r＝0.832,P＜0.01）.Conclusions Lipid metabolism disorder and insulin resistance were observed in NAFLD patients;orexin A may play an important role in occurrence and development of NAFLD by modulating insulin resistance.

nonalcoholic fatty liver disease；orexin A；insulin resistance

2013-06-20