丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定及其臨床意義

于 洋

黑龍江省第四醫(yī)院道外分院，黑龍江 哈爾濱 150050

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定及其臨床意義

于 洋

黑龍江省第四醫(yī)院道外分院，黑龍江 哈爾濱 150050

ALT在肝細(xì)胞中較多，當(dāng)肝臟受損時(shí)，此酶人血致使含量增加，往往作為診斷肝細(xì)胞損傷的重要指標(biāo)之一，但其它疾病也會(huì)引起ALT不同程度的增高。ALT活性增高可見于下列疾病。

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；連續(xù)監(jiān)測(cè)法；賴氏法

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）廣泛地分布在人體的各組織器官內(nèi)，分布次序：肝＞腎＞心＞肌肉。以肝臟含量最多，是血清的2850倍。在肝臟等臟器受損或壞死時(shí)，細(xì)胞內(nèi)酶釋入血流，使血清內(nèi)酶的活力增高［1］。膽道梗阻時(shí)，由膽道內(nèi)酶反流，血中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活力也增高。連續(xù)監(jiān)測(cè)法就指示酶反應(yīng)平衡點(diǎn)偏向右側(cè)，利用NADH在340 nm有特異光吸收的特性，可連續(xù)測(cè)定NADH被氧化速度（即測(cè)△A340/△t），來(lái)表達(dá)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力。

1 資料與方法

1.1 一般資料

Tris貯存液（1.0 mol/L）：并用蒸餾水稀釋至1 L。此溶液室溫放置至少穩(wěn)定6個(gè)月。Triton X-100。Tris緩沖液：取Tirs貯存液160 ml，加蒸溜水約800 ml，在25℃加大約5 ml濃鹽酸調(diào)pu至（7.54±0.02），用蒸餾水稀釋至1 L。加0.1 ml Triton X-100，在4℃下可長(zhǎng)期保存。L-丙氨酸加溶解大約50 ml蒸餾水中，加40 ml Tris貯存液，在25℃用濃鹽酸調(diào)pH至（7.54±0.02）。最后加蒸餾水至250 ml，加25 μlTriton X-100。此溶液在4℃下可穩(wěn)定1個(gè)月。還原型輔酶INADH、取純度為80%的NADH干粉2 mg溶于1 ml Tris貯存液中。LDH貯存液。試劑A：取24 ml L-丙氨酸溶液加8 ml NADH溶液及120 μl LDH貯存液。試劑B：取5.26 g α-酮戊二酸和35.64 g L-丙氨酸溶于250 ml蒸餾水中。加50 ml Tris貯存液，此液pH大約7.4，在25℃用0.1 mol/L NaOH調(diào)pH至（7.54±0.02）［2］。最后用蒸餾水稀釋至500 ml，并加入50 μl Triton X-100。

1.2 方法

用自動(dòng)吸樣器吸取10 μl血清，加入到比色杯中，用90 μl水沖洗吸樣器一并加入到杯中，加入50 μl試劑A，在30℃下孵育6 min。在6 min結(jié)束時(shí)加入50 μl試劑B，混合，待30 s，在340 ml測(cè)定NADH的吸光度減少。

1.3 計(jì)算

ALT活性，U/L=△A／min×1/6.22×0.20 ml/ 0.01 ml×1000=△A/min×3215，△A是每分鐘吸光度的變化。6.22是NADH在340 nm的毫摩爾吸光系數(shù)。0.20 ml是總?cè)萘俊?.01是血清樣品量，1000是毫摩爾轉(zhuǎn)化成微摩爾的轉(zhuǎn)換系數(shù)。

2 正常參考值

3 U/L～30 U/L。

3 臨床意義

由于肝組織中所含的ALT量為心臟、肌肉、腎組織的3倍，所以ALT升高幾乎總是由肝病引起的。ALT異常，陽(yáng)性率為80%～100%，是病毒性肝炎的重要檢查指標(biāo)。患病毒性肝炎病人中，則可升至1000～4000單位。急性乙型肝炎ALT升高顯著，若較高水平持續(xù)數(shù)月，甚至于數(shù)年，表明轉(zhuǎn)為慢性。重癥肝炎和亞急性肝炎時(shí)，一度上升的ALT在癥狀惡化時(shí)有酶活性降低，出現(xiàn)血清膽紅素和ALT變化分離的現(xiàn)象，可能是肝壞死的征兆。慢性肝炎、肝硬化時(shí)ALT輕度上升或正常，血清AST＞ALT。當(dāng)慢性肝炎、肝硬化患者ALT正常而甲胎蛋白升高時(shí)，要警惕并發(fā)原發(fā)性肝癌的可能。心功能不全致肝淤血，可有ALT升高。

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）的高低可反映肝細(xì)胞損害的程度，臨床上常遇到NAFLD患者無(wú)任何自覺癥狀，而通過查體或檢查其他疾病而發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶增高，通過B超或肝活檢而確診為NAFLD。NAFLD時(shí)ALT水平反映脂肪肝的活動(dòng)性，一般SFL時(shí)ALT不高，但少數(shù)病例伴有一定程度的炎癥時(shí)也可輕度升高。NASH時(shí)因常伴有肝細(xì)胞的炎癥壞死，或有肝纖維化發(fā)生，因此常出現(xiàn)持續(xù)的ALT增高。如果轉(zhuǎn)氨酶持續(xù)增高超過8周以上，并伴有γ球蛋白增高，常提示有活動(dòng)性肝病存在。活動(dòng)型進(jìn)行性肝硬化時(shí)ALT可輕度或中度升高，但在代償期中則正常或稍偏高。NAFLD合并黃疸者多為膽汁淤積性黃疸，此時(shí)轉(zhuǎn)氨酶也可升高，但一般不超過正常值的8倍，個(gè)別病例因嚴(yán)重肝內(nèi)或肝外膽管阻塞時(shí)ALT可達(dá)正常的10倍以上，但隨黃疸的消退而迅速下降。門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST/ALT）比值的變化也可反映病情的變化。

當(dāng)心功能好轉(zhuǎn)時(shí)，ALT則恢復(fù)正常；脂肪肝、膽管炎、藥物性肝臟損害等ALT將升高。

［1］邱駿，顧國(guó)浩.兩種方法測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的偏差評(píng)估［J］.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2006，26（5）：759-761.

［2］郭群，王以立.雙波長(zhǎng)在連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定中的應(yīng)用［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，1997，15（5）：273-275.

Monitoring with Continuous Monitoring Assay for Alanine Aminotransferase （ALT） and its Clinical Significance

YU Yang Daowai Branch of The Fourth Hospital of Heilongjiang Province，Harbin Heilongjiang 150050，China

Hepatocyte has a larger quantity of ALT which can release blood when liver damaged and increase its content.It is one of the most important indicators for liver damage diagnose.However，other diseases may also increase ALT content to a different level.Following diseases may cause ALT activity increase.

Alanine aminotransferase，Continuous monitoring，Reitman method

R446.11

B

1674-9316（2014）22-0067-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.22.043