隱球菌的免疫檢驗分析

于 洋

黑龍江省第四醫院道外分院，黑龍江 哈爾濱 150050

為隱球菌病中某些種或其變種所致的深部真菌病，其中以新生隱球菌感染所致急性、亞急性或深部真菌病為最多，可引起急性或慢性腦膜炎、腦膜腦炎、也可致肝、心、肺、骨、皮膚、眼、淋巴結感染。在免疫功能低下時，微白隱球菌、勞倫特隱球菌也可致病［1］。

1 微生物檢驗

1.1 直接鏡檢

用病人腦脊液作墨汁負染色檢查，涂片中可見圓型、厚壁、出芽或不出芽的厚壁孢子，外圍有一圈透光的莢膜，其厚度可與菌體相等。厚莢膜有診斷意義，也是鑒別致病與不致病的依據之一。在黑色背景下可鏡檢到透亮菌體和寬厚莢膜。非致病性隱球菌無莢膜。

1.2 乳膠凝集試驗

為一種凝集試驗，系顆粒性抗原（細菌、真菌、紅細胞、膠乳等）或吸附于表面的抗原（或抗體）與相應的抗體（或抗原）結合出現肉眼可見的凝集塊（凝集反應）。而乳膠凝集反應是利用聚苯乙烯膠乳顆粒具有吸附蛋白質—類生物高分子的性能，以它作為載體直接吸附抗體（或抗原）形成致敏膠乳顆粒，與相應抗原（或抗體）產生反應使膠乳凝集為肉眼可見的白色沉淀即為乳膠凝集反應。待檢標本有腦脊液、血清、尿或皮膚組織浸出液，先56℃ 30 min滅活其中可能存在的其它病原（包括HIV），標本如混濁者先取120 μl離心沉淀，再加入 pronase 20 μl，以消化非特異蛋白以增加標本的敏感性，再加入酶中止液，如為尿液，應以緩沖液稀釋一倍。取40 μl待檢液滴加于特制的乳膠板第一孔內（也可以潔凈載玻片）；第二孔內加入兔抗正常球蛋白抗體（LN）致敏乳膠液40 μl（陰性對照）；第三孔內加入抗隱球菌抗原乳膠液40 μd；于上述各孔內各加抗隱球菌抗體致敏乳膠液10μl；充分混合各孔內的液體（以小玻棒）并置于160 rpm振蕩器10 min或前后緩緩擺動玻板，判定結果。

1.3 酶聯免疫試驗（EIA）

為標記免疫測定方法之一，系將抗原、抗體等成分以各類標記物標記之，使抗原抗體反應更為敏感而成為肉眼可檢測的方法。例如以酶標記后，定量測定標記于抗原或抗體上的酶活性以間接測定抗原抗體的存在及其相應含量，由于酶反應可沿催化反應而放大，抗原及抗體的酶標記物甚穩定，致本方法具高度敏感及特異。具體測定方法有間接法、雙抗體夾心法及標記抗原競爭法，雙擾體夾心法尚可用以測抗原。以酶聯免疫法測定隱球菌莢膜多糖抗原系列系用抗體具有結合固相載體（聚氯乙烯塑料板）表面而不影響其免疫活性的特點，將已知抗體吸附于聚氯乙烯板孔內，加入待檢的相應抗原的標本與之結合后，再加入標以酶的相應抗體，如能結合，最后加入適當基質使酶分解，從酶分解后出現的顏色反應可計算出待檢標本的抗原含量［2］。此雙抗體中，第一抗體針對標本中的抗原，第二個標有酶的抗體是針對復合物的抗體（這些可購自生物制品所或按上法制備）。

1.4 熒光免疫測定法（FA）

以已知特異抗體來測定抗原。本法多用于免疫病理中，即測定福爾馬林固定的組織切片或新鮮冰凍切片中測定新生隱球菌及其多糖產物等抗原，本方法如以念珠菌的某些種（如克柔氏念珠菌）抗體吸收后，可提高其特異性。

2 隱球菌病常見疾病

隱球菌病是新型隱球菌感染所致的全身感染性疾病，中樞神經系統隱球菌感染臨床最常見，其中腦膜炎型以腦膜刺激癥狀為主要臨床表現；腦膜腦炎型，除腦膜病變外，還有腦實質的損害，可出現相應部位的臨床癥狀和體征；肉芽腫型，可因顱內腫塊的壓迫造成相應的神經系統癥狀和體征。肺隱球菌病，患者可表現為低熱、胸痛、咳嗽和乏力等癥狀。

3 臨床意義

當機體免疫力降低時，新生隱球菌經呼吸道吸入而感染，引起肺部輕度炎癥，并可播散至全身其他部位，包括皮膚、骨、心臟等組織，最易侵犯中樞神經系統，引起隱球菌性腦膜炎。臨床表現類似結核性腦膜炎，預后不良。由于臨床上抗生素、激素和免疫抑制劑的廣泛使用.近年來新生隱球菌感染的病例有增多的趨勢。

［1］ 秦啟賢，翁心華，朱利萍.臨床真菌學［M］.上海：復旦大學出版社，2001（5）：346-363.

［2］ 許金國，丁海峰.隱球菌病的研究進展［J］.中國麻風皮膚病雜志，2005，21（4）：288-291.