地方品種“老班章”老樹茶HPLC指紋圖譜分析

蔡 麗，梁名志，夏麗飛，楊盛美，李曉霞，陳 枚，李友勇，冉隆珣

（云南省農業科學院茶葉研究所，云南省茶樹種質資源創新與配套栽培技術工程研究中心， 云南 勐海 666201）

老班章是普洱茶產區的山頭名稱，云南普洱茶由于地理環境的不同所產茶葉的口感滋味也不同，從歷史上的茶馬古道開始便以山頭的名稱來界定特定口感的普洱茶。老班章位于西雙版納州勐海縣布朗山鄉，下設5個村小組：老班章村、新班章村、老曼娥村和2個拉祜村。其中拉祜村不產茶，另外3個村所產茶統稱“老班章”[1]。“老班章”號稱茶王，是標準的大葉種茶，條索粗壯，芽頭肥壯且多絨毛，有強烈的山野氣韻，散茶和茶餅均有很突顯的古樹茶特有之香。目前，對于“老班章”老樹茶的鑒別和品質的評審多依賴于感官評定[2-5]，缺乏客觀的量化依據。高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜的識別技術與模型構建是茶葉鑒定中的關鍵步驟，也是近年來學者關注較多的研究方向[6]。提取茶特征成分并與模式識別方法相結合能準確判別茶葉品種和產地，筆者采用HPLC技術對云南地方品種“老班章”老樹茶主要化學成分的指紋圖譜進行研究，這對于維護“老班章”茶葉品牌、提高茶葉品質具有重要的現實意義。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 供試材料 于2011年春季分別在老班章村、新班章村、老曼娥村3個產茶村按茶一芽二葉標準采摘古樹茶鮮葉，于微波爐殺青，每個茶樣得干茶樣約100 g備用。

1.1.2 儀器與試劑 儀器：超純水儀（Millipore）、分析天平（Denver）、水浴鍋（北京精瑞）、離心機（BECKMAN）、高效液相色譜儀（waters2695）；試劑：兒茶素類化合物標樣（美國SIGMA公司）、甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、乙酸（色譜純）。

1.2 方 法

稱取茶粉1.00 g加入100 mL 80%甲醇，30℃水浴超聲提取20 min，濾紙過濾，濾渣洗滌3次后合并濾液，定容至200 mL。0.22 μm濾膜過濾后備用[7]。

工藝流程：鮮葉→攤青→微波殺青→干燥→磨樣→分析。

1.3 色譜檢測條件

采用GB/T8313-2008中的方法進行檢測[8]。流動相：A為甲醇，B為乙腈；流動相的梯度為從10%的乙腈到 60%的乙腈，流速1 mL/min，在36 min內完成；色譜柱為waters-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；檢測波長280 nm。每次檢測完成，系統平衡15 min后重復3次進樣。所得數據用Empower軟件處理。

2 結果與分析

2.1 HPLC圖譜分析

如圖1～5所示，通過對5個樣品HPLC圖譜的分析，共確定了7個色譜峰作為“老班章”老樹茶的特征指紋峰。從指紋圖譜可知，出峰順序為沒食子酸（GA）、表沒食子兒茶素（EGC）、右旋兒茶素（C）、表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）。

2.2 主成分分析

如表1～3所示，“老班章”老樹1蒸青樣與其他4個茶樣相比較，沒食子酸（GA）、表沒食子兒茶素（EGC）、右旋兒茶素（C）含量均相對較低，出峰時間較早，相應的峰面積也較小，但表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）含量遠遠高于其他4個茶樣，其內含成分含量的高低決定了老班章曬青毛茶各產茶村茶葉風味品質的差異。老曼娥老樹的沒食子酸（GA）、表沒食子兒茶素（EGC）、右旋兒茶素（C）、表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）含量則均低于其他產茶村，進一步從理論上解釋了“老班章”茶葉品質風味特殊的原因跟其內含成分是息息相關的。雖然各茶樣的內含成分含量高低差異很大，但均有穩定的出峰時間和峰面積，重復性較好。

表1 “老班章”老樹茶兒茶素單體成分 （mg/g）

表2 “老班章”老樹茶HPLC檢測出峰時間 （min）

表3 “老班章”老樹茶HPLC檢測峰面積 （uv·s）

3 結 論

“老班章”老樹茶由于其特殊的品質，其指紋圖譜也有許多特征性和穩定性。其指紋圖譜數字化體現了其所含的化學成分和各自的含量，確定了7個色譜峰作為“老班章”老樹茶的特征指紋峰，其出峰順序為沒食子酸（GA）、表沒食子兒茶素（EGC）、右旋兒茶素（C）、表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG），雖各產茶村的內含成分差異較大，但均有穩定的出峰時間和峰面積，重復性較好。

從采集到的指紋圖譜可以看出，“老班章”老樹茶的HPLC指紋圖譜特征峰或特殊峰面積明顯，出峰時間、峰面積具有較強的選擇性，綜合結果能特征性地區分“老班章”老樹茶所含主要成分的特殊含量，成為自身的“化學條碼”。“老班章”老樹茶指紋圖譜庫的建立，對于“老班章”老樹茶質量監督和生化成分檢測工作的開展具有重要意義，且建立指紋圖譜庫切實可行，更多研究有待于進一步開展試驗。

[1]楊小鵬.“老班章”茶尋求“地理標志”保護[J].中國品牌，2001，（4）：110-111.

[2]張 梁，李 寧，袁 鵬，等.普洱熟茶和普洱生茶的指紋圖譜研究[J].中國藥學，2011，（4）：352-359.

[3]廖夫生.HPLC法同時測定茶葉中4種兒茶素類成分[J].中國茶葉，2008，（9）：24-25.

[4]夏麗飛，梁名志，王 麗，等.勐海曬青茶品質化學研究[J].中國農學通報，2012，28（16）：239-244.

[5]成 浩，王麗鴛，周 健，等.基于化學指紋圖譜的綠茶原料品種判別分析[J].中國農業科學，2008，41（8）：2413-2418.

[6]劉 英，吳曙光，尹 州，等.指紋圖譜技術在茶葉研究上的應用[J].茶葉科學，2013，33（1）：13-20.

[7]宛曉春.茶葉生物化學（第三版）[M].北京：中國農業出版社，2003.

[8]寧井銘，張正竹，谷勛剛，等.云南曬青毛茶HPLC指紋圖譜的研究[J].食品與發酵工業，2009，35（9）：36-40.