地方品種“老班章”老樹茶HPLC指紋圖譜分析

蔡 麗，梁名志，夏麗飛，楊盛美，李曉霞，陳 枚，李友勇，冉隆珣

（云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所，云南省茶樹種質(zhì)資源創(chuàng)新與配套栽培技術(shù)工程研究中心， 云南 勐海 666201）

老班章是普洱茶產(chǎn)區(qū)的山頭名稱，云南普洱茶由于地理環(huán)境的不同所產(chǎn)茶葉的口感滋味也不同，從歷史上的茶馬古道開始便以山頭的名稱來界定特定口感的普洱茶。老班章位于西雙版納州勐海縣布朗山鄉(xiāng)，下設(shè)5個(gè)村小組：老班章村、新班章村、老曼娥村和2個(gè)拉祜村。其中拉祜村不產(chǎn)茶，另外3個(gè)村所產(chǎn)茶統(tǒng)稱“老班章”[1]。“老班章”號(hào)稱茶王，是標(biāo)準(zhǔn)的大葉種茶，條索粗壯，芽頭肥壯且多絨毛，有強(qiáng)烈的山野氣韻，散茶和茶餅均有很突顯的古樹茶特有之香。目前，對(duì)于“老班章”老樹茶的鑒別和品質(zhì)的評(píng)審多依賴于感官評(píng)定[2-5]，缺乏客觀的量化依據(jù)。高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜的識(shí)別技術(shù)與模型構(gòu)建是茶葉鑒定中的關(guān)鍵步驟，也是近年來學(xué)者關(guān)注較多的研究方向[6]。提取茶特征成分并與模式識(shí)別方法相結(jié)合能準(zhǔn)確判別茶葉品種和產(chǎn)地，筆者采用HPLC技術(shù)對(duì)云南地方品種“老班章”老樹茶主要化學(xué)成分的指紋圖譜進(jìn)行研究，這對(duì)于維護(hù)“老班章”茶葉品牌、提高茶葉品質(zhì)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 供試材料 于2011年春季分別在老班章村、新班章村、老曼娥村3個(gè)產(chǎn)茶村按茶一芽二葉標(biāo)準(zhǔn)采摘古樹茶鮮葉，于微波爐殺青，每個(gè)茶樣得干茶樣約100 g備用。

1.1.2 儀器與試劑 儀器：超純水儀（Millipore）、分析天平（Denver）、水浴鍋（北京精瑞）、離心機(jī)（BECKMAN）、高效液相色譜儀（waters2695）；試劑：兒茶素類化合物標(biāo)樣（美國(guó)SIGMA公司）、甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、乙酸（色譜純）。

1.2 方 法

稱取茶粉1.00 g加入100 mL 80%甲醇，30℃水浴超聲提取20 min，濾紙過濾，濾渣洗滌3次后合并濾液，定容至200 mL。0.22 μm濾膜過濾后備用[7]。

工藝流程：鮮葉→攤青→微波殺青→干燥→磨樣→分析。

1.3 色譜檢測(cè)條件

采用GB/T8313-2008中的方法進(jìn)行檢測(cè)[8]。流動(dòng)相：A為甲醇，B為乙腈；流動(dòng)相的梯度為從10%的乙腈到 60%的乙腈，流速1 mL/min，在36 min內(nèi)完成；色譜柱為waters-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。每次檢測(cè)完成，系統(tǒng)平衡15 min后重復(fù)3次進(jìn)樣。所得數(shù)據(jù)用Empower軟件處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 HPLC圖譜分析

如圖1～5所示，通過對(duì)5個(gè)樣品HPLC圖譜的分析，共確定了7個(gè)色譜峰作為“老班章”老樹茶的特征指紋峰。從指紋圖譜可知，出峰順序?yàn)闆]食子酸（GA）、表沒食子兒茶素（EGC）、右旋兒茶素（C）、表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）。

2.2 主成分分析

如表1～3所示，“老班章”老樹1蒸青樣與其他4個(gè)茶樣相比較，沒食子酸（GA）、表沒食子兒茶素（EGC）、右旋兒茶素（C）含量均相對(duì)較低，出峰時(shí)間較早，相應(yīng)的峰面積也較小，但表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他4個(gè)茶樣，其內(nèi)含成分含量的高低決定了老班章曬青毛茶各產(chǎn)茶村茶葉風(fēng)味品質(zhì)的差異。老曼娥老樹的沒食子酸（GA）、表沒食子兒茶素（EGC）、右旋兒茶素（C）、表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）含量則均低于其他產(chǎn)茶村，進(jìn)一步從理論上解釋了“老班章”茶葉品質(zhì)風(fēng)味特殊的原因跟其內(nèi)含成分是息息相關(guān)的。雖然各茶樣的內(nèi)含成分含量高低差異很大，但均有穩(wěn)定的出峰時(shí)間和峰面積，重復(fù)性較好。

表1 “老班章”老樹茶兒茶素單體成分 （mg/g）

表2 “老班章”老樹茶HPLC檢測(cè)出峰時(shí)間 （min）

表3 “老班章”老樹茶HPLC檢測(cè)峰面積 （uv·s）

3 結(jié) 論

“老班章”老樹茶由于其特殊的品質(zhì)，其指紋圖譜也有許多特征性和穩(wěn)定性。其指紋圖譜數(shù)字化體現(xiàn)了其所含的化學(xué)成分和各自的含量，確定了7個(gè)色譜峰作為“老班章”老樹茶的特征指紋峰，其出峰順序?yàn)闆]食子酸（GA）、表沒食子兒茶素（EGC）、右旋兒茶素（C）、表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG），雖各產(chǎn)茶村的內(nèi)含成分差異較大，但均有穩(wěn)定的出峰時(shí)間和峰面積，重復(fù)性較好。

從采集到的指紋圖譜可以看出，“老班章”老樹茶的HPLC指紋圖譜特征峰或特殊峰面積明顯，出峰時(shí)間、峰面積具有較強(qiáng)的選擇性，綜合結(jié)果能特征性地區(qū)分“老班章”老樹茶所含主要成分的特殊含量，成為自身的“化學(xué)條碼”。“老班章”老樹茶指紋圖譜庫(kù)的建立，對(duì)于“老班章”老樹茶質(zhì)量監(jiān)督和生化成分檢測(cè)工作的開展具有重要意義，且建立指紋圖譜庫(kù)切實(shí)可行，更多研究有待于進(jìn)一步開展試驗(yàn)。

[1]楊小鵬.“老班章”茶尋求“地理標(biāo)志”保護(hù)[J].中國(guó)品牌，2001，（4）：110-111.

[2]張 梁，李 寧，袁 鵬，等.普洱熟茶和普洱生茶的指紋圖譜研究[J].中國(guó)藥學(xué)，2011，（4）：352-359.

[3]廖夫生.HPLC法同時(shí)測(cè)定茶葉中4種兒茶素類成分[J].中國(guó)茶葉，2008，（9）：24-25.

[4]夏麗飛，梁名志，王 麗，等.勐海曬青茶品質(zhì)化學(xué)研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012，28（16）：239-244.

[5]成 浩，王麗鴛，周 健，等.基于化學(xué)指紋圖譜的綠茶原料品種判別分析[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，41（8）：2413-2418.

[6]劉 英，吳曙光，尹 州，等.指紋圖譜技術(shù)在茶葉研究上的應(yīng)用[J].茶葉科學(xué)，2013，33（1）：13-20.

[7]宛曉春.茶葉生物化學(xué)（第三版）[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2003.

[8]寧井銘，張正竹，谷勛剛，等.云南曬青毛茶HPLC指紋圖譜的研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2009，35（9）：36-40.