健脾化濕顆粒對IBS-D模型大鼠血清P物質(zhì)及ET表達的影響＊

趙立波，王迎寒，劉玉玲，張曉峰，董岫巖，郭洪杰△

（1.承德護理職業(yè)學(xué)院涉外護理系，河北承德 067000；2.河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，河北承德 067000；3.承德醫(yī)學(xué)院附屬肛腸醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科，河北承德 067000）

健脾化濕顆粒對IBS-D模型大鼠血清P物質(zhì)及ET表達的影響＊

趙立波1，王迎寒2，劉玉玲2，張曉峰2，董岫巖3，郭洪杰3△

（1.承德護理職業(yè)學(xué)院涉外護理系，河北承德 067000；2.河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，河北承德 067000；3.承德醫(yī)學(xué)院附屬肛腸醫(yī)院中醫(yī)內(nèi)科，河北承德 067000）

目的觀察健脾化濕顆粒對腹瀉型腸易激綜合征（IBS-D）大鼠血清P物質(zhì)（SP）及內(nèi)皮素（ET）表達的影響，探討其治療機制。方法取清潔級Wistar大鼠60只，平均分為對照組、模型組及健脾化濕顆粒低、中、高劑量組和陽性對照的匹維溴銨組。除對照組外各組大鼠束縛應(yīng)激配合番瀉葉煎劑溶液灌胃復(fù)制模型。造模成功后，予以相應(yīng)藥物治療。實驗過程中觀察各組大鼠大便性狀及大便次數(shù)。實驗結(jié)束后酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）觀察血清中ET、SP水平變化。結(jié)果與模型組比較，各治療組大鼠腹瀉癥狀明顯改善；健脾化濕高劑量組與匹維溴銨組大鼠癥狀改善更為明顯，組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。高劑量組、中劑量組、匹維溴銨組與模型組比較，血清SP水平下降明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；高、中劑量組與匹維溴銨組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。高劑量組、中劑量組、匹維溴銨組與模型組比較，血清ET水平升高明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中健脾化濕中、高劑量組組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明有一定劑量依賴關(guān)系。結(jié)論健脾化濕顆粒可明顯改善IBS-D模型大鼠胃腸功能，其作用機制可能與降低血清SP水平，提高血清ET水平有關(guān)。

腸易激綜合征；腹瀉；P物質(zhì)；內(nèi)皮素；健脾化濕；中草藥

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是常見的一種胃腸功能紊亂性疾病，是以腹痛、腹部不適、伴有大便性狀改變和排便行為改變?yōu)樘卣鞯陌Y候群［1］。臨床分為腹瀉型（IBSD）、便秘型（IBS-C）、腹瀉便秘交替型（IBS-A）和未定型（IBSU）4個亞型，其中以IBS-D最為常見［2］。其發(fā)病機制尚不明確，目前公認(rèn)為腦－腸軸障礙［3］及胃腸肽激素表達異常在IBS-D的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用［4］。西醫(yī)治療本病主要采用對癥治療，以個體化為前提的綜合治療方法［5］。在合理飲食，避免生冷刺激等前提下配合藥物治療。雖見效迅速，便遠(yuǎn)期效果不佳，復(fù)發(fā)率高。而中醫(yī)藥治療IBS-D已取得了良好效果，長期用藥不良反應(yīng)小，遠(yuǎn)期效果好［6］。本實驗從實驗大鼠血清胃腸肽激素P物質(zhì)（SP）、內(nèi)皮素（ET）水平的變化，探討健脾化濕顆粒治療IBS-D可能的作用機制，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 清潔級6周齡 Wistar大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量（170±20）g，合格證編號：Scxk（冀）2009-0004，由河北省實驗動物中心提供；番瀉葉加水浸泡煎煮濃縮至生藥0.6g／mL備用；健脾化濕顆粒：由炙黃芪、益智仁、炒白術(shù)、砂仁、防風(fēng)、炒白芍、陳皮、炙甘草、茯苓、烏藥組成，由承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所分析室制備完成；匹維溴銨片（批號：624065），法國蘇威制藥公司生產(chǎn)，用蒸餾水配成3mg／mL溶液。酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）ET、SP試劑盒（批號：20120423），購自德國博士德生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 實驗動物分組及造模 適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，平均分為對照組、模型組、健脾化濕顆粒低劑量組（低劑量組）、健脾化濕顆粒中劑量組（中劑量組）、健脾化濕顆粒高劑量組（高劑量組）和陽性對照（匹維溴銨組），每組各10只。IBS-D動物模型采用喬氏法造模［7］。除對照組外，其余各組大鼠實驗前10h禁食，自由飲水。模型組、匹維溴組及低、中、高劑量組大鼠分別給予番瀉葉煎劑（0.6g／mL）灌胃（每只按10mL／kg），每日1次，在灌服完番瀉葉煎劑1h后即用粗制棉繩束縛大鼠的兩后肢，使之行動不便，煩躁不安，造成一定的應(yīng)激刺激，束縛2h，持續(xù)2周；而對照組全程只予以生理鹽水灌胃（每只10mL／kg）。每天觀察大鼠毛色、大便、飲食等情況。對照組大鼠便次少、大便成型、進食穩(wěn)定、毛色光亮、活躍。而模型組大鼠皮毛松弛、無光澤、便質(zhì)稀、便次多、進食量下降、飲水量增多、臭穢味明顯。上述模型鼠變化情況與文獻記載及臨床IBS-D患者癥狀相一致，且上述癥狀持續(xù)存在，提示IBS-D動物模型成功。

1.2.2 治療方法 健脾化濕顆粒低、中、高劑量組給藥濃度分別為生藥1.5g／mL、2.5g／mL、4.0g／mL，匹維溴銨組給藥濃度為3mg／mL，均以每只10mL／kg劑量灌胃給藥。對照組和模型組給予等容量生理鹽水。每天1次，連續(xù)2周。

1.2.3 一般情況觀察 每天觀察各組大鼠飲食、飲水、排泄、活動、精神狀態(tài)、毛色等情況。

1.2.4 血清中SP、ET水平測定方法 實驗結(jié)束后，各組大鼠乙醚麻醉，自腹主動脈取血5mL，采血時不加抗凝劑，室溫，靜置1～2h，1 000×g離心15min，取上清液－20℃冰箱中分裝保存?zhèn)溆谩LISA檢測血清中SP、ET水平，操作步驟嚴(yán)格按照劑盒說明進行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行分析，所有測定結(jié)果用±s表示，各組間計量數(shù)據(jù)的差異比較采用單因素方差分析。取α＝0.05為檢驗標(biāo)準(zhǔn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

本結(jié)果顯示，IBS-D模型大鼠血清SP水平顯著高于對照組（P＜0.01），匹維溴銨組、高劑量組、中劑量組、低劑量組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。高、中劑量組與匹維溴銨組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。提示健脾化濕顆粒可明顯改善IBS-D模型大鼠血清SP水平，且有一定的劑量依賴關(guān)系。IBS-D模型大鼠血清ET水平較對照組明顯降低（P＜0.01），各治療組大鼠血清ET水平較模型組均增高，其中中、高劑量組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。與匹維溴銨組比較，中、高劑量組效果明顯，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。而低劑量組效果較差（P＜0.01），見表1。

表1 各組大鼠胃腸肽激素SP、ET表達比較（±s，pg／mL）

表1 各組大鼠胃腸肽激素SP、ET表達比較（±s，pg／mL）

a：P＜0.01，b：P＜0.05，與對照組比較；c：P＜0.01，d：P＜0.05，與模型組比較。

組別 n SP ET對照組 10 46.56±9.67c 258.63±15.01c模型組 10 78.62±8.98a 212.67±15.38a匹維溴銨組 10 58.88±7.34ad 251.92±16.87c低劑量組 10 67.71±7.29a 228.58±16.51a中劑量組 10 60.91±10.21ad 242.58±16.31bd高劑量組 10 54.59±7.05c 247.72±15.54c

3 討 論

近年來大量實驗研究表明，IBS-D的發(fā)病與胃腸肽激素水平異常密切相關(guān)［8］。胃腸激素種類繁多，其與神經(jīng)系統(tǒng)一起調(diào)節(jié)消化器官的運動、分泌和吸收功能［9］。SP、ET是兩種重要的胃腸激肽。SP是第1個被確認(rèn)的、雙重分布的由11個氨基酸組成的多肽［10］，在腸道主要分布于近端小腸和結(jié)腸，它既可以激素的形式，亦可以神經(jīng)遞質(zhì)形式參與胃腸道運動的調(diào)控。可促進胃腸平滑肌和括約肌收縮、胃腸蠕動，參與內(nèi)臟痛覺反射及擴張內(nèi)臟血管等功能。謝建群等［11］實驗研究發(fā)現(xiàn)，IBS-D模型大鼠血漿SP水平明顯升高，治療后血清SP水平明顯下降；而有的學(xué)者臨床研究發(fā)現(xiàn)IBS患者血漿SP未發(fā)現(xiàn)顯著變化［12］。ET是由21個氨基酸組成的活性多肽［13］，是一種神經(jīng)遞質(zhì)和調(diào)節(jié)肽，在胃、空腸、回腸和結(jié)腸均有ET和ET的受體存在，其可使平滑肌收縮，參與胃腸節(jié)律運動調(diào)節(jié)。王麗華等［14］研究結(jié)果顯示，脾氣虛IBS組患者較對照組血清ET明顯降低（P＜0.01），致胃腸運動失調(diào)。但也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，IBSD（濕熱證）患者血清ET明顯高于對照組，治療后血清ET水平明顯低于治療前。

本實驗研究發(fā)現(xiàn)，IBS-D模型大鼠胃腸功能紊亂，便次多、便質(zhì)稀同時血清SP、ET水平均有明顯改變。其中IBS-D模型大鼠血清中SP水平明顯升高，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。治療后，健脾化濕各劑量組、匹維溴銨組大鼠血清中SP水平顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。IBS-D模型大鼠血清中ET水平較對照組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。各組治療后血清ET水平較模型組均有增高。其中、高劑量組與匹維溴銨組ET水平升高最為明顯。提示IBS-D模型大鼠發(fā)病機制可能與血清SP、ET水平表達異常有關(guān)。

IBS-D屬中醫(yī)“泄瀉”“痛泄”“久泄”等的范疇［15］。本病病位在腸，基本病機為肝郁脾虛、脾虛濕盛。健脾化濕顆粒在經(jīng)驗方健脾化濕湯基礎(chǔ)上，通過現(xiàn)代工藝手段改變劑型，既保存了原有的療效，又適應(yīng)現(xiàn)代社會的用藥理念。方中重用炙黃芪、益智仁，輔以炒白術(shù)、砂仁補氣健脾和芳香化濕；防風(fēng)辛能散肝，香能舒脾，風(fēng)能勝濕止瀉，為理脾引經(jīng)之要藥；陳皮、茯苓行氣健脾，燥濕和胃；白芍養(yǎng)血斂陰，柔肝緩急，白芍配伍甘草又可緩急止痛。烏藥行氣止痛，全方緊緊抓住脾虛濕盛和肝氣郁結(jié)環(huán)節(jié)，諸藥配合緊密，健脾化濕，疏肝解郁，從而使肝氣條達，脾胃升降功能恢復(fù)正常而腹痛、便溏癥狀消除。

綜上所述，在改善IBS-D模型大鼠腹痛、便次增多等方面，健脾化濕顆粒對IBS-D大鼠具有很好的治療效果，其作用機制可能是通過降低血清中SP水平，提高血清中ET水平，減弱神經(jīng)介導(dǎo)的胃腸道運動與分泌，提高內(nèi)臟痛閾，消除腸道過敏癥狀，改善腹痛或腹部不適、排便異常等癥狀而完成。

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Effect of Jianpihuashi Granules on expression of serum substance P and ET of diarrhea-predominant irritable bowel syndrome rats＊

ZhaoLibo1，WangYinghan2，LiuYuling2，ZhangXiaofeng2，DongYouyan3，GuoHongjie3△
（1.DepartmentofForeign-RelatedNursing，ChengdeNursingVocationalCollege，Chengde，Hebei067000，China；
2.HebeiProvincialKeyLaboratoryofResearchandDevelopmentofChineseHerbs，Chengde，Hebei067000，China；
3.DepartmentofChineseInternalMedicine，AffiliatedAnorectalHospital，ChengdeMedicalCollege，Chengde，Hebei067000，China）

ObjectiveTo observe the effect of Jianpihuashi（JPHS）Granules on the expression of substance P（SP）and endothelin（ET）in diarrhea-predominant irritable bowel syndrome（IBS-D）rats and to explore its therapeutic mechanism.MethodsSixty clean-level Wistar rats were randomly divided into the control group，model group，low-dose，middle-dose and high-dose JPHS Granules groups and the positive control group（Dicetel group）.Except the control group，the other groups were performed the restraint stress combined with folium sennae decoction by gavage to establish D-IBS rat model.After the success of the model construction，the corresponding medication was given.The stool property and times were observed during the experiment.After the end of the experiment，ELISA was applied to detect the change of ET and SP levels.ResultsCompared with the model group，the diarrhea symptoms in the various medication groups were obviously improved；which in the high-dose JPHS Granules group and the Dicetel group were improved more significantly，but the difference between these two groups had no statistical significance.Compared with the model group，the serum SP level in the high-dose，middle-dose JPHS granules groups and the Dicetel group was obviously decreased，the difference showed the statistical significance（P＜0.05）.Compared with the model group，serum ET level in the highdose，middle-dose JPHS Granules groups and the Dicetel group was obviously increased，the difference showing statistical significance（P＜0.05），in which，the difference between the high-dose and the middle-dose JPHS Granules groups had statistical significance（P＜0.05），which indicating that the certain dose-dependence relation existed between them.ConclusionJPHS Granules can obviously improve the gastrointestinal function of IBS-D model rats，its effect mechanism may be related with decreasing the serum SP level and increasing the serum ET level.

irritable bowel syndrome；diarrhea；substance P；endothelin；invigorating spleen for eliminating dampness；chinese herbal medicine

10.3969／j.issn.1671-8348.2014.10.019

A

1671-8348（2014）10-1206-02

2010年河北省科技支撐計劃資助項目（10276105D-45）；2013年河北省科技支撐資助項目（13277797D）。

趙立波（1973－），高級講師，本科，主要從事中醫(yī)藥治療消化系統(tǒng)疾病的研究。△

，Tel：（0314）2291206；E-mail：guohongjie62＠163.com。

book=1210,ebook=451

2013-10-10

2013-12-07）

·論 著·