血小板膜外周型苯二氮卓受體在初發腦梗死后抑郁中的作用*

陳 嫄， 陳春富， 李聰聰， 肖 蕭

(山東大學附屬省立醫院神經內科，山東濟南 250021)

血小板膜外周型苯二氮卓受體在初發腦梗死后抑郁中的作用*

陳 嫄， 陳春富△， 李聰聰， 肖 蕭

(山東大學附屬省立醫院神經內科，山東濟南 250021)

目的：觀察卒中后抑郁(PSD)患者血小板膜外周型苯二氮卓受體(PBRs)的變化，探討PBRs在PSD中的作用。方法：卒中后抑郁組為初發腦梗死后PSD患者43例、腦梗死組為初發腦梗死患者59例、對照組為健康獻血者46名。采用Hamilton抑郁量表(HAMD)評定患者抑郁程度。提取外周血血小板膜，應用放射性配基［3H］PK11195結合實驗測定PBRs特異結合活性。結果：［3H］PK11195結合活性3組之間有顯著差異(P＜0.01)。與對照組［(298.2±25.1)pmol/(g protein)］比較，腦梗死組［3H］PK11195結合活性［(1 410.8±41.4) pmol/(g protein)］顯著升高(P＜0.01)。與腦梗死組比較，PSD組［3H］PK11195結合活性［(361.7±30.6)pmol/g protein］顯著降低(P＜0.01)。PSD組男性、女性患者之間比較，［3H］PK11195結合活性差異不顯著。PSD組［3H］PK11195結合活性與患者病程無顯著相關性(r=0.27，P＞0.05)，與HAMD評分呈顯著負相關(r=-0.44，P＜0.01)。結論：PSD患者血小板膜PBRs結合活性下降，PBRs影響抑郁程度。

卒中后抑郁;腦梗死;外周型苯二氮卓受體;血小板

迄今，關于卒中后抑郁(post-stroke depression，PSD)的發病機制尚不清楚。中樞神經系統以外也存在苯二氮卓結合位點，被稱為外周型苯二氮卓受體(peripheral-type benzodiazepine receptors，PBRs)，其結構、性質、功能與中樞型苯二氮卓受體均不相同，PBRs參與細胞呼吸，調節細胞增生，促進類固醇合成［1］。近幾年來已經證實，PBRs變化與焦慮癥、恐懼癥、創傷后應激反應等多種神經癥患者的臨床癥狀有關，但對抑郁癥與PBRs相關性研究報道較少，并且存在爭議。卒中后神經癥患者PBRs是否發生變化作者未見文獻報道。本文觀察首次發病的腔隙性梗死患者和PSD患者外周血血小板膜PBRs的變化，探討PBRs在PSD中的作用。

材料和方法

1 研究對象

2005年12月至2008年3月住院的首次發病的腔隙性梗死患者102例，診斷依據1995年全國第四屆腦血管病會議制定的腦血管病診斷標準，均經顱腦CT或MRI檢查證實梗死灶大小約5～15 mm。排除診斷包括:①既往有腦卒中病史;②既往有抑郁發作史及其它精神障礙;③意識障礙;④癡呆或明顯智能障礙;⑤失語;⑥存在腦葉皮質梗死;⑦存在靜息性腦梗死;⑧合并代謝紊亂、中毒、感染以及嚴重心、肺、肝、腎和免疫功能異常或其它嚴重的急性期軀體疾病;⑨合并變性疾病、惡性病變、先天性代謝異常疾病、外傷、腫瘤、炎癥或脫髓鞘等其它腦器質性疾病;⑩有企圖自殺史者。進入本研究的病例中，PSD組43例，男29例，女14例，平均年齡(66.4±7.8)歲，病程3～72 h，平均(43.8±23.5)h。診斷依據《中國精神障礙分類與診斷標準第3版》(CCMD-3)。腦梗死組59例，其中男39例，女20例，平均(65.9 ±8.1)歲，病程3～72 h，平均(45.5±22.9)h。對照組46人來自健康獻血者，其中男31例，女15例，平均(35.2±7.4)歲。3組間年齡差異有統計學意義(P＜0.01)，性別差異無統計學意義(P＜0.05)。PSD組與腦梗死組間病程差異無統計學意義(P＞0.05)。

2 主要藥品和儀器

［3H］PK11195購自PerkinElmer Life Science，純度97%，比活性83.5 Ci/mmol(3.09 TBq/mmol)。非標記PK11195和考馬斯亮藍均為Sigma產品。牛血清白蛋白為北京中山試劑公司產品，4℃保存。AvantiTMJ-3低溫高速冷凍離心機和Rotor J-30.50、Rotor J-21轉子均購自Beckman。

3 方法

3.1 神經功能缺損評定 用改良的愛丁堡-斯堪的那維亞神經功能缺損評分量表(the modified Edinburgh-Scandinavian stroke scale，MESSS)，最高分為45分，1～15分為輕型，16～30分為中型，31～45分為重型。

3.2 抑郁程度評定 采用 Hamilton抑郁量表(Hamilton depression rating scale，HAMD;17項版本)測量，HAMD總分＜8分為正常，≥8分為輕度抑郁，≥18分為中度抑郁，≥24分為重度抑郁。

3.3 血小板膜制備 上午8～9時取肘靜脈血20 mL，用3.8%枸櫞酸鈉5 mL抗凝，離心(180×g，4℃)15 min，吸取上清液富含血小板血漿，離心(1 500×g，4℃)15 min，棄上清，在沉淀中加入20 mL Tris-HCl(10 mmol·L-1，pH 7.4)低滲緩沖液，4℃，1～2 h完成溶血，離心(12 000×g，4℃)20 min得沉淀，用等滲磷酸鹽緩沖液(PBS，0.01 mol/L，pH 7.4)重復洗滌2次，制得白色絮狀物血小板膜，-80℃保存。

3.4 放射性配基結合實驗［2］取血小板膜標本在室溫下解凍，加入冰冷的0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.4)，混勻，每管調整蛋白質濃度約為1.0～2.0 g/L。取100 μL膜懸液，加入冰冷的0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.4)200 μL，非特異結合管中加入非標記PK11195，終濃度為1 μmol/L，孵育10 min，然后每管加入［3H］PK11195 10 μL，終濃度5 nmol/L，每個樣品均為雙復管，在4℃孵育60 min，迅速真空抽濾到玻璃纖維素濾膜上，用20 mL冰冷的Tris-HCl緩沖液重復洗滌濾膜終止反應。濾膜移至5 mL閃爍液(PPO 5 g/L，POPOP 0.1 g/L，溶媒甲苯∶曲拉通100=2∶1加至1 000 mL)內。暗適應至少8 h以減少化學發光，于L9800液體閃爍計數儀(Beckman)上計數，每個標本計數1 min。受體特異結合計算公式:［總計數(min-1)-非特異性結合計數(min-1)］÷總計數(min-1)×［H3］PK11195物質的量(pmol)÷樣品蛋白質量(g)。蛋白含量測定采用考馬斯亮藍法。

4 統計學處理

數據以均數±標準差(mean±SD)表示。采用SPSS 10.0統計軟件分析。其中，性別差異用Χ2檢驗。計量資料多組比較以年齡為協變量，采用協方差分析，組間比較采用LSD法;兩組病程及MESSS評分差異采用t檢驗。指標間相關性采用雙變量偏相關分析方法。以P＜0.05為差異有統計學意義。

結果

1 神經功能缺損及抑郁程度評分

PSD患者MESSS評分8～19分，平均(14.6± 3.4)分。HAMD總分17～27分，平均(21.8±4.5)分。腦梗死組MESSS評分8～21分，平均(12.8± 5.9)分。HAMD總分0～7分，平均(2.6±0.9)分。兩組SSS評分比較差異無統計學意義(P＞0.05)。

2 血小板膜PBRs結合活性的變化

外周血血小板膜PBRs結合活性3組之間差異有統計學意義(P＜0.01)。與對照組［(298.2± 25.1)pmol/(g protein)］比較，腦梗死組［3H］PK11195結合活性［(1410.8±41.4)pmol/(g protein)］顯著升高(P＜0.01)，PSD組［(361.7±30.6) pmol/(g protein)］顯著升高(P＜0.05)。與腦梗死組比較，PSD組［3H］PK11195結合活性顯著降低(P＜0.01)。

以年齡為協變量，PSD組男性［(355.4±33.2) pmol/(g protein)］、女性［(365.1±30.9)pmol/(g protein)］之間比較，［3H］PK11195結合活性差異無統計學意義(P＞0.05)。腦梗死組男性［(1 423.2± 53.2)pmol/(g protein)］、女性［(1 405.4±42.3) pmol/(g protein)］之間［3H］PK11195結合活性比較差異也無統計學意義(P＞0.05)。

3 相關性分析

以年齡為協變量，PSD組［3H］PK11195結合活性與患者病程無顯著相關性(r=0.27，P＞0.05)，與患者HAMD總分顯著相關(r=-0.44，P＜0.01);與HAMD因子抑郁情緒(r=-0.63，P＜0.01)、自殺(r=-0.67，P＜0.01)、入睡困難(r=-0.39，P＜0.01)、激越(r=-0.46，P＜0.01)、精神焦慮(r= -0.34，P＜0.05)、胃腸道癥狀(r=-0.31，P＜0.05)、全身癥狀(r=-0.32，P＜0.05)評分顯著相關，與其它因子評分無顯著相關性(P＞0.05)。

討論

近幾年來有關PBRs變化在焦慮癥、恐懼癥、創傷后應激反應中作用的報道有逐年增加趨勢。1999年Soreni等［3］通過病例對照研究發現，與年齡、性別匹配的對照組比較，9例住院的自殺3次以上年輕患者血小板PBRs密度(Bmax)下降了35%，與其他學者對廣泛性焦慮癥(generalized anxiety disorder，GAD)和創傷后應激障礙(post-traumatic stress disorder，PTSD)患者測得的結果類似，認為PBRs在人類自殺慢性應激反應中起著一定的作用。2005年Marazziti等［4］也發現自殺人群血小板［3H］PK11195結合密度顯著低于健康對照組。由于PBRs受應激和激素的調節，所以作者認為自殺人群血小板PBRs密度下降可能是應激狀態的非特異表現，另外可能源于與自殺傾向密切相關的甾體物質代謝異常。Johnson等［5］檢查了53例廣義社交恐怖癥(generalized social phobia，GSP)患者血小板PBRs常數即Bmax和解離常數(Kd)，發現患者組PBRs Bmax顯著低于對照組，提示PBRs與GSP有關。Gavish等［6］通過病例對照研究發現，與年齡、性別匹配的對照組比較，18例海灣戰爭PTSD患者血小板PBRs Bmax下降了62%，與其他學者對GAD患者測得的結果類似，認為PBRs下調是適應性反應，旨在防止在高度覺醒狀態下糖皮質激素的慢性過度產生。Micale等［7］用高膽固醇飼料喂養Wistar大鼠2個月，連續14 d給各組大鼠腹腔注射異喹啉PK11195(1 mg/kg，qd)，發現飼以標準飼料的實驗動物強迫游泳實驗積分下降，高膽固醇飼料及標準飼料組動物均出現了焦慮癥狀。1991年Rocca等［8］發現強迫癥(obsessive-compulsive disorder，OCD)患者血小板PBRs下降，但1993年Weizman等研究未發現 OCD患者血小板PBRs異常。Rocca等［9］認為上述結果上的差異與所選病例患者病程不同有關，他們再次利用受體結合方法和PCR技術檢測發現，與10例健康對照比較，8例慢性OCD患者淋巴細胞PBRs Bmax以及PBRs mRNA明顯減少，7例發作性OCD患者PBRs Bmax以及PBRs mRNA無顯著變化。如果將慢性OCD患者和發作性OCD患者數據合并統計，與10例健康對照比較PBRs Bmax差異不顯著。

迄今對于抑郁癥與PBRs的相關性研究報道較少，尚缺乏PSD患者PBRs變化的文獻資料。2001年Kurumaji等［10］檢查了情感障礙患者PBRs基因2種錯義突變情況，發現2種錯義突變等位基因頻率、基因型計數、單體型分布與雙相性情感障礙(躁抑癥)、抑郁癥沒有顯著關系，認為PBRs未參與遺傳性情感障礙易感性的發病機制。Nakamura等［11］利用PCR技術檢查了對91例恐懼癥(phobic disorder，PD)患者和178例對照者PBRs基因多態性，分析發現PD患者與對照間485G＞A(CGT→CAT)基因型(P＜0.05)和等位基因(P＜0.05)差異顯著，提示PBRs基因變異影響PD易感性。Weizman等［12］觀察了14例未經治療的抑郁患者和13例健康人血小板PBRs的變化，發現2組間血小板PBRs Bmax和Kd無顯著差異，Bmax與患者抑郁程度(HAMD積分、Beck抑郁量表積分)無顯著相關性，與患者焦慮程度(Hamilton焦慮量表積分)也無顯著相關性，由此認為嚴重抑郁有別于應激及某種焦慮癥，與PBRs的變化無關。2008年Chelli等［13］觀察了40例門診抑郁患者血小板膜PBRs的亞單位——異喹啉結合位點(18 kD translocator protein，TSPO;PBRs的代名詞)特異配基［3H］PK11195結合，發現與20例健康人比較，伴發分離性焦慮的抑郁患者TSPO密度顯著下降，但無分離性焦慮的抑郁患者TSPO密度無顯著變化。相關分析發現，TSPO密度與分離焦慮癥狀臨床量表評分及分離焦慮癥狀自評量表積分顯著相關，而與HAMD總分及HAMD分測驗焦慮/軀體癥狀因子分無顯著關系，表明TSPO過度表達有望成為分離性焦慮的生物學指標。近期利用大鼠、小鼠進行的一系列實驗結果均證實，PBRs新型配基YL-IPA08具有抗抑郁和抗焦慮作用［14］。本研究3組間年齡比較差異有統計學意義，為此多組間PBRs比較以年齡為協變量采用了協方差分析，以便排除年齡這一混雜因素的影響。研究發現，PSD組［3H］PK11195結合活性顯著低于病例對照腦梗死組，與HAMD總分顯著相關，與患者病程無顯著相關性，提示PBRs的變化參與了 PSD發病機制。相關分析結果顯示［3H］PK11195結合活性主要影響自殺、抑郁情緒等靶癥狀，其次是激越、入睡困難，也影響精神焦慮、胃腸道癥狀及全身癥狀。一般認為，急性應激PBRs表達上調，慢性應激PBRs表達下降。鑒于此，推測PSD的應激反應可能系慢性應激類，除了腦部變化外，可能涉及其它臟器PBRs的變化，有待進一步研究。

綜上所述，PSD患者血小板膜［3H］PK11195結合活性降低，與患者抑郁程度顯著相關，提示PBRs有望成為PSD的生物學指標及藥物干預的新靶點。由于所選病例基線資料參差不齊，未分析受體學參數的變化以及不同病變部位對［3H］PK11195結合活性的影響。同時因入組的新診斷病例數偏少，所以本研究結果尚需擴大樣本量進一步驗證。

［1］ 程 超，陳春富.外周型苯二氮卓受體與腦缺血［J］.國際腦血管病雜志，2009，17(4):305-308.

［2］陳春富，郎森陽，左萍萍，等.血小板膜與腦細胞線粒體和突觸體外周型苯二氮卓受體的相關性及生物學意義［J］.吉林大學學報:醫學版，2006，32(4):582-585.

［3］Soreni N，Apter A，Weizman A，et al.Decreased platelet peripheral-type benzodiazepine receptors in adolescent inpatients with repeated suicide attempts［J］.Biol Psychiatry，1999，46(4):484-488.

［4］Marazziti D，Dell＇Osso B，Baroni S，et al.Decreased density of peripheral benzodiazepine receptors in psychiatric patients after a suicide attempt［J］.Life Sci，2005，77 (26):3268-3275.

［5］Johnson MR，Marazziti D，Brawman-Mintzer O，et al.Abnormal peripheral benzodiazepine receptor density associated with generalized social phobia［J］.Biol Psychiatry，1998，43(4):306-309.

［6］Gavish M，Laor N，Bidder M，et al.Altered platelet peripheral-type benzodiazepine receptorin posttraumatic stress disorder［J］.Neuropsychopharmacology，1996，14 (3):181-186.

［7］Micale V，Scapagnini G，Colombrita C，et al.Behavioral effects of dietary cholesterol in rats tested in experimental models of mild stress and cognition tasks［J］.Eur Neuropsychopharmacol，2008，18(6):462-471.

［8］Rocca P，Ferrero P，Gualerzi A，et al.Peripheral-type benzodiazepine receptors in anxiety disorders［J］.Acta Psychiatr Scand，1991，84(6):537-544.

［9］Rocca P，Beoni AM，Eva C，et al.Lymphocyte peripheral benzodiazepine receptor mRNA decreases in obsessivecompulsive disorder［J］.Eur Neuropsychopharmacol，2000，10(5):337-340.

［10］Kurumaji A，Nomoto H，Yamada K，et al.No association of two missense variations of the benzodiazepine receptor (peripheral)gene and mood disorders in a Japanese sample［J］.Am J Med Genet，2001，105(2):172-175.

［11］ Nakamura K，Yamada K，Iwayama Y，et al.Evidence that variation in the peripheral benzodiazepine receptor (PBR)gene influences susceptibility to panic disorder［J］.Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet，2006，141B(3):222-226.

［12］Weizman A，Burgin R，Harel Y，et al.Platelet peripheraltype benzodiazepine receptor in major depression［J］.J Affect Disord，1995，33(4):257-261.

［13］Chelli B，Pini S，Abelli M，et al.Platelet 18 kDa Translocator Protein density is reduced in depressed patients with adult separation anxiety［J］.Eur Neuropsychopharmacol，2008，18(4):249-254.

［14］Zhang LM，Zhao N，Guo WZ，et al.Antidepressant-like and anxiolytic-like effects of YL-IPA08，a potent ligand for the translocator protein(18 kDa)［J］.Neuropharmacology，2013，81C:116-125.

Effects of peripheral-type benzodiazepine receptors in platelet membrane on patients with depression after first attack of cerebral infarction

CHEN Yuan，CHEN Chun-fu，LI Cong-cong，XIAO Xiao
(Department of Neurology，Shandong Provincial Hospital Affiliated to Shandong University，Jinan 250021，China.E-mail: chencf301@163.com)

AIM:To evaluate the changes of peripheral-type benzodiazepine receptors(PBRs)in platelet membrane in post-stroke depression(PSD)patients and to investigate the effects of PBRs on PSD.METHODS:Fortythree patients with PSD，fifty-nine patients with first-ever cerebral infarction and fifty-six healthy volunteers participated in this study.Platelet membrane in venous blood was prepared.Binding assay of the radioactive PBRs antagonist［3H］PK11195 to platelet membrane was performed.RESULTS:A significant difference of［3H］PK11195 binding was found among the 3 groups(P＜0.01).Compared with the healthy volunteers［(298.2±25.1)pmol/(g protein)］，a highly significant increase in［3H］PK11195 binding was observed in platelet membrane in the patients with first attack of cerebral infarction［(1 410.8±41.4)pmol/(g protein)，P＜0.01］.Compared with the patients with first attack of cerebral infarction，a significant reduction in［3H］PK11195 binding was detected in platelet membrane in the patients with PSD［(361.7±30.6)pmol/(g protein)，P＜0.01］.In the patients with PSD，no significant difference of［3H］PK11195 binding was found between men and women(P＞0.05).［3H］PK11195 binding was related to the score of Hamilton depression rating scale(r=-0.44，P＜0.01)but not to the duration of cerebral infarction(r=0.27，P＞0.05).CONCLUSION:PBRs binding activity in platelet membrane decreases in the patients with PSD and affects the degree of depression.

Post-stroke depression;Cerebral infarction;Peripheral-type benzodiazepine receptors;Blood platelets

R743.3;R749.4

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2014.03.028

1000-4718(2014)03-0543-04

2013-10-14

2014-01-07

山東省自然科學基金重點項目(No.Z2007C03)

△通訊作者Tel:0531-67886354;E-mail:chencf301@163.com