某地區人乳頭瘤病毒的基因型分布

袁愛萍 張 萍

（上海市松江區婦幼保健院宮頸科，上海 201600）

某地區人乳頭瘤病毒的基因型分布

袁愛萍 張 萍

（上海市松江區婦幼保健院宮頸科，上海 201600）

目的了解上海市松江地區人乳頭瘤病毒（HPV）基因型在宮頸疾病的感染狀況及其各亞型的分布。方法運用凱普導流雜交HPV DNA檢測法對上海松江地區2012年1042例宮頸門診就診患者進行21種HPV基因型的分型檢測，分析常見感染亞型和分布特點。結果研究人群HPV總陽性率51.06%，常見的10種高危型HPV16、58、52、33、53、CP8304、31、66、18、39。常見的2種低危型為6、11。多重感染的比例為33.95%，其中以二重感染最多見。結論該地區HPV感染率和多重感染率均較高，常見感染亞型總體符合亞洲人群的分布規律，又有獨特的區域分布特點，值得重視。

乳頭狀瘤病毒；導流雜交；基因型；宮頸腫瘤

宮頸癌是最常見的女性生殖道腫瘤，在全球婦女癌癥病死率中僅次于乳腺癌，中國病例占世界1/3，目前依然嚴重威脅著中國婦女的健康，近年來我國宮頸癌發病呈年輕化趨勢，宮頸癌早期患者比例明顯增多。HPV是宮頸癌及宮頸癌前病變的主要病因，已列為許多國家宮頸癌及癌前病變常規篩查指標，其分型檢測對宮頸癌的篩查及治療意義深遠。2012年美國宮頸癌篩查新指南提出：30歲以上婦女HPV聯合細胞學篩查為首選[1]。使用高危型HPV DNA初篩檢測可檢出90%以上CIN2/3或癌癥，當細胞學以交界性或更嚴重改變為截斷點時，高危型HPV檢測的敏感度比細胞學高25%左右。這對宮頸疾病的初篩、ASCUS分流及治療追蹤都具有重要意義[2]。更說明HPV篩查宮頸癌的意義越來越重大。而且HPV DNA檢測通常具有97%～100%的陰性預測值。較高的陰性預測值意味著，如果HPV DNA為陰性，幾乎沒有患病的可能。HPV感染在有性生活史的女性中具有普遍性，但持續的HPV感染與宮頸病變及宮頸癌發生相關。HPV是一種小環狀雙鏈DNA病毒，目前世界上已發現110多型。荷蘭的隨機對照研究發現：不同型別HPV有不同的清除率，顯示高危HPV分型是有價值的。高危型HPV與宮頸癌及癌前病變的發生相關[3]。從感染HPV到發展成宮頸癌需要9～25年時間，對HPV分型檢測能有效篩查出高危人群并予以隨訪和干預，防止宮頸癌的發生。故我們運用凱普醫用核酸分子快速雜交系統對1042例上海松江婦保醫院宮頸門診患者（包括健康體檢人群）進行HPV感染的分型檢測，以了解上海松江地區HPV感染的基因型分布，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012年1月至12月松江婦幼保健醫院宮頸門診就診患者接受HPV基因型分型檢測1042例，年齡21～68歲，平均年齡（37.8±2.5）歲，來自上海松江地區或常住該地區婦女。

1.2 方法HPV DNA基因分型決策

由廣東凱普生物有限公司運用膜芯片導流雜交基因分型技術，進行21種HPV分型檢測（6、42、43、44、16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304）HPV分型檢測采用專用的HPV采樣刷，置于宮頸口逆時針方向旋轉3～5圈，并停留10秒以上，立即浸入專用的標本儲存管，及時送檢。檢出16中高危亞型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68及CP8304），另有HPV6、11、42、43和44等5中低危亞型。有2型或2型以上者為多重感染。實驗步驟如下：①樣本DNA提取。采用凱普生物化學科技公司的基因組抽屜試劑盒。②PCR擴增。

每一批同時擴增HPV18型陽性對照和陰性對照各1份。反應條件為95 ℃，9 min，95 ℃， 20 s，55 ℃，30 s，72 ℃，30 s擴增40個循環，72 ℃延伸5 min。③導流雜交（采用醫用核酸分子快速雜交儀及配套試劑盒，具體步驟參見雜交試劑盒說明書。④結果判斷（根據芯片上HPV基因型分布的相應位點判斷為何種基因型）

2 結 果

2.1 HPV DNA基因型檢測

共檢測到20種基因型，未發現低危型亞種43型。

2.2 HPV DNA基因型分布

各亞型感染率分布從高到低依次為16型170例、58型110例、52型111例、33型58例、53型51例、31型49例、CP8304型47例、68型42例、66型34例、18型32例、6型23例、56型17例、39型17例、45型16例、11型16例、51型11例、35型10例、42型7例、59型5例、44型4例。

2.3 HPV的單一和多重感染

單一感染370例、二重感染133例、三重感染39例、四重感染15例、五重感染3例。

3 討 論

宮頸癌是較常見的婦科惡性腫瘤之一，據統計全球每年的宮頸癌新發病例約46萬，每年宮頸癌的死亡病例約25萬。在我國，每年宮頸癌的新發病例數超過13萬，約占全球的1/4～1/3，發病率僅次于乳腺癌而位居第二，并呈年輕化及上升趨勢。高危型別HPV感染的婦女中有相當一部分可發展成子宮頸癌前病變，因此定期檢查高危型HPV感染能有效地判斷子宮頸癌的發病風險。

我們采用的凱普核酸分子快速雜交基因分型技術，既能確定感染的HPV亞型，又能判斷多重感染，可以對CIN治療后進行預后判斷和治療監測。該技術建立在基因芯片和導流雜交技術基礎之上，其特點就是靈敏、特異、簡便快速等[4，5]。我們對1042例標本的HPV分型檢測，有如下發現：

3.1 常見的HPV基因型存在地理差異

高危型HPV持續感染是宮頸癌及癌前病變發生發展的必要條件，HPV基因型分布有地區差異，與宮頸癌相關的型別也不盡相同。除16型居首位以外，其余型別不同的地區略有差異[6]。在全球范圍內，前10位分別是HPV16、18、58、52、51、31、56、33、45、53。廖京平[7]對北京大學第一醫院報道門診人群中HPV16、58和52是這一人群中最常見的HPV型別，本組調查與其相一致。畢蕙等[8]對CIN患者HPV亞型檢測居前5位的依次為16、58、52、33和31。彭永排等[9]對廣州市1285例志愿者宮頸人乳頭瘤病毒感染調查顯示前5位的HPV亞型是52、31、16、58和53型。蔣衛平等[10]對浙江麗水地區288例HPV感染檢出居前5位的依次是16、58、52、33、53，其余的感染率均低于10%。周楊楊[11]對江蘇淮安門診患者HPV感染調查為：HPV感染總陽性率55.6%，亞型高低依次為16、58、52、53、33。我們的研究中，病例均來源于上海松江地區，檢出率居前5位的依次是16、58、52、33、53，其余的亞型感染率均低于10%。16型感染率最高，沒有明顯的地區差異，而其他型別的感染率存在較大的地理差異，尤其是18和45型，在國內的報道中感染率均不是很高，HPV18在歐美比較常見，而HPV45在非洲常見，除16型外我們得出58、52、33和53的感染率較高，與畢蕙等[8]報道的基本一致，尤其與蔣衛平等[10]報道的數據非常接近，而其他研究者的結果相差較大，可能與接診患者不同有關。而上海松江地區與浙江地區較為臨近，從而進一步表明常見的HPV感染的基因型存在明顯的人群和地域特點。

3.2 HPV多重感染

本研究HPV多重感染的比例為33.93%。根據美國已經公布的數據，這些女性中約有1%將患有CIN2、3。多重HPV感染以HPV16/18亞型為主。不同地區的差異：亞洲國家HPV多重感染組合中16，52，58是最常見的亞型中以HPV16、45、58、18、31、33和52為主[12]。

3.3 我們未檢測到低危型43型，可能與這一地區人群本身未感染這一型別HPV，也有可能樣本量不夠，這一型別感染數極低有關，需進一步研究。明確一個地區 HPV流行的主要型別，對評估患者預后，指導臨床制定合理的治療方案有重要意義；與此同時，還可為科研人員研制有針對性的基因疫苗提供可靠依據，為臨床治療作出有益參考。

[1] Saslo W.The new U.S guidelines converged[R].2012.

[2] 楊怡卓.HPV檢測與宮頸相關病變的診治進展[J].中華現代婦產科雜志,2007,4(4):304.

[3] Muno Z,Bosch FX.Epidemiologic classication of human papillomavirus types associated with cervical[J].N Engl J Med,2003,348(6):518-527.

[4] Lee SA,Kang D.Multiple HPV infection in cerical cancer screened by HPV DNA Chip[J].Caner Lett,203,198(2):187-192.

[5] Kim CJ,Jeong JK.HPV oligonucleotide microarray-based detection of HPV genotypes in cervical[J].Gynecol Oncol,2003,89(2):210-217.

[6] Bosch FX,Burchell AN.Epidemiology and natural history of human papillomavirus infections[J].Vaccine,2008,26(52):K1-K16.

[7] 廖京平.要真正理解和重視人乳頭瘤病毒感染[J].中國實用婦科與產科雜志,2010,26(5):322.

[8] 畢蕙,趙健.人乳頭瘤病毒感染亞型與宮頸上皮內瘤變的相關性[J].中國實用婦科與產科雜志,2010,26(5):362.

[9] 彭永排,林仲秋.廣州市1285例志愿者宮頸人乳頭瘤病毒感染調查[J].國際醫藥衛生導報,2010,16(1):101.

[10] 蔣衛平.麗水地區人乳頭瘤病毒基因的分布[J].現代實用醫學, 2009,8(8):21.

[11] 周楊楊.人乳頭瘤病毒感染篩查結果分析[J].臨床檢驗雜志,2009, 27(3):221.

[12] 第一屆中國凱普HPV學術研討.HPV多重感染與宮頸病變關系探討[C].2012.

R737.33

B

1671-8194（2014）27-0185-02