亳菊總黃酮類的抗氧化活性研究

徐志南

（江蘇省濱海縣五汛鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院，江蘇 濱海 224532）

亳菊總黃酮類的抗氧化活性研究

徐志南

（江蘇省濱海縣五汛鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院，江蘇 濱海 224532）

目的研究亳菊總黃酮類的抗氧化活性。方法采用乙醇提取法，提取毫菊中的總黃酮類，以羥基自由基、FeSO4、亞硝酸鹽為材料，采用Fenton法測定亳菊總黃酮類對OH-、Fe2+、亞硝酸鹽清除率的影響；以卵黃脂蛋白脂質(zhì)為材料，采用Decker法測定亳菊總黃酮類對卵黃脂蛋白脂質(zhì)的抑制作用的影響。結(jié)果亳菊總黃酮類對OH-、Fe2+、亞硝酸鹽的清除作用隨亳菊總黃酮類濃度的升高而增強，對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化也有顯著的抑制作用并隨亳菊總黃酮類濃度升高而增強。結(jié)論亳菊總黃酮類化合物具有很好的抗氧化能力。

亳菊；總黃酮類；抗氧化活性；清除率

菊花為我國傳統(tǒng)用藥，其“苦、辛，微寒”，具有“清熱解毒、平肝”之功效[1]。菊花中主要含萜類和揮發(fā)油、黃酮類化合物等生物活性物質(zhì)。現(xiàn)代研究表明，菊花黃酮具有廣譜抗菌、抗病毒、降壓、增加冠脈血流量、清除活性氧自由基等生理活性。亳菊(C. morifolium Ramat‘Boju’)主產(chǎn)于安徽亳州市辛集、大寺、十九里鎮(zhèn)等地，為藥用菊花的主要來源之一，充分開發(fā)利用亳菊中的黃酮類成分具有十分重要的現(xiàn)實經(jīng)濟意義。本研究通過乙醇提取法，提取毫菊中的總黃酮類，采用Fenton和Decker法測定亳菊總黃酮類對羥基自由基、FeSO4、亞硝酸鹽的清除作用和對卵黃脂蛋白脂質(zhì)的抑制作用的影響，旨在為深入開展亳菊總黃酮類研究、拓寬亳菊綜合利用途徑奠定理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料：①材料：亳菊是購買于太和縣醫(yī)藥公司。②主要儀器：HH-1數(shù)顯恒溫水浴鍋；紫外燈；FA/JA電子天平；UV-757CRT型紫外可見分光光度計；微量定量移液器。③主要試劑：蘆丁；石油醚；乙醇；三氯化鋁；氫氧化鈉；硝酸鋁；亞硝酸鈉均為分析純。

1.2 方法：①Fe2+清除率測定：在各試管中加入不同質(zhì)量濃度的亳菊總黃酮類溶液，空白對照用體積分數(shù)95%的乙醇，陽性對照用等質(zhì)量濃度的EDTA代替樣品。再分別加入2 mmol/L的FeSO4 0.1 mL和5 mmol/L的Ferrozine 0.2 mL，最后各管用蒸餾水補至5 mL，室溫放置20 min，于562 nm處測定吸光度，根據(jù)吸光度的減少程度計算亳菊總黃酮類對Fe2+的螯合率。②對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化的抑制作用：用0.1 mol/L pH值7.4的PBS緩沖液配制體積分數(shù)為3.85%的卵黃懸液，分別吸取該懸液0.2 mL加入不同質(zhì)量濃度的樣品，空白對照為體積分數(shù)70%的乙醇。各管再加入0.1 mL 25 mmol/L FeSO4，用pH值7.4的PBS補充至2 mL，37 ℃恒溫震蕩15 min。取出后分別加入0.5 mL 20%的三氯乙酸，3500 r/min離心10 min。分別吸取上清液2 mL于試管中，加入0.28%的硫代巴比妥酸1 mL，加塞，放入沸水浴中15 min。冷卻后于波長532 nm處測定吸光度，根據(jù)吸光度計算抑制率。同時以等質(zhì)量濃度的BHT作為陽性對照。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆丁標準曲線的建立：得到回歸方程為：Y=12.093X-0.0009，R2為0.9990。蘆丁濃度在0.008～0.048 mg/mL濃度范圍內(nèi)與吸光度A之間有較好的線性關(guān)系。

2.2 亳菊黃酮類化合物對OH-的清除率的影響：羥基自由基屬于活性氧物種，是正常有氧代謝的副產(chǎn)物。在生理條件下，能導(dǎo)致生物體內(nèi)DNA，蛋白質(zhì)和脂質(zhì)氧化損傷。此外羥基自由基不僅破壞細胞膜的通透性，引起細胞內(nèi)外離子濃度失衡，而且可抑制細胞間隙通訊，使細胞信息傳遞通路發(fā)生障礙。據(jù)報道，中藥來源的黃酮可以有效地清除體內(nèi)過剩的活性氧自由基，保護細胞和線粒體的正常結(jié)構(gòu)和功能，防止對身體的傷害。亳菊黃酮類化合物對羥基自由基具有較高的清除率，隨著黃酮濃度的增加，其清除羥基自由基的能力進一步增強。在同等條件下，亳菊黃酮類化合物對羥基自由基的清除率優(yōu)于抗壞血酸。

2.3 毫菊黃酮類化合物對NO2-的清除率的影響：亞硝胺是一類重要的強致癌物質(zhì)，而亞硝酸鹽是亞硝胺合成的前體物質(zhì)。因此，阻斷亞硝胺的合成或清除亞硝酸鹽是防止癌癥的有效途徑之一。大量實驗證實，毫菊黃酮類化合物對亞硝酸鹽具有較高的清除率，隨著毫菊黃酮類化合物質(zhì)量濃度的增大，對亞硝酸鹽的清除作用增強，呈現(xiàn)較好的量效關(guān)系。在同等條件下，毫菊黃酮類化合物對亞硝酸鹽的清除率優(yōu)于抗壞血酸。

2.4 亳菊黃酮類化合物對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化抑制的影響：卵黃中以卵黃脂蛋白溶液為脂質(zhì)過氧化體系，測定了亳菊黃酮類黃酮類化合物所脂質(zhì)過氧化的抑制作用。亳菊黃酮類化合物對Fe2+誘導(dǎo)的卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化有較強的抑制作用，并且隨著其質(zhì)量濃度的增加，抑制率逐漸增大。在同等質(zhì)量濃度水平下亳菊黃酮類化合物對卵黃脂蛋白過氧化的抑制作用強于BHT。

3 討 論

大量研究證實，黃酮類化合物可通過酚羥基與自由基反應(yīng)生成較穩(wěn)定的半醌式自由基，從而終止自由基鏈式反應(yīng)，能有效地阻止脂質(zhì)過氧化引起的細胞破壞[2]，起到天然抗氧化劑的功效。本實驗采用乙醇浸提方法提取中毫菊中的黃酮類化合物，并考察亳菊總黃酮類的體外抗氧化的作用。通過四種方法來測定亳菊總黃酮類化合物的抗氧化能力，觀察亳菊對OH-、Fe2+、亞硝酸鹽的清除率和對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化的抑制作用。結(jié)果表明，亳菊總黃酮類對OH-、Fe2+、亞硝酸鹽的清除作用隨亳菊總黃酮類濃度的升高而增強，對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化也有顯著的抑制作用并隨亳菊總黃酮類濃度升高而增強，亳菊總黃酮類化合物有很好的抗氧化能力。

[1] 楊建雄.連翹葉黃酮的體外抗氧化作用[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2007,19(1):97-99.

[2] 朱慧,馬瑞君,吳雙桃,等.薇甘菊總黃酮的提取及清除羥自由基活性的測定[J].食品科學(xué),2010,31(6):70-73.

R282.710.3

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1671-8194（2014）29-0060-02