胱抑素C及其檢測方法的研究進展

葉余輝

（廣西北海市人民醫院檢驗科，廣西 北海 536000）

胱抑素C及其檢測方法的研究進展

葉余輝

（廣西北海市人民醫院檢驗科，廣西 北海 536000）

收集并比較關于胱抑素C及其測定方法的相關資料，探討其生物學特性，檢測方法的種類，特點及影響因素。胱抑素C水平是反映腎小球濾過功能的可靠指標，其診斷性能與菊糖清除率相當，顯著優于血尿素、血肌酐及內生肌酐清除率。臨床多選擇膠乳增強透射免疫比濁法或膠乳增強散射免疫比濁法作為常規檢測胱抑素C的測定方法。

胱抑素C；測定方法；生物學特性；腎小球濾過功能

菊糖清除率一直被認為是反映腎小球濾過率的“金標準”，但菊糖是外源性物質，測定方法繁雜，操作繁瑣，不能滿足對危急患者的快速檢測，因此尚未能在臨床上廣泛開展，使應用受到了限制[1]。胱抑素C（cystatin C，cys C）即半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白C，人體每日分泌量較恒定，相對分子質量為13×103，由于相對分子質量小，故可自由透過腎小球濾過膜。原尿中cys C幾乎全部被近端小管上皮細胞攝取、分解，并不回到血液中，尿中僅排出微量，能很好的替代血肌酐而成為一種新的反映腎小球濾過率的理想標志物[2]。本文就胱抑素C及其檢測方法的研究進展概述如下。

1 胱抑素C的生物學特性

半胱氨酸蛋白酶抑制劑(cysteine proteinase inhibitor，CPI)由Anastasi等在1983年從雞蛋清中分離純化得到，目前中文多稱之為胱抑素C。它是一種堿性非糖化的低相對分子質量分泌性蛋白質，等電點為9.3，相對分子質量為13×103，由122個氨基酸組成[3]。采用等電聚焦層析法可分離為CPIcⅠ和CPIcⅡ兩型。CPIcⅠ的一級結構中只有一條肽鏈，含兩個蛋氨酸殘基和四個半胱氨酸殘基及分子內二硫鍵。CPIcⅠ與CPIcⅡ具有相同的免疫學活性，對熱及堿性環境穩定。二者的一級結構具有同樣的N端，故有人認為CPIcⅡ是CPIcⅠ的磷酸化形式[4]。

胱抑素C的基因編碼位于人類第20號染色體短臂上，含3個外顯子，大約為7.3 KD，胱抑素C基因含有管家基因，因此能在所有組織恒定且持續地轉錄和表達。所有有核細胞均可合成胱抑素C并很快分泌到細胞外，無組織特異性，可分布于腎、肝、胰、腸、胃、肺及胎盤等幾乎全身所有組織，在腦脊液和精液中濃度最高，尿液最低[5]。

目前，對胱抑素C的生物學功能了解不多，其最重要的生理功能是調節半胱氨酸蛋白酶活性，在膠原代謝中能水解某些前激素蛋白，對組織蛋白酶B、瓜蛋白酶、無花果蛋白酶、溶酶體釋放的組織蛋白酶H和L具有抑制作用。直接與胱抑素C基因突變有關的疾病是遺傳性腦出血伴淀粉樣變，可造成腦血管破裂、腦出血等嚴重后果。胱抑素C在人體內每日分泌量較恒定，屬于內源性物質，其清除通過腎臟進行，腎小球濾過率決定了血清胱抑素C的水平，因此血清胱抑素C可作為反映腎小球濾過率變化的內源性標志物，某些疾病可引起胱抑素C在人體其他體液中含量的變化[6]。

2 胱抑素C的測定方法

胱抑素C主要臨床應用是作為腎小球濾過率標志物，其測定方法很多，包括單向免疫擴散法、酶聯免疫測定法、熒光免疫法、時間分辨熒光免疫法、放射免疫法、膠乳顆粒法、膠乳增強免疫比濁法等。目前臨床多選擇膠乳增強免疫比濁法作為常規檢測胱抑素C的測定方法[7]。

2.1 單向免疫擴散（SRID）：在混入一定量抗體的瓊脂中，使待測的抗原溶液從局部向瓊脂內自由擴散，可溶性抗體與相應抗原在比例適當處出現肉眼可見的沉淀環或沉淀，根據沉淀環的直徑或沉淀的面積計算大小計算胱抑素C的含量。本法須手工操作、檢測時間長，過程復雜，影響因素較多，靈敏度差，無法自動化，不利于臨床應用。

2.2 酶聯免疫測定法(ELISA)：使抗原或抗體吸附在某種固相支持物表面，并保持其免疫活性，酶標抗體或抗原在液相中催化底物顯色，根據顏色反應的深淺來進行胱抑素C含量的定量分析。本法為手工操作，不需要昂貴的儀器，試劑成本低，臨床應用較廣，但不適合急診樣本的檢測[8]。

2.3 熒光免疫法(FIA)：在一定條件下，使用激發光照射待測物質，當待測物吸收一定的入射光后，可發射出較入射光波長稍長的光，根據發射光強度的大小計算胱抑素C的含量。本法需要昂貴的熒光免疫分析儀，試劑成本高，但靈敏度好，特異性強，結果快速、準確，檢測低限為（1 μg/L）。

2.4 時間分辨熒光免疫法（TRFIA）：用銪作標志物，直接檢測血清中胱抑素C的含量，根據銪元素螯合物的發光特點，用時間分辨技術測量熒光，同時檢測波長和時間兩個參數，可有效地排除非特異性熒光的干擾，極大地提高了分析靈敏度。由于需要特殊的儀器設備，且所需檢測時間較長，難以在臨床普及應用。

2.5 放射免疫法（RIA）：通過雜交瘤技，獲得胱抑素C的單克隆抗體而建立起來的胱抑素C的RIA測定方法，是利用同位素標記的與未標記的抗原同抗體發生競爭性抑制反應的方法。本法結果準確，特異性強，靈敏度為（1.3 μg/L），線性范圍為（0.6～1.7 mg/L），試劑成本低。但試劑保存時間短，存在放射性污染，操作麻煩，檢測時間長。

2.6 膠乳顆粒法：1994年Kaabanda等報道用膠乳顆粒法檢測胱抑素C。膠乳顆粒法是一種免疫比濁測定法，該法操作簡便快速，變異系數和誤差小，易于自動化，但檢測敏感度低（檢測限為150 μg/L）。

2.7 膠乳增強透射免疫比濁法（PETIA）：在膠體溶液中，抗原胱抑素C與其抗體特異性結合，生成不溶性抗原-抗體復合物粒子，使反應溶液濁度增加，在特定波長下檢測吸光度改變，與標準品比較可計算出胱抑素C的濃度。本法可以利用生化分析儀進行比濁測定，整個分析過程只需要幾分鐘。測定回收率在100%±20%范圍內，測定值的變異系數小于10%，測定范圍0.4～8.0 mg/L，測定偏差不超過±10%。溶血、黃疸和脂濁標本對測定結果沒有明顯干擾[9]。

2.8 膠乳增強散射免疫比濁法（PENIA）：在膠體溶液中，抗原胱抑素C與其抗體特異性結合，生成不溶性抗原-抗體復合物粒子，使反應溶液濁度增加，使用散射比濁儀進行散射比濁分析。檢測范圍為0.23～7.25 mg/L，回收率為95%～109%，批內CV＜3.5%，批間CV＜5.0%，不受三酰甘油、膽紅素、血紅蛋白、類風濕因子和骨髓瘤異常蛋白的影響。

上述研究表明，SRID、ELISA、RIA法用于測定胱抑素C所需時間長，不能自動化，不適用于大批量標本和急診的檢測，且RIA法存在放射性污染。TRFIA、FIA法所用儀器昂貴，檢測成本高，未能在醫院廣泛使用。PETIA和PENIA法檢測的靈敏度雖然較其他方法低（150 μg/L），但是低于正常參考值下限，標本溶血、黃疸和脂血對檢測結果影響不大，回收率和重復性均在允許范圍之內，能進行自動化分析，可作為臨床常規檢測方法。

3 胱抑素C的水平

國內外對血清及各種體液胱抑素C的參考值進行了研究，正常人血清胱抑素C為（0.96±0.20）mg/L，臍帶血為(2.08±0.33)mg/L，嬰兒：＜1個月為（0.18±0.04）mg/L，＜12個月為（0.39±0.09）mg/L，＞12個月為（0.72±0.29）mg/L。腦脊液為（5.371±0.36）mg/L，唾液為（1.22±0.67）mg/L，關節液為（1.27±0.41）mg/L，尿液為（0.11± 0.125）mg/L，精漿濃度最高平均為51 mg/L[10]。國內研究者用PETIA法對健康受檢者進行胱抑素C測定，結果男性為0.62～0.91 mg/L，女性為0.52～0.83 mg/L，且胱抑素C水平隨年齡增加而增加[11]。1～19歲年齡組為（1.016±0.130）mg/L，20～50歲年齡組為（1.023±0.114）mg/L，50歲以上組為（1.209±0.279）mg/L，50歲以上組增高較明顯[12]。參考值的確定需要根據實際使用的檢測方法、試劑及本地實際情況建立。

4 胱抑素C測定的影響因素

樣品在25 ℃室溫保存可穩定6 d，2～8 ℃密封保存，可穩定12 d，-80 ℃可保存14個月，忌反復凍融。影響測定結果的主要因素是實驗方法及其參考曲線的制定，與性別，年齡，身高、體質量無關[13]。

5 胱抑素C的臨床應用

胱抑素C主要應用于反映腎臟腎小球濾過率。由于胱抑素C分泌恒定，濃度不受含蛋白質飲食、身高、體質量等影響，干擾因素較少，是反映腎小球濾過功能的可靠指標。對腎衰竭的診斷比肌酐診斷早1～2 d[14]。血清胱抑素C水平對輕度腎功能損傷反映靈敏，用來評價糖尿病患者的腎功能狀況和對腎移植患者出現排斥反應提供早期診斷[15]。一些研究發現，孕婦、重度燒傷、多發性骨髓瘤、過敏性紫癜患者的早期腎損害中胱抑素C也是很理想的監測指標[16-19]。在肝臟疾病中胱抑素C水平顯著升高[20]。此外，在高血壓、心腦血管疾病、腦膜炎、惡性腫瘤的鑒別診斷等方面也有良好的應用價值。

6 小 結

臨床胱抑素C檢測多用PETIA法，參考值的確定需要根據實際使用的檢測方法、試劑及本地實際情況建立。因此方法的標準化，試劑和標準品的統一，有助于方法學的比較和參考值的建立。胱抑素C與腎小球濾過率的線性關系優于尿素、肌酐和內生肌酐清除率，在各種疾病造成腎臟早期損害的診斷、治療及預防方面的應用越來越廣，并且在其他疾病的診斷、治療和預防上也不斷的得到應用。

[1] Laterza OF,Price CP,Scott MG.Cystatin C: an improved estimator of glomerular filtration rate [J].Clin Chem,2002,48(5):699-707.

[2] Woitas RP,Stoffel-Wagner B,Flommersfeld S,et al.Correlation of serum concentrations of cystation C and creatinine to inulin clearance in liver cirehosis[J].Clin Chem,2000,46(5):712-715.

[3] 魏崇莉.胱抑素C的臨床意義及其應用進展[J]國際檢驗醫學雜志,2012,33(2):182-183.

[4] 陳志奎,葛長江,胡申江.胱抑素C與心血管疾病的關系[J].生理科學進展,2003,34(3):269-271.

[5] 陳華英,林偉華,洪流,等.腦脊液胱抑素C和乳酸脫氫酶在化膿和病毒性腦膜炎的應用[J].實驗與檢驗醫學,2012,30(1):57-58.

[6] 張翀,丁進芳,韓平治.胱抑素C的檢測方法及臨床應用進展[J].中國醫學檢驗雜志,2007,54(4):330.

[7] 胡全修,戴曉強.膠乳增強免疫比濁法測定血清胱抑素C的方法學評價[J].檢驗醫學與臨床,2011,8(22):2775-2777.

[8] 馮建芳,汪淑榮,李平,等.急性心肌梗死病人血清巰基蛋白酶抑制肽C的變化[J].基礎醫學與臨床,1995,15(4):45-47.

[9] 余洪立.血清胱抑素C測定的方法研究進展[J].廣西醫學,2004,26 (3):366-367.

[10] 陳菁,朱東芳.Cystation C的檢測及臨床應用[J].紹興文理學院學報,2004,24(7):106-108.

[11] 李玉林,徐國賓,朱立華.Cystation C與肌酐在評價腎小球濾過功能中的比較研究[J]中國實驗診斷學,2001,5(4):154-156.

[12] 韓平治,丁進芳,張翀,等.蘭州市健康人血清胱抑素C濃度參考范圍的調查[J].國際檢驗醫學雜志,2006,27(2):176-178.

[13] 侯振江.胱抑素C及其檢驗方法研究進展[J].國際檢驗醫學雜志, 2007,28(11):1013-1015.

[14] Herget-Rosenthal S,Marggraf G,Husing,et al.Early detection of acute renal failture by serum cystation C[J].Kidney Jnt,2004,66(3): 1115-1122.

[15] 楊雀飛,吳紅梅,鄧波.胱抑素C在早期腎功能損害的診斷價值[J].現代診斷與治療,2013,8(15):1723-1724.

[16] 李毅,祁成,袁鵬,等.血清胱抑素C在妊娠期高血壓疾病早期腎損害中的意義[J].中國婦幼保健,2012,27(15):2256-2258.

[17] 王海濱,熊瑜琳,于勇,等.胱抑素C在重度燒傷患者早期腎損傷中的臨床意義[J].臨床軍醫雜志,2009,37(5):815-817.

[18] 黃大毛,朱湘雅.血清胱抑素C在多發性骨髓瘤腎功能損害診斷中的價值[J].中國現代醫學雜志,2010,20(11):1652-1660.

[19] 梁任,陳愷杰,黃宇戈.胱抑素C檢測對過敏性紫癜早期腎損傷的診斷價值[J].海南醫學,2010,21(5):10-12.

[20] 林煒煒,徐曉萍,于嘉屏.血清胱氨酸蛋白酶抑制劑C濃度在肝臟疾病中的變化和意義[J].現代檢驗醫學雜志,2007,22(6):81-82.

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1671-8194（2014）29-0055-02