乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽性血清的病毒核酸載量分析

趙倩瑜 張俊峰 衛紅偉

乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽性血清的病毒核酸載量分析

趙倩瑜 張俊峰 衛紅偉

目的 探討分析血清中乙型肝炎病毒表面抗原 (HBV-HBsAg)低水平陽性與病毒核酸載量的關系。方法 HBsAg 弱陽性的患者 3632 例 , 通過酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)檢測血清 (HBsAg)、使用熒光定量聚合酶鏈反應 (FQ-PCR)檢測血清乙型肝炎病毒 DNA(HBV-DNA)。結果 3632 例 HBsAg 弱陽性的患者病毒 DNA 檢出率為 80.55%, 病毒核酸載量的平均值為 7.305。結論 乙型肝炎病毒表面抗原低水平陽性對乙型肝炎的診斷不具有代表性 , 只能能說明體內含有乙肝病毒外殼 , 還需要結合血清病毒核酸載量檢測來判斷患者體內是否具有乙肝病毒 DNA。只有在 HBsAg 陽性且合并病毒核酸載量值異常時 , 才有助于乙型病毒性肝炎的診斷和療效的評估。

乙型肝炎病毒；表面抗原低水平陽性；病毒核酸載量

乙型病毒性肝炎 (viral hepatitis type B)簡稱乙肝 , 是由乙肝病毒 (HBV)感染引起的 , 我國是乙肝大國［1］, 乙肝病毒攜帶者占全世界攜帶者的 46.43%。乙肝表面抗原 (HBsAg)是乙肝病毒的外殼 , 只具有抗原性 , 無傳染性［2］。HBsAg 陽性或弱陽性是感染乙肝病毒的標志之一。HBsAg 低水平陽性存在的情況有以下幾種［3］：①乙肝潛伏期 ；②無癥狀的乙肝病毒攜帶者 ；③慢性乙肝 ；④檢驗結果誤差。由于 ELISA 試驗檢測的是病毒標志物 , 或多或少會對 HBV 造成漏檢 , 而 PCR技術可以補充 ELISA 試驗的不足 , 可效提高病毒檢出率。現就本院 2013 年期間選取的 3632 例 HBsAg 低水平陽性者病毒核酸載量檢測結果進行分析。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取 2013 年 1～12 月期間本院消化內科與傳染病科門診部和住院部共同收治的 HBsAg低水平陽性的患 者 3632 例 , 其 中 男 3168 例 , 女 464 例 ；年 齡 27～58 歲 ,平均年齡 36歲。所有患者經乙肝病毒酶聯免疫吸附試驗檢測符合 HBsAg 低水平陽性。

1. 2 方法 HBsAg 檢測采用 ELISA 試驗［4］, 試劑盒由廣州威佳科技有限公司提供。HBV-DNA 采用 FQ-PCR 檢測［5］,試劑盒由寶生物工程有限公司提供。

1. 2. 1 ELISA 檢測 標本在室溫下離 心 (1000×g 離心 10 min)將血清和紅細胞迅速小心地分離。使用不含熱原和內毒素的試管 , 按照試劑盒操作步驟說明進行實驗。如果標本不立即使用 , 將其分裝保存于 -70℃條件下 , 避免反復冷凍 ,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。避免使用溶血或脂血。

1. 2. 2 核酸檢測 留取血標本中核酸檢測成分 , 將 ELISA檢測結果中 HBsAg 低水平陽性標本依次編號進行核酸檢測 ,檢測過程依據熒光定量聚合酶鏈反應說明書進行。

2 結果

HBsAg 低水平陽性者 3632 例 , 占 2013 年全年在本院進行 HBsAg 檢測的患者的 29.23%, 對 HBsAg 低水平陽性者進行 HBV-DNA 定量檢測 , 病毒 DNA 檢出率為 80.55%, 病毒核酸載量的平均值為 7.305。說明當檢測出乙肝表面抗原低水平陽性時 , 只能說明人體內有乙肝病毒外殼或者是假陽性 ,而外殼里面有沒有乙肝病毒 DNA則還要通過乙肝病毒核酸檢測來確定。

3 討論

HBsAg 編碼區位于 HBV 編碼的 5 個閱讀框架的第 3 個 , HBsAg 的衣殼蛋白是由 HBsAg 的編碼產物 Pre-S1、Pre-S2以及 HBsAg-PHSA-Re 共同組成［6］。當感染 HBV 后 , 病毒常以完整的病毒顆粒、絲狀或管狀顆粒、球形顆粒3種形式存在 , 其中病毒顆粒含有病毒蛋白和核酸。由于感染 HBV后存在一段時間的窗口期［7］, 即人體感染乙肝病毒后 , 免疫系統在消滅乙肝病毒的這段時期 , 也稱乙肝恢復期末端 , 此時病毒將大量減少或者全部消失 , 但是還沒有產生乙型肝炎表面抗體 (HBsAb)。而 HBsAb 一般要在急性乙肝病毒感染后期或 HBsAg 消失后 , 經過一段時間才出現 , 在此間隔期HBsAg 與 HBsAb 都不能被檢出 , 稱為“空白期”或“窗口期”。目前雖然有先進的熒光定量 PCR 技術可以及時準確的診斷感染性疾病 , 但窗口期仍然是全世界的難題 , 且對于一些沒有條件實現臨床 PCR 實驗室建立的醫院來說 , 很難實現對 HBsAg低水平陽性乙型病毒性肝炎患者的正確診斷。所以 ,本文在此探討血清標志物 HBsAg 低水平陽性與 HBV-DNA檢測之間的相互關系 , 希望能夠對乙型肝炎的臨床診斷及療效觀察和預后判斷起到一定的作用。

HBsAg 的出現常伴隨乙肝病毒的存在 , 因此 HBsAg 是已感染 HBV 的標志。HBsAg 可存在于 HBV 感染者的血液、唾液、乳汁、汗液、淚水、鼻咽分泌物、精液及陰道分泌物中。在感染乙肝病毒后 2～6 個月、谷丙轉氨酶升高前 2～8 周時 , 可在血清中測到 HBsAg 陽性 ；當 HBsAg 呈低水平陽性時 , 可結合熒光定量聚合酶鏈反應來進一步檢測體內是否含有 HBV-DNA。

研究結果顯示 , HBsAg 低水平陽性且乙肝病毒 DNA＜1000,則體內存在乙肝病毒的表面外殼而不存在乙肝病毒 DNA, 不存在病毒復制和傳染性 ；HBsAg 陽性或弱陽性且乙肝病毒DNA＞1000, 則說明體內存在完整的乙肝病毒 , 具傳染性且復制。因此 , 當出現 HBsAg 陽性或低水平陽性時 , 也不一定是 HBV 患者 , 還有可能是乙肝潛伏期、無癥狀攜帶者、慢性乙肝或者假陽性者 , 這都需要結合 PCR 檢查結果做出綜合判斷。

參考文獻

［1］邱黎霞 , 郭滿盈 , 楊海燕 . 血清 PreS1, PreS2 抗原在乙肝診斷中的價值 .實驗與檢驗醫學 , 2009, 27(2):177-178.

［2］王宇 , 楊延敏 .對乙型肝炎患者檢測乙肝表面抗原大蛋白和前 S1 抗原的區別和臨床意義 .檢驗醫學與臨床 , 2010, 7(22): 2446-2447.

［3］夏邦世 , 陳友土 , 沈忠海 .HBsAg 陰性或低值弱陽性的乙型肝炎病毒感染 .中國預防醫學雜志 , 2006, 7(1):49-51.

［4］陳慧英 , 肖艷群 , 張健 , 等 . 酶聯免疫吸附試驗檢測乙型肝炎病毒表面抗原臨界樣本復檢范圍的探討 .檢驗醫學 , 2010, 25 (6):447-450.

［5］劉慶鳴 , 曾黎峰 , 萬本愿 , 等 .乙肝病毒免疫標志物與其 DNA熒光定量聚合酶鏈反應之間的關系探討 .實驗與檢驗醫學 , 2010(5):270-271.

［6］崔美蘭 , 周海洋 , 劉杰 , 等 .抗乙肝病毒化學藥物研究進展 .國際藥學研究雜志 , 2011, 39(4):280-293.

［7］荊永正 , 孫鳳英 , 于學英 .獻血員感染 HBV 窗口期的病毒核酸篩查 .實用醫藥雜志 , 2010, 27(012):1064-1066.

2014-05-15］

471600 宜陽縣人民醫院檢驗科