中藥治療藥物性肝損傷實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

陳苓麗王 鵬羊 波黃 萍

1正大青春寶藥業(yè)有限公司 杭州 310023 2浙江中醫(yī)藥大學(xué) 3浙江省立同德醫(yī)院

中藥治療藥物性肝損傷實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

陳苓麗1王 鵬2羊 波3黃 萍3

1正大青春寶藥業(yè)有限公司 杭州 310023 2浙江中醫(yī)藥大學(xué) 3浙江省立同德醫(yī)院

藥物性肝損傷；中藥治療；實(shí)驗(yàn)研究；綜述

藥物性肝損傷（drug-induced liver injury，DILI）是指在藥物使用過(guò)程中，因藥物或其代謝產(chǎn)物引起的肝組織的生理功能變化或免疫應(yīng)答所引起的肝損傷[1]。大量新藥的出現(xiàn)以及聯(lián)合用藥的增多，使藥物性肝損傷已經(jīng)成為臨床上常見的肝臟疾病之一。在我國(guó)，結(jié)核藥、中草藥、抗生素和非甾體抗炎藥是引起藥物性肝損傷的主要藥物種類[2]，其作用機(jī)制仍不夠明確。某些中藥具有減輕肝損傷的病理程度，改善臨床癥狀和某些實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的作用。本文就近年來(lái)中藥治療藥物性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究現(xiàn)狀進(jìn)行了綜述。

1 動(dòng)物模型的研究

復(fù)制DILI模型的動(dòng)物主要是大鼠和小鼠。建模方法主要以藥物誘導(dǎo)為主，常用的藥物有異煙肼和利福平、雷公藤多苷和對(duì)乙酰氨基酚[3]。異煙肼和利福平是臨床治療結(jié)核病一線藥物，單獨(dú)使用都具有肝毒性作用，聯(lián)合使用可增大肝損傷的幾率。Pal等[4]采用異煙肼和利福平聯(lián)合用藥的方式建立大鼠DILI模型，給Wistar大鼠每天空腹灌胃50mg/（kg·d）的異煙肼和利福平，28天后造模成功。楊慧媛等[5]采用異煙肼和利福平成功復(fù)制DILI模型，設(shè)立正常對(duì)照組、異煙肼+利福平組（RH）及異煙肼組（H組），1天1次定時(shí)空腹灌胃，劑量50mg/（kg·d），第4周造模成功，研究發(fā)現(xiàn)異煙肼與利福平致肝損傷作用機(jī)制可能與脂質(zhì)過(guò)氧化增加有關(guān)。

對(duì)乙酰氨基酚是常用的非甾體抗炎藥，也是引起DILI的主要藥物，采用對(duì)乙酰氨基酚建立的肝損傷模型常被用來(lái)檢驗(yàn)天然產(chǎn)物是否有潛在的肝毒性[6]。Liu等[7]通過(guò)給小鼠一次性腹腔注射300～500mg/kg的對(duì)乙酰氨基酚溶液（加熱溶于磷酸鹽緩沖液），4h后造模成功。Cover等[8]采用對(duì)乙酰氨基酚建立DILI模型，通過(guò)灌胃方式給小鼠質(zhì)量濃度為2.5%的對(duì)乙酰氨基酚混懸液（300mg/kg），24h后造模完成。

雷公藤具有抗炎和免疫抑制作用，多用于治療自身免疫性疾病，具有較好的療效，但該藥具有明顯的肝毒性。從雷公藤中提取的雷公藤多苷可用于誘導(dǎo)DILI的產(chǎn)生。祿保平等[9]對(duì)雷公藤多苷致小鼠急性肝損傷的劑量、時(shí)間及可能機(jī)理進(jìn)行了研究，研究發(fā)現(xiàn)給小鼠灌胃相當(dāng)于成人20倍劑量的雷公藤多苷（270mg/kg），18h后即可以引起小鼠急性肝損傷。

2 單味藥及有效成分的研究

近年來(lái)，中醫(yī)治療DILI的單味藥多以含有機(jī)酸類、生物堿類、環(huán)烯醚萜類、黃酮苷、多糖等活性成分的中藥為主[10]。

2.1 淫羊藿總黃酮 淫羊藿為我國(guó)傳統(tǒng)中藥，具有補(bǔ)腎陽(yáng)，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕的功效，其主要成分為黃酮類化合物。淫羊藿總黃酮是從小檗科淫羊藿屬植物莖葉中提取的總黃酮類成分，研究發(fā)現(xiàn)其具有廣泛的藥理作用。蔡大偉等[11]采用異煙肼和利福平建立小鼠DILI模型，以0.2%和0.1%的淫羊藿總黃酮進(jìn)行干預(yù)，10天后淫羊藿總黃酮高劑量組小鼠血清和肝組織中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）明顯降低，血甘油三酯（TG）含量也明顯降低，SOD活性有所提高。

2.2 黃芩苷 薛洪源等[12]通過(guò)異煙肼和利福平誘導(dǎo)制造小鼠藥物性肝損傷模型，結(jié)果顯示，黃芩苷能顯著降低模型小鼠血清ALT水平、肝組織中MDA含量及細(xì)胞色素P450 2E1活性，增加GSH含量。病理組織學(xué)檢查顯示，黃芩苷能明顯減輕肝細(xì)胞的變性和壞死。認(rèn)為黃芩苷對(duì)異煙肼和利福平引起的肝損傷的保護(hù)作用不僅與清除自由基、抑制肝細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)有關(guān)，還與抑制細(xì)胞色素P450 2E1的活性有關(guān)。

2.3 慈 菇 又稱剪刀草、燕尾草、蔬卵，具清熱止血、解毒消腫、散結(jié)的功效。廖艷等[13]研究發(fā)現(xiàn)，不同劑量的慈菇均能明顯降低異煙肼和利福平誘導(dǎo)的DILI大鼠肝組織中的MDA含量，減輕肝組織變性和壞死程度。其中高劑量組慈菇能顯著降低肝損傷大鼠的肝臟指數(shù)、提高肝勻漿中SOD和谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶GST的活性。中劑量組慈菇亦能顯著提高GST的活性。并由此推測(cè)慈菇對(duì)異煙肼和利福平誘導(dǎo)的大鼠肝損傷具有保護(hù)作用，可能與其抗脂質(zhì)過(guò)氧化、減少過(guò)氧化脂質(zhì)的生成、增強(qiáng)機(jī)體對(duì)自由基的清除有關(guān)。

2.4 當(dāng)歸多糖 當(dāng)歸多糖是當(dāng)歸主要成分之一。劉娟[14]在地塞米松誘導(dǎo)肝損傷的動(dòng)物模型中，以100mg/ kg和200mg/kg劑量的當(dāng)歸多糖口服干預(yù)10天后發(fā)現(xiàn)，兩組劑量的當(dāng)歸多糖均能降低血清ALT、AST，減輕肝組織損傷。當(dāng)歸多糖還能提高SOD活性，增加GSH含量，但對(duì)P450 2E1酶活性沒有影響。研究認(rèn)為當(dāng)歸多糖能有效干預(yù)地塞米松所致肝損傷可能與抑制脂質(zhì)過(guò)氧化、調(diào)節(jié)糖代謝紊亂有關(guān)。

2.5 尾穗莧甲醇提取物 Ashok Kumar等[15]采用撲熱息痛致大鼠肝損傷模型，以200mg/kg和400mg/kg的尾穗莧甲醇提取物進(jìn)行干預(yù)16天，結(jié)果顯示，尾穗莧甲醇提取物能抑制撲熱息痛導(dǎo)致的ALT、AST、總膽紅素（TB）、直接膽紅素（DB）水平的升高及血清白蛋白（ALB）水平的降低，同時(shí)還能顯著降低MDA及總蛋白水平，顯著升高GSH、過(guò)氧化氫酶（CAT）及總硫醇（TT）水平。

2.6 相思藤總黃酮 相思藤又名土甘草，系豆科相思子屬，實(shí)驗(yàn)研究證明其對(duì)肝炎有一定的治療作用。陳紅霞等[16]采用對(duì)乙酰氨基酚致藥物性肝損傷小鼠模型，以相思藤總黃酮治療5天，結(jié)果顯示相思藤總黃酮能顯著降低小鼠的AST、ALT活性，提高肝組織中SOD、GSH和谷胱甘肽過(guò)氧化酶（GSH-PX）含量，降低MDA含量。

2.7 大黃 王秀明等[17]采用對(duì)乙酰氨基酚建立藥物性肝損傷小鼠模型，以4g/kg和8g/kg的大黃水煎劑進(jìn)行干預(yù)16h后發(fā)現(xiàn)：大黃水煎劑組小鼠肝臟TNF-α基因的表達(dá)較模型組明顯降低，肝臟脂肪變性和壞死情況有所改善。推測(cè)大黃抑制TNF-α基因的表達(dá)可能是其治療的機(jī)制之一。

2.8 萬(wàn)年青總皂苷 宛瑩等[18]用萬(wàn)年青總皂苷對(duì)對(duì)乙酰氨基酚致小鼠急性肝損傷模型治療3天后發(fā)現(xiàn)：萬(wàn)年青總皂苷能抑制血清AST和ALT的活性，減少脂質(zhì)過(guò)氧化物的生成，提高過(guò)氧化氫酶、SOD和GSH-PX的活性，抑制細(xì)胞凋亡蛋白酶caspase-3和缺氧誘導(dǎo)因子1α的表達(dá)。同時(shí)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)萬(wàn)年青總皂苷能顯著減少細(xì)胞色素P4502E1的活性及環(huán)氧化酶-2的表達(dá)。認(rèn)為其作用機(jī)制可能與抗氧化、抑制細(xì)胞色素P4502E1的活性和減少缺氧誘導(dǎo)因子1α的生成有關(guān)。

2.9 番茄紅素 番茄紅素是一種不含氧的類胡蘿卜素，同時(shí)也是一種很強(qiáng)的抗氧化劑。何軍等[19]用番茄紅素對(duì)雷公藤多苷誘導(dǎo)的藥物性肝損傷小鼠干預(yù)6天，發(fā)現(xiàn)番茄紅素能顯著降低血清中ALT、AST含量，提高小鼠肝組織中SOD活性，降低MDA含量。

3 中藥復(fù)方研究

褚春薇等[20]采用異煙肼和利福平建立藥物性肝損傷大鼠模型，以加味一貫煎治療，結(jié)果顯示加味一貫煎能抑制大鼠血ALT、AST含量的增加，降低肝組織中MDA水平。同時(shí)發(fā)現(xiàn)加味一貫煎對(duì)肝組織損傷程度與劑量不存在量效關(guān)系。蔡大偉等[21]同樣采用異煙肼和利福平致小鼠藥物性肝損傷模型，以丹芪益肝顆粒干預(yù)10天，發(fā)現(xiàn)丹芪益肝顆粒組較模型組小鼠血清和肝臟ALT活性下降（P＜0.01），同時(shí)能明顯降低TG含量（P＜0.05）。同時(shí)，丹芪益肝顆粒能明顯降低MDA的含量（P＜0.05），提高SOD的活性（P＜0.05），并能減輕肝細(xì)胞的損傷。

柴智等[22]采用雷公藤多苷建立小鼠DILI模型，應(yīng)用逍遙散進(jìn)行干預(yù)5天結(jié)果顯示，與模型組比較，逍遙散組小鼠血清中的ALT、AST含量顯著降低（P＜0.05），谷胱甘肽過(guò)氧化物酶GSH-Px活力明顯提高（P＜0.05），血清MDA含量顯著降低（P＜0.05），同時(shí)中、高劑量組還可提高SOD水平（P＜0.05）。逍遙散對(duì)雷公藤引起的急性肝損傷具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制與抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)有關(guān)。柴智等[23]采用雷公藤多苷建立小鼠DILI模型，應(yīng)用四逆散進(jìn)行干預(yù)7天后發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，四逆散組小鼠肝組織中Bcl-2表達(dá)顯著升高、Bax表達(dá)顯著下降，Caspase-3活性明顯下降，TNF-α的mRNA顯著下降。四逆散具有對(duì)抗雷公藤多苷引起的急性肝細(xì)胞凋亡的作用。

周文靜等[24]采用雷公藤醇提取物建立小鼠DILI模型，以歸脾湯干預(yù)5天，與模型組相比，歸脾湯能顯著降低血清ALT、AST、MDA水平，提高GSH-Px水平，中、高劑量還可提高SOD水平，同時(shí)歸脾湯各組均能減輕肝臟病理?yè)p傷程度。從實(shí)驗(yàn)中得出結(jié)論：歸脾湯能保護(hù)雷公藤所致的肝損傷，并認(rèn)為急性肝損傷的發(fā)生機(jī)制與脂質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)。

4 小結(jié)

中醫(yī)藥治療藥物性肝損傷療效肯定，能減輕動(dòng)物模型的肝組織變性和壞死程度，改善實(shí)驗(yàn)指標(biāo)。初步研究提示中藥抗肝損傷的作用是多途徑的，多環(huán)節(jié)的，主要與抗氧化、調(diào)節(jié)免疫功能、改善肝臟微循環(huán)等有關(guān)。目前中醫(yī)藥治療DILI存在以下問(wèn)題：①藥物性肝損傷的模型建立方法研究較少，動(dòng)物模型公認(rèn)度低，與臨床實(shí)際尚有一定的差距。②單味中藥及有效成分的實(shí)驗(yàn)研究較多，但對(duì)其作用機(jī)制研究不夠深入，其作用靶點(diǎn)、作用過(guò)程和作用結(jié)果還有待進(jìn)一步研究。③藥物性肝損傷是用藥物引起的肝損傷，通過(guò)中藥進(jìn)行防治是否會(huì)加重肝功能的負(fù)擔(dān)還需要進(jìn)一步研究。④造模過(guò)程中對(duì)中藥的干預(yù)時(shí)間、中藥造模的劑量無(wú)明確標(biāo)準(zhǔn)，需要建立中醫(yī)治療DILI的規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)，以有效評(píng)價(jià)中醫(yī)治療DILI的療效。

［1］Kaplowitz N.Drug-induced liver injury［J］.CID.2004,38（Suppl 2）：S45.

［2］吳曉寧，尤紅，賈繼東.2003-2007年國(guó)內(nèi)藥物性肝損傷臨床特點(diǎn)文獻(xiàn)綜合分析［J］.肝臟，2008，13（6）：463-466.

［3］馬麗娜，華碧春.藥物性肝損傷動(dòng)物模型研究進(jìn)展［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2011，7（2）：129-131.

［4］Pal R，Vaiphei K，Sikander A，et al.Effect of garlic on isoniazid and rifampicin-induced hepatic injury in rats［J］. World J Gastroenterol，2006，12（4）：636-639.

［5］楊慧媛，宋育林，許建明，等.異煙肼利福平合用致大鼠肝損傷的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停跩］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，43（2）：185-188.

［6］Jaeschke H，Williams CD，McGill MR，et al.Models of druginduced liver injury for evaluation of phytotherapeutics and other natural products［J］.Food and Chemical Toxicology，2013，55：279-289.

［7］Liu ZX，Han D，Gunawan B.Neutrophil depletion protects against murine ac-etaminophen hepatotoxici［J］.Hepatology，2006，43（6）：1220-1230.

［8］Cover C，Liu J，F(xiàn)arhood A.Pathophysiological role of the acute inflammatory response during acetaminophen hepatotoxicity［J］.Toxicol Appl Pharmacol，2006，216（1）：98-107.

［9］祿保平，苗明三，楊曉娜.應(yīng)用雷公藤多苷灌胃建立小鼠急性肝損傷模型的研究［J］.中藥藥理與臨床，2007，23（2）：75-77.

［1 0］黃清杰，李茂星，劉雄，等.中醫(yī)治療藥物性肝損傷研究進(jìn)展［J］.西部中醫(yī)藥，2012，25（7）：124-126.

［1 1］蔡大偉，尹曉飛，劉順良，等.淫羊藿總黃酮對(duì)異煙肼和利福平肝損傷小鼠的保護(hù)作用［J］.西南國(guó)防醫(yī)藥，2007，17（6）：688-690.

［1 2］薛洪源，侯艷寧，劉會(huì)臣，等.黃芩苷對(duì)異煙肼和利福平肝損害小鼠的保護(hù)作用［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2003，19（6）：414-417.

［1 3］廖艷，孫奇，彭桂英，等.慈菇對(duì)異煙肼和利福平致大鼠肝損傷的保護(hù)作用［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，35（7）：466-469.

［1 4］劉娟.當(dāng)歸多糖對(duì)地塞米松所致肝損傷的干預(yù)作用［J］.中國(guó)生化藥物雜志，2012，33（1）：55-57.

［1 5］Ashok Kumar BS，Lakshman K.Hepatoprotective activity of methanol extract of Amaranthus caudatus Linn.against paracetamol-induced hepatic injury in rats［J］.Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao，2011，9（2）：194-200.

［1 6］陳紅霞，吳咖，黃仁彬，等.相思藤總黃酮對(duì)小鼠急性化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制［J］.廣西醫(yī)學(xué)，2012，34（2）：138-140.

［1 7］王秀明，王春華.大黃對(duì)撲熱息痛致急性肝損傷的影響［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2011，19（5）：311-314.

［1 8］宛瑩，吳艷玲，廉麗花，等.虎眼萬(wàn)年青通過(guò)抑制CYP2E1和HIF-1α保護(hù)對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)的急性肝損傷［J］.中國(guó)天然藥物，2012，10（3）：177-184.

［1 9］何軍，趙春景，廖昌軍.番茄紅素對(duì)雷公藤多苷致小鼠肝損傷的保護(hù)作用［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2010，15（10）：1096-1099.

［2 0］褚春薇，陳繼婷.加味一貫煎對(duì)抗結(jié)核藥所致的大鼠肝損傷的防治作用［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（15）：201-204.

［2 1］蔡大偉，鞏密密，何燕，等.丹芪益肝顆粒對(duì)異煙肼和利福平合用致肝損傷小鼠的保護(hù)作用［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（15）：162-163.

［2 2］柴智，周文靜，王永輝，等.逍遙散對(duì)雷公藤致大鼠急性肝損傷的保護(hù)作用［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（7）：170-172.

［2 3］柴智，樊慧杰，王永輝，等.四逆散對(duì)雷公藤多苷所致急性肝損傷的影響［J］.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，7（2）：120-123.

［2 4］周文靜，柴智，王永輝，等.歸脾湯對(duì)雷公藤醇提物致急性肝損傷的保護(hù)作用［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（9）：169-171.

2013-07-10