液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合人乳頭狀瘤病毒基因分型檢測(cè)在宮頸病變篩查中的應(yīng)用

王琳 屠蕊沁

(復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海 200032)

世界上每年有500 000女性罹患宮頸癌，其病死率位居女性惡性腫瘤死因第二位。研究[1]表明，持續(xù)的人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是宮頸癌的重要病因，有99%的宮頸癌患者曾感染HPV。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的HPV亞型多達(dá)100多種，其中40種可感染女性生殖道；不同HPV亞型的致病性不同，其中高危型HPV持續(xù)感染可致宮頸癌[2]。HPV早期篩查對(duì)宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期干預(yù)以及患者的康復(fù)有重要意義[3]。目前，臨床上普遍采用液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(ThinPrep cytologic test，TCT)篩查宮頸癌以及癌前病變，該方法具有較高的特異度和敏感度，但需要病理醫(yī)師操作，且結(jié)果易受主觀因素的影響，同時(shí)宮頸低度病變的檢出率較低[4-6]。本研究分析了TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測(cè)在宮頸病變篩查中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月—2012年6月在本院婦科行TCT和(或)HPV 檢查的415例患者，年齡26～81歲。所有患者均有性生活史，取材前3 d均無陰道沖洗及用藥史。

1.2 TCT檢查 應(yīng)用全自動(dòng)制片機(jī)處理宮頸組織，分離宮頸表面黏液、血液和炎性反應(yīng)細(xì)胞，將炎性反應(yīng)細(xì)胞標(biāo)本制成直徑13 mm的單層細(xì)胞涂片，采用巴氏染色法進(jìn)行染色。用2001年國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)(National Cancer Institute，NCI)推薦的Bethesda分級(jí)系統(tǒng)(TBS)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷。其中非典型鱗狀細(xì)胞(ASC-US)及其以上病變?yōu)榧?xì)胞學(xué)陽性診斷結(jié)果。低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)包括HPV感染的細(xì)胞變化和CIN 1級(jí)病變，高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變(HSIL)包括CIN 2級(jí)病變、CIN 3級(jí)病變和原位癌。

1.3 HPV基因分型檢測(cè) 按照HPV基因分型檢測(cè)試劑盒(深圳亞能生物技術(shù)有限公司生產(chǎn))說明書對(duì)宮頸組織標(biāo)本進(jìn)行HPV檢測(cè)及基因分型。取1 mL宮頸細(xì)胞液離心，棄上清，加入50 μL裂解液懸浮細(xì)胞沉淀；置入沸水中10 min，離心，取上清液，提取DNA并擴(kuò)增。PCR反應(yīng)條件：50℃ 15 min，95℃ 10 min，42℃ 90 s，72℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)，72℃ 5 min。取15 mL塑料離心管，放入標(biāo)有樣本編號(hào)的膜條，加入A液及PCR產(chǎn)物，沸水浴10 min，放入51℃雜交箱，1.5 h后取出膜條，放入裝有50 ml B液的離心管中，51℃輕搖洗滌10 min，孵育30 min后再用A液、C液室溫洗滌，最后將膜條浸泡于顯色液中避光顯色20 min，觀察結(jié)果。根據(jù)膜條上藍(lán)色斑點(diǎn)顯現(xiàn)位置讀取基因型，若只有PC位點(diǎn)(顯色質(zhì)控點(diǎn))顯色而其他位點(diǎn)均不顯色，則提示未感染HPV。

1.4 組織病理學(xué)檢查 CIN1～3級(jí)病變按TBS標(biāo)準(zhǔn)分為輕、中、重度宮頸鱗狀上皮非典型增生。由病理醫(yī)師行盲法閱片，所有異常切片均由另外兩位病理醫(yī)師按Richart標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率的形式表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HPV基因分型檢測(cè)結(jié)果 415例疑似宮頸病變中，HPV檢測(cè)出陽性者140例，陽性率為33.73%，其中高危型感染(包括單一高危型感染和混合高危型感染)106例，占75.71%；低危型感染(包括單一低危型感染以及混合低危型感染)13例，占9.86%；低危型與高危型混合感染21例，占15.0%。在檢出的140例HPV陽性病例中，出現(xiàn)頻率最高的為HPV 16型和52型(分別占27.3%和21.5%)，其次為58型和18型(分別占18.4%和16.8%)。

2.2 TCT檢查結(jié)果 415例標(biāo)本中，TCT檢查結(jié)果異常者63例(15.18%)，包括ASC-US 28例(6.74%)，LSIL 11例(2.65%)，HSIL 12例(2.89%)，SCC 11例(2.65%)，AGC 1例(0.24%)。

2.3 HPV基因分型、TCT與病理組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果比較 病理診斷以CIN 1級(jí)及以上病變?yōu)殛栃越Y(jié)果，415例標(biāo)本中，病理學(xué)檢測(cè)陽性者48例(11.57%)，其中，TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測(cè)陽性率為89.86%(43/48)，并且隨著宮頸病變程度的加深，TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測(cè)的陽性率也呈逐漸上升趨勢(shì)。415例標(biāo)本中，HPV基因分型及TCT檢查均為陽性者81例(19.42%)。在HPV檢測(cè)及TCT檢查均為陽性的81例標(biāo)本中，CIN檢出38例(46.9%)；在HPV陽性而TCT陰性的65例標(biāo)本中，CIN檢出19例(15.4%)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HPV及TCT檢查均為陽性的81例標(biāo)本中，宮頸癌檢出5例(6.2%)，HPV陽性而TCT陰性的標(biāo)本中，宮頸癌檢出率為0，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

HPV的檢測(cè)對(duì)于宮頸癌前篩查、治療后隨訪、疫苗的應(yīng)用以及流行病學(xué)調(diào)查均有重要意義[7]。本研究的415例疑似宮頸病變標(biāo)本中，HPV陽性率為33.73%，其中106例(75.71%)為高危型感染，以HPV16型和52型(分別占27.3%和21.5%)出現(xiàn)頻率最高；HPV基因分型檢測(cè)聯(lián)合 TCT檢查(陽性率19.42%)診斷宮頸癌病變較病理學(xué)診斷(陽性率11.57%)敏感。但因某些患者為一過性HPV感染，不引起宮頸細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，發(fā)展為宮頸癌及CIN的概率較低，因此，HPV基因分型不能作為診斷宮頸病變的黃金標(biāo)準(zhǔn)，宮頸癌前病變以及宮頸癌仍需通過病理學(xué)檢查確診。此外，從HPV感染到宮頸癌前病變需5～20年，在此過程中，HPV感染者應(yīng)定期隨訪，并結(jié)合TCT檢查，以盡早發(fā)現(xiàn)宮頸病變。本研究中，在病理學(xué)檢查的陽性病例中，TCT及HPV基因分型檢測(cè)陽性率為89.86%，并且隨著宮頸病變程度的加深，TCT和HPV基因分型檢測(cè)的陽性率也呈上升趨勢(shì)。同時(shí)，在HPV檢測(cè)及TCT檢查均為陽性的標(biāo)本中，CIN檢出率為46.9%，HPV陽性而TCT陰性標(biāo)本中CIN檢出率為15.4%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HPV及TCT檢查均為陽性的標(biāo)本中宮頸癌檢出率為6.2%，HPV陽性而TCT陰性的標(biāo)本中宮頸癌檢出率為0，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。上述結(jié)果均表明，TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測(cè)能夠明顯提高CIN及宮頸癌的檢出率。

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